ジャーナル: Science / 年: 2022 タイトル: Structural basis of human telomerase recruitment by TPP1-POT1. 著者: Zala Sekne / George E Ghanim / Anne-Marie M van Roon / Thi Hoang Duong Nguyen / 要旨: Telomerase maintains genome stability by extending the 3' telomeric repeats at eukaryotic chromosome ends, thereby counterbalancing progressive loss caused by incomplete genome replication. In ...Telomerase maintains genome stability by extending the 3' telomeric repeats at eukaryotic chromosome ends, thereby counterbalancing progressive loss caused by incomplete genome replication. In mammals, telomerase recruitment to telomeres is mediated by TPP1, which assembles as a heterodimer with POT1. We report structures of DNA-bound telomerase in complex with TPP1 and with TPP1-POT1 at 3.2- and 3.9-angstrom resolution, respectively. Our structures define interactions between telomerase and TPP1-POT1 that are crucial for telomerase recruitment to telomeres. The presence of TPP1-POT1 stabilizes the DNA, revealing an unexpected path by which DNA exits the telomerase active site and a DNA anchor site on telomerase that is important for telomerase processivity. Our findings rationalize extensive prior genetic and biochemical findings and provide a framework for future mechanistic work on telomerase regulation.
平均露光時間: 3 sec. / 電子線照射量: 48 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 3 / 実像数: 50775 詳細: Images were collected in movie-mode and fractionated into 48 movie frames
電子光学装置
エネルギーフィルター名称: GIF Quantum LS / エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV
画像スキャン
横: 5760 / 縦: 4092
-
解析
ソフトウェア
名称: REFMAC / バージョン: 5.8.0256 / 分類: 精密化
EMソフトウェア
ID
名称
バージョン
カテゴリ
2
EPU
2.13.0.3175REL
画像取得
4
CTFFIND
4
CTF補正
7
UCSF ChimeraX
モデルフィッティング
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UCSF Chimera
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Coot
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REFMAC
5.8
モデル精密化
12
RELION
4
初期オイラー角割当
13
RELION
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最終オイラー角割当
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RELION
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分類
15
RELION
4
3次元再構成
CTF補正
タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択
選択した粒子像数: 18744992
対称性
点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成
解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 144043 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT
解像度: 3.2→164.59 Å / Cor.coef. Fo:Fc: 0.898 / SU B: 19.998 / SU ML: 0.302 / ESU R: 0.376 立体化学のターゲット値: MAXIMUM LIKELIHOOD WITH PHASES 詳細: HYDROGENS HAVE BEEN ADDED IN THE RIDING POSITIONS
Rfactor
反射数
%反射
Rwork
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obs
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181810
100 %
溶媒の処理
イオンプローブ半径: 0.8 Å / 減衰半径: 0.8 Å / VDWプローブ半径: 1.2 Å / 溶媒モデル: MASK