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基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-1852 | |||||||||
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タイトル | EM map of the negative stained SMG-1-8-9 complex. | |||||||||
![]() | This is the EM map of the negatively stained SMG-1-8-9 complex | |||||||||
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![]() | Nonsense-mediated mRNA decay / NMD / SMG-1 / SMG-8 / SMG-9 / SMG1C | |||||||||
機能・相同性 | nuclear-transcribed mRNA catabolic process, nonsense-mediated decay![]() | |||||||||
生物種 | ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / ネガティブ染色法 / 解像度: 24.0 Å | |||||||||
![]() | Arias-Palomo E / Yamashita A / Fernandez IS / Nunez-Ramirez R / Bamba Y / Izumi N / Ohno S / Llorca O | |||||||||
![]() | ![]() タイトル: The nonsense-mediated mRNA decay SMG-1 kinase is regulated by large-scale conformational changes controlled by SMG-8. 著者: Ernesto Arias-Palomo / Akio Yamashita / Israel S Fernández / Rafael Núñez-Ramírez / Yumi Bamba / Natsuko Izumi / Shigeo Ohno / Oscar Llorca / ![]() 要旨: Nonsense-mediated mRNA decay (NMD) is a eukaryotic surveillance pathway that regulates the degradation of mRNAs harboring premature translation termination codons. NMD also influences the expression ...Nonsense-mediated mRNA decay (NMD) is a eukaryotic surveillance pathway that regulates the degradation of mRNAs harboring premature translation termination codons. NMD also influences the expression of many physiological transcripts. SMG-1 is a large kinase essential to NMD that phosphorylates Upf1, which seems to be the definitive signal triggering mRNA decay. However, the regulation of the kinase activity of SMG-1 remains poorly understood. Here, we reveal the three-dimensional architecture of SMG-1 in complex with SMG-8 and SMG-9, and the structural mechanisms regulating SMG-1 kinase. A bent arm comprising a long region of HEAT (huntington, elongation factor 3, a subunit of PP2A and TOR1) repeats at the N terminus of SMG-1 functions as a scaffold for SMG-8 and SMG-9, and projects from the C-terminal core containing the phosphatidylinositol 3-kinase domain. SMG-9 seems to control the activity of SMG-1 indirectly through the recruitment of SMG-8 to the N-terminal HEAT repeat region of SMG-1. Notably, SMG-8 binding to the SMG-1:SMG-9 complex specifically down-regulates the kinase activity of SMG-1 on Upf1 without contacting the catalytic domain. Assembly of the SMG-1:SMG-8:SMG-9 complex induces a significant motion of the HEAT repeats that is signaled to the kinase domain. Thus, large-scale conformational changes induced by SMG-8 after SMG-9-mediated recruitment tune SMG-1 kinase activity to modulate NMD. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: ![]() ![]() ![]() |
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 213.9 KB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 11.3 KB 11.3 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 57.4 KB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 195.8 KB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 194.9 KB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 4.5 KB | 表示 | |
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-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
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注釈 | This is the EM map of the negatively stained SMG-1-8-9 complex | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 4.2 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
-全体 : Human SMG-1 kinase bound to SMG-9 and SMG-8
全体 | 名称: Human SMG-1 kinase bound to SMG-9 and SMG-8 |
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要素 |
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-超分子 #1000: Human SMG-1 kinase bound to SMG-9 and SMG-8
超分子 | 名称: Human SMG-1 kinase bound to SMG-9 and SMG-8 / タイプ: sample / ID: 1000 集合状態: One molecule of SMG-1 binds to one molecule of SMG-9 and one molecule of SMG-8 Number unique components: 3 |
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分子量 | 理論値: 580 KDa |
-分子 #1: SMG-1
分子 | 名称: SMG-1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / Name.synonym: SMG-1 / コピー数: 1 / 集合状態: Monomer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 410 KDa |
組換発現 | 生物種: 293T cells / 組換プラスミド: pEF_Flag-HA-SBP |
配列 | GO: nuclear-transcribed mRNA catabolic process, nonsense-mediated decay |
-分子 #2: SMG-9
分子 | 名称: SMG-9 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / Name.synonym: SMG-9 / コピー数: 1 / 集合状態: Monomer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 60 KDa |
組換発現 | 生物種: 293T Cells / 組換プラスミド: pSR_Strep-HA |
配列 | GO: nuclear-transcribed mRNA catabolic process, nonsense-mediated decay |
-分子 #3: SMG-8
分子 | 名称: SMG-8 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / Name.synonym: SMG-8 / コピー数: 1 / 集合状態: Monomer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 110 KDa |
組換発現 | 生物種: 293T Cells / 組換プラスミド: pSR_Strep-HA |
配列 | GO: nuclear-transcribed mRNA catabolic process, nonsense-mediated decay |
-実験情報
-構造解析
手法 | ネガティブ染色法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
緩衝液 | pH: 7.5 詳細: 10 mM HEPES-KOH at pH7.5, 150 mM NaCl, 20% glycerol, 10 mM MgCl2 |
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染色 | タイプ: NEGATIVE 詳細: Protein was adsorbed for 1 minute, washed in two water drops and stained with 2% w/v uranyl formate for 1 minute. |
グリッド | 詳細: 400 mesh copper grid |
凍結 | 凍結剤: NONE / 装置: OTHER |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | JEOL 1230 |
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温度 | 平均: 294 K |
アライメント法 | Legacy - 非点収差: Objective lens astigmatism was corrected at 80,000 times magnification |
詳細 | Microscope JEOL JEM-1230 |
撮影 | カテゴリ: FILM / フィルム・検出器のモデル: KODAK SO-163 FILM / デジタル化 - スキャナー: OTHER / デジタル化 - サンプリング間隔: 10.5 µm / 詳細: Minolta Dimage Scan Multi PRO scanner / ビット/ピクセル: 16 |
Tilt angle min | 0 |
電子線 | 加速電圧: 100 kV / 電子線源: TUNGSTEN HAIRPIN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.9 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 1.2 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.5 µm / 倍率(公称値): 50000 |
試料ステージ | 試料ホルダー: Side entry single tilt holder / 試料ホルダーモデル: JEOL / Tilt angle max: 20 |
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画像解析
詳細 | Particles were collected manually. |
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CTF補正 | 詳細: Each micrograph |
最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 24.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: EMAN, Xmipp / 使用した粒子像数: 13853 |