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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8fzf | ||||||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of an E. coli rotated ribosome complex bound with RF3-ppGpp and p/E-tRNAPhe (Composite state I-C) | ||||||||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME/RNA / release factor 3 / termination complex / cryo-EM / tRNA / RIBOSOME / RIBOSOME-RNA complex | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 regulation of translational termination / translation release factor activity, codon nonspecific / translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / guanosine tetraphosphate binding / stringent response / positive regulation of ribosome biogenesis / translational termination / DnaA-L2 complex / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation ...regulation of translational termination / translation release factor activity, codon nonspecific / translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / guanosine tetraphosphate binding / stringent response / positive regulation of ribosome biogenesis / translational termination / DnaA-L2 complex / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / negative regulation of translational initiation / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / ribosome assembly / assembly of large subunit precursor of preribosome / cytosolic ribosome assembly / transcription antitermination / translational initiation / regulation of cell growth / DNA-templated transcription termination / maintenance of translational fidelity / mRNA 5'-UTR binding / GDP binding / ribosomal small subunit biogenesis / large ribosomal subunit / small ribosomal subunit rRNA binding / ribosome binding / ribosomal small subunit assembly / ribosomal large subunit assembly / small ribosomal subunit / transferase activity / large ribosomal subunit rRNA binding / 5S rRNA binding / cytosolic small ribosomal subunit / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / response to antibiotic / GTPase activity / mRNA binding / GTP binding / RNA binding / zinc ion binding / membrane / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) Escherichia coli K-12 (大腸菌) Escherichia phage T4 (ファージ) | ||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Rybak, M.Y. / Li, L. / Lin, J. / Gagnon, M.G. | ||||||||||||
資金援助 | 米国, 中国, 3件
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引用 | ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2024 タイトル: The ribosome termination complex remodels release factor RF3 and ejects GDP. 著者: Li Li / Mariia Yu Rybak / Jinzhong Lin / Matthieu G Gagnon / 要旨: Translation termination involves release factors RF1, RF2 and the GTPase RF3 that recycles RF1 and RF2 from the ribosome. RF3 dissociates from the ribosome in the GDP-bound form and must then ...Translation termination involves release factors RF1, RF2 and the GTPase RF3 that recycles RF1 and RF2 from the ribosome. RF3 dissociates from the ribosome in the GDP-bound form and must then exchange GDP for GTP. The 70S ribosome termination complex (70S-TC) accelerates GDP exchange in RF3, suggesting that the 70S-TC can function as the guanine nucleotide exchange factor for RF3. Here, we use cryogenic-electron microscopy to elucidate the mechanism of GDP dissociation from RF3 catalyzed by the Escherichia coli 70S-TC. The non-rotated ribosome bound to RF1 remodels RF3 and induces a peptide flip in the phosphate-binding loop, efficiently ejecting GDP. Binding of GTP allows RF3 to dock at the GTPase center, promoting the dissociation of RF1 from the ribosome. The structures recapitulate the functional cycle of RF3 on the ribosome and uncover the mechanism by which the 70S-TC allosterically dismantles the phosphate-binding groove in RF3, a previously overlooked function of the ribosome. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8fzf.cif.gz | 3.3 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8fzf.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 8fzf.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8fzf_validation.pdf.gz | 1.9 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8fzf_full_validation.pdf.gz | 2 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8fzf_validation.xml.gz | 226.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8fzf_validation.cif.gz | 386.1 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/fz/8fzf ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/fz/8fzf | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 29624MC 8fzdC 8fzeC 8fzgC 8fzhC 8fziC 8fzjC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-RNA鎖 , 5種, 5分子 axzAB
#1: RNA鎖 | 分子量: 499873.406 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1758835854 |
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#22: RNA鎖 | 分子量: 24644.873 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: phenylalanyl-tRNA / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / プラスミド: pBSTNAV-tRNAPhe / 発現宿主: Escherichia coli HB101 (大腸菌) / 参照: GenBank: 1850831943 |
