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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-15805 | ||||||||||||
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タイトル | RecBCD-DNA in complex with the phage protein Abc2 and host PpiB | ||||||||||||
マップデータ | Final CryoEM map of the RecBCD-Abc2-DNA complex bound to the host PpiB protein | ||||||||||||
試料 |
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キーワード | Homologous recombination / DNA repair / phage / Helicase / Nuclease / Inhibitor / Protein complex / Enzyme / DNA mimic / DNA BINDING PROTEIN | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 exodeoxyribonuclease V / exodeoxyribonuclease V activity / exodeoxyribonuclease V complex / clearance of foreign intracellular DNA / DNA 5'-3' helicase / single-stranded DNA helicase activity / DNA 3'-5' helicase / recombinational repair / 3'-5' DNA helicase activity / DNA helicase activity ...exodeoxyribonuclease V / exodeoxyribonuclease V activity / exodeoxyribonuclease V complex / clearance of foreign intracellular DNA / DNA 5'-3' helicase / single-stranded DNA helicase activity / DNA 3'-5' helicase / recombinational repair / 3'-5' DNA helicase activity / DNA helicase activity / isomerase activity / helicase activity / double-strand break repair via homologous recombination / response to radiation / 5'-3' DNA helicase activity / DNA recombination / DNA damage response / magnesium ion binding / ATP hydrolysis activity / DNA binding / ATP binding 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) / synthetic construct (人工物) / Salmonella phage P22 (ファージ) | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.8 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Wilkinson M / Wilkinson OJ / Feyerherm C / Fletcher EE / Wigley DB / Dillingham MS | ||||||||||||
資金援助 | 英国, 3件
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引用 | ジャーナル: Elife / 年: 2022 タイトル: Structures of RecBCD in complex with phage-encoded inhibitor proteins reveal distinctive strategies for evasion of a bacterial immunity hub. 著者: Martin Wilkinson / Oliver J Wilkinson / Connie Feyerherm / Emma E Fletcher / Dale B Wigley / Mark S Dillingham / 要旨: Following infection of bacterial cells, bacteriophage modulate double-stranded DNA break repair pathways to protect themselves from host immunity systems and prioritise their own recombinases. Here, ...Following infection of bacterial cells, bacteriophage modulate double-stranded DNA break repair pathways to protect themselves from host immunity systems and prioritise their own recombinases. Here, we present biochemical and structural analysis of two phage proteins, gp5.9 and Abc2, which target the DNA break resection complex RecBCD. These exemplify two contrasting mechanisms for control of DNA break repair in which the RecBCD complex is either inhibited or co-opted for the benefit of the invading phage. Gp5.9 completely inhibits RecBCD by preventing it from binding to DNA. The RecBCD-gp5.9 structure shows that gp5.9 acts by substrate mimicry, binding predominantly to the RecB arm domain and competing sterically for the DNA binding site. Gp5.9 adopts a parallel coiled-coil architecture that is unprecedented for a natural DNA mimic protein. In contrast, binding of Abc2 does not substantially affect the biochemical activities of isolated RecBCD. The RecBCD-Abc2 structure shows that Abc2 binds to the Chi-recognition domains of the RecC subunit in a position that might enable it to mediate the loading of phage recombinases onto its single-stranded DNA products. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_15805.map.gz | 43.9 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-15805-v30.xml emd-15805.xml | 28.6 KB 28.6 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_15805.png | 111.6 KB | ||
Filedesc metadata | emd-15805.cif.gz | 9.6 KB | ||
その他 | emd_15805_half_map_1.map.gz emd_15805_half_map_2.map.gz | 36.8 MB 36.8 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-15805 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-15805 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_15805_validation.pdf.gz | 1 MB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_15805_full_validation.pdf.gz | 1 MB | 表示 | |
XML形式データ | emd_15805_validation.xml.gz | 11.5 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_15805_validation.cif.gz | 13.4 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-15805 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-15805 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_15805.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 47.6 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Final CryoEM map of the RecBCD-Abc2-DNA complex bound to the host PpiB protein | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.06 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-ハーフマップ: halfmap1
ファイル | emd_15805_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | halfmap1 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: halfmap2
ファイル | emd_15805_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | halfmap2 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
+全体 : RecBCD-Abc2-PpiB-DNA complex
+超分子 #1: RecBCD-Abc2-PpiB-DNA complex
+超分子 #2: RecBCD enzyme subunits RecB, RecC and RecD
+超分子 #3: DNA (70-MER)
+超分子 #4: Anti-RecBCD protein 2
+分子 #1: RecBCD enzyme subunit RecB
+分子 #2: RecBCD enzyme subunit RecC
+分子 #3: RecBCD enzyme subunit RecD
+分子 #5: Anti-RecBCD protein 2
+分子 #4: DNA (70-MER)
+分子 #6: PHOSPHOAMINOPHOSPHONIC ACID-ADENYLATE ESTER
+分子 #7: MAGNESIUM ION
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.1 mg/mL | ||||||||||||||||||
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緩衝液 | pH: 7.5 構成要素:
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グリッド | モデル: C-flat-2/1 / 材質: COPPER / メッシュ: 400 / 支持フィルム - 材質: GRAPHENE OXIDE 詳細: Mixture of graphene oxide with 0.3 mM DDM detergent applied directly to grids twice before application of sample | ||||||||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 90 % / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: 1.5s blot time. | ||||||||||||||||||
詳細 | RecBCD-Abc2 mixed with 1.5x molar excess of synthesised DNA substrate, 2 mM ADPNP and 5 mM MgCl2 prior to making grids |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 2500 / 平均露光時間: 12.0 sec. / 平均電子線量: 56.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.4 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.2 µm / 倍率(公称値): 130000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |