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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 9ene | ||||||||||||
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タイトル | Human pseudouridine synthase 3 (PUS3 D118A mutant) and two tRNA-Arg | ||||||||||||
要素 |
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キーワード | RNA BINDING PROTEIN / RNA modification / pseudouridylation / tRNA / homodimer | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 tRNA pseudouridine38/39 synthase / tRNA pseudouridine(38/39) synthase activity / mRNA pseudouridine synthesis / tRNA pseudouridine synthesis / pseudouridine synthase activity / tRNA modification in the nucleus and cytosol / tRNA modification / RNA binding / nucleus / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.15 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Lin, T.-Y. / Jezowski, J. / Glatt, S. | ||||||||||||
資金援助 | ポーランド, European Union, スイス, 3件
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引用 | ジャーナル: Mol Cell / 年: 2024 タイトル: The molecular basis of tRNA selectivity by human pseudouridine synthase 3. 著者: Ting-Yu Lin / Leon Kleemann / Jakub Jeżowski / Dominika Dobosz / Michał Rawski / Paulina Indyka / Grzegorz Ważny / Rahul Mehta / Andrzej Chramiec-Głąbik / Łukasz Koziej / Tristan Ranff ...著者: Ting-Yu Lin / Leon Kleemann / Jakub Jeżowski / Dominika Dobosz / Michał Rawski / Paulina Indyka / Grzegorz Ważny / Rahul Mehta / Andrzej Chramiec-Głąbik / Łukasz Koziej / Tristan Ranff / Christian Fufezan / Mateusz Wawro / Jakub Kochan / Joanna Bereta / Sebastian A Leidel / Sebastian Glatt / 要旨: Pseudouridine (Ψ), the isomer of uridine, is ubiquitously found in RNA, including tRNA, rRNA, and mRNA. Human pseudouridine synthase 3 (PUS3) catalyzes pseudouridylation of position 38/39 in tRNAs. ...Pseudouridine (Ψ), the isomer of uridine, is ubiquitously found in RNA, including tRNA, rRNA, and mRNA. Human pseudouridine synthase 3 (PUS3) catalyzes pseudouridylation of position 38/39 in tRNAs. However, the molecular mechanisms by which it recognizes its RNA targets and achieves site specificity remain elusive. Here, we determine single-particle cryo-EM structures of PUS3 in its apo form and bound to three tRNAs, showing how the symmetric PUS3 homodimer recognizes tRNAs and positions the target uridine next to its active site. Structure-guided and patient-derived mutations validate our structural findings in complementary biochemical assays. Furthermore, we deleted PUS1 and PUS3 in HEK293 cells and mapped transcriptome-wide Ψ sites by Pseudo-seq. Although PUS1-dependent sites were detectable in tRNA and mRNA, we found no evidence that human PUS3 modifies mRNAs. Our work provides the molecular basis for PUS3-mediated tRNA modification in humans and explains how its tRNA modification activity is linked to intellectual disabilities. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 9ene.cif.gz | 224.1 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb9ene.ent.gz | 172.2 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 9ene.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 9ene_validation.pdf.gz | 1.2 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 9ene_full_validation.pdf.gz | 1.2 MB | 表示 | |
XML形式データ | 9ene_validation.xml.gz | 39.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 9ene_validation.cif.gz | 58.6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/en/9ene ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/en/9ene | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 19832MC 8okdC 9enbC 9encC 9enfC 9f9qC C: 同じ文献を引用 (文献) M: このデータのモデリングに利用したマップデータ |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 55681.207 Da / 分子数: 2 / 変異: D118A / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: D118A single mutation / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: PUS3, FKSG32 発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) 参照: UniProt: Q9BZE2, tRNA pseudouridine38/39 synthase #2: RNA鎖 | 分子量: 24472.488 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Homo sapiens (ヒト) |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 |
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分子量 | 値: 0.16 MDa / 実験値: NO | ||||||||||||||||||||||||
由来(天然) |
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由来(組換発現) |
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緩衝液 | pH: 7.5 | ||||||||||||||||||||||||
試料 | 濃度: 0.3 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | ||||||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/1 | ||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 277 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: TFS KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 105000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 1500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 900 nm / Cs: 2.7 mm |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 40 e/Å2 フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 8736 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 3192624 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C2 (2回回転対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.15 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 74761 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: OTHER / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | Source name: AlphaFold / タイプ: in silico model |