#23: RNA鎖 | 分子量: 6792.157 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: Synthetic 21-nt F-UAA mRNA / 由来: (合成) Escherichia phage T4 (ファージ) |
#25: RNA鎖 | 分子量: 941811.562 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 |
#26: RNA鎖 | 分子量: 38814.113 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1817378070 |
-30S ribosomal protein ... , 16種, 16分子 bcdefghjklmprstu
#2: タンパク質 | 分子量: 26795.695 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: J7QM75 |
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#3: タンパク質 | 分子量: 26031.316 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MCS9 |
#4: タンパク質 | 分子量: 23514.199 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: P0A7V8 |
#5: タンパク質 | 分子量: 17629.398 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: P0A7W1 |
#6: タンパク質 | 分子量: 15211.058 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SFQ7 |
#7: タンパク質 | 分子量: 17637.445 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: P02359 |
#8: タンパク質 | 分子量: 14146.557 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7XKZ3 |
#10: タンパク質 | 分子量: 11755.597 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: V0ANK5 |
#11: タンパク質 | 分子量: 13871.959 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0H3PWX2 |
#12: タンパク質 | 分子量: 13814.249 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0F1AUC4 |
#13: タンパク質 | 分子量: 13128.467 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A7U9IV78 |
#16: タンパク質 | 分子量: 9207.572 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SYP2 |
#18: タンパク質 | 分子量: 9005.472 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2KXL3 |
#19: タンパク質 | 分子量: 10455.355 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: S1EA57 |
#20: タンパク質 | 分子量: 9708.464 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3TRH7 |
#21: タンパク質 | 分子量: 8524.039 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2L2J1 |
-Small ribosomal subunit protein ... , 4種, 4分子 inoq
#9: タンパク質 | 分子量: 14886.270 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SRY2 |
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#14: タンパク質 | 分子量: 11606.560 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A2X1PQW4 |
#15: タンパク質 | 分子量: 10290.816 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SSQ7 |
#17: タンパク質 | 分子量: 9724.491 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SQY7 |
-タンパク質 , 2種, 2分子 vT
#24: タンパク質 | 分子量: 59651.934 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: Release factor 3 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 遺伝子: prfC, miaD, tos, b4375, JW5873 / プラスミド: pET28-SMT3-RF3 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A7I4 |
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#42: タンパク質 | 分子量: 11586.374 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SSG2 |
+50S ribosomal protein ... , 26種, 26分子 CDEFGIJLMNOQRSUVWXYZ134678
-Large ribosomal subunit protein ... , 3種, 3分子 P25
#38: タンパク質 | 分子量: 14393.657 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SR72 |
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#50: タンパク質 | 分子量: 6554.820 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SR32 |
#53: タンパク質 | 分子量: 6388.631 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SME7 |
-非ポリマー , 4種, 483分子
#57: 化合物 | ChemComp-MG / #58: 化合物 | ChemComp-G4P / | #59: 化合物 | #60: 水 | ChemComp-HOH / | |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | N |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Cryo-EM structure of an E. coli rotated ribosome complex bound with RF3-ppGpp and p/E-tRNAPhe (Composite state I-C) タイプ: RIBOSOME / Entity ID: #1-#56 / 由来: NATURAL |
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分子量 | 値: 2.6 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 |
緩衝液 | pH: 7.4 詳細: 5 mM Tris-HCl, 60 mM NH4Cl, 10 mM MgCl2, 6 mM B-mercaptoethanol |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
試料支持 | グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 200 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/1 |
急速凍結 | 装置: LEICA EM GP / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 85 % / 凍結前の試料温度: 295 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: TFS KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 96000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1000 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 1 sec. / 電子線照射量: 40 e/Å2 / 検出モード: INTEGRATING フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 10284 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 920422 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 33348 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 7K00 Accession code: 7K00 / Source name: PDB / タイプ: experimental model | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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