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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 7nwi | ||||||
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タイトル | Mammalian pre-termination 80S ribosome with Empty-A site bound by Blasticidin S | ||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME / Inhibitor 80S Termination Complex Blasticidin S Translation NMD | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 Formation of the ternary complex, and subsequently, the 43S complex / Formation of a pool of free 40S subunits / SRP-dependent cotranslational protein targeting to membrane / Major pathway of rRNA processing in the nucleolus and cytosol / Nonsense Mediated Decay (NMD) independent of the Exon Junction Complex (EJC) / Nonsense Mediated Decay (NMD) enhanced by the Exon Junction Complex (EJC) / Translation initiation complex formation / Ribosomal scanning and start codon recognition / L13a-mediated translational silencing of Ceruloplasmin expression / GTP hydrolysis and joining of the 60S ribosomal subunit ...Formation of the ternary complex, and subsequently, the 43S complex / Formation of a pool of free 40S subunits / SRP-dependent cotranslational protein targeting to membrane / Major pathway of rRNA processing in the nucleolus and cytosol / Nonsense Mediated Decay (NMD) independent of the Exon Junction Complex (EJC) / Nonsense Mediated Decay (NMD) enhanced by the Exon Junction Complex (EJC) / Translation initiation complex formation / Ribosomal scanning and start codon recognition / L13a-mediated translational silencing of Ceruloplasmin expression / GTP hydrolysis and joining of the 60S ribosomal subunit / Major pathway of rRNA processing in the nucleolus and cytosol / GTP hydrolysis and joining of the 60S ribosomal subunit / L13a-mediated translational silencing of Ceruloplasmin expression / SRP-dependent cotranslational protein targeting to membrane / Formation of a pool of free 40S subunits / Nonsense Mediated Decay (NMD) independent of the Exon Junction Complex (EJC) / Nonsense Mediated Decay (NMD) enhanced by the Exon Junction Complex (EJC) / regulation of G1 to G0 transition / laminin receptor activity / positive regulation of intrinsic apoptotic signaling pathway in response to DNA damage by p53 class mediator / regulation of translation involved in cellular response to UV / protein-DNA complex disassembly / positive regulation of DNA damage response, signal transduction by p53 class mediator resulting in transcription of p21 class mediator / G1 to G0 transition / positive regulation of signal transduction by p53 class mediator / ubiquitin ligase inhibitor activity / phagocytic cup / 90S preribosome / cellular response to actinomycin D / negative regulation of ubiquitin-dependent protein catabolic process / ribosomal small subunit export from nucleus / translation regulator activity / laminin binding / rough endoplasmic reticulum / gastrulation / MDM2/MDM4 family protein binding / maturation of LSU-rRNA / DNA damage response, signal transduction by p53 class mediator resulting in cell cycle arrest / translation initiation factor binding / cytosolic ribosome / maturation of LSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, 5.8S rRNA, LSU-rRNA) / class I DNA-(apurinic or apyrimidinic site) endonuclease activity / DNA-(apurinic or apyrimidinic site) lyase / rescue of stalled ribosome / ribosomal large subunit biogenesis / maturation of SSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, 5.8S rRNA, LSU-rRNA) / maturation of SSU-rRNA / positive regulation of translation / small-subunit processome / protein kinase C binding / positive regulation of apoptotic signaling pathway / positive regulation of protein-containing complex assembly / cellular response to gamma radiation / mRNA 5'-UTR binding / transcription coactivator binding / spindle / cytoplasmic ribonucleoprotein granule / rRNA processing / ribosomal small subunit biogenesis / antimicrobial humoral immune response mediated by antimicrobial peptide / rhythmic process / positive regulation of canonical Wnt signaling pathway / small ribosomal subunit rRNA binding / ribosome binding / regulation of translation / heparin binding / ribosomal small subunit assembly / virus receptor activity / small ribosomal subunit / 5S rRNA binding / large ribosomal subunit rRNA binding / cytosolic small ribosomal subunit / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / perikaryon / cytosolic large ribosomal subunit / defense response to Gram-negative bacterium / postsynapse / killing of cells of another organism / tRNA binding / mitochondrial inner membrane / postsynaptic density / cell differentiation / protein stabilization / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / positive regulation of protein phosphorylation / translation / cell division / DNA repair / mRNA binding / centrosome / positive regulation of cell population proliferation / ubiquitin protein ligase binding / dendrite / synapse / positive regulation of gene expression / negative regulation of apoptotic process 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Oryctolagus cuniculus (ウサギ) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.13 Å | ||||||
データ登録者 | Powers, K.T. / Yadav, S.K.N. / Bufton, J.C. / Schaffitzel, C. | ||||||
資金援助 | 英国, 1件
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引用 | ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2021 タイトル: Blasticidin S inhibits mammalian translation and enhances production of protein encoded by nonsense mRNA. 著者: Kyle T Powers / Flint Stevenson-Jones / Sathish K N Yadav / Beate Amthor / Joshua C Bufton / Ufuk Borucu / Dakang Shen / Jonas P Becker / Daria Lavysh / Matthias W Hentze / Andreas E Kulozik ...著者: Kyle T Powers / Flint Stevenson-Jones / Sathish K N Yadav / Beate Amthor / Joshua C Bufton / Ufuk Borucu / Dakang Shen / Jonas P Becker / Daria Lavysh / Matthias W Hentze / Andreas E Kulozik / Gabriele Neu-Yilik / Christiane Schaffitzel / 要旨: Deciphering translation is of paramount importance for the understanding of many diseases, and antibiotics played a pivotal role in this endeavour. Blasticidin S (BlaS) targets translation by binding ...Deciphering translation is of paramount importance for the understanding of many diseases, and antibiotics played a pivotal role in this endeavour. Blasticidin S (BlaS) targets translation by binding to the peptidyl transferase center of the large ribosomal subunit. Using biochemical, structural and cellular approaches, we show here that BlaS inhibits both translation elongation and termination in Mammalia. Bound to mammalian terminating ribosomes, BlaS distorts the 3'CCA tail of the P-site tRNA to a larger extent than previously reported for bacterial ribosomes, thus delaying both, peptide bond formation and peptidyl-tRNA hydrolysis. While BlaS does not inhibit stop codon recognition by the eukaryotic release factor 1 (eRF1), it interferes with eRF1's accommodation into the peptidyl transferase center and subsequent peptide release. In human cells, BlaS inhibits nonsense-mediated mRNA decay and, at subinhibitory concentrations, modulates translation dynamics at premature termination codons leading to enhanced protein production. | ||||||
履歴 |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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PDBx/mmCIF形式 | 7nwi.cif.gz | 7.8 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb7nwi.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 7nwi.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
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文書・要旨 | 7nwi_validation.pdf.gz | 1.8 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 7nwi_full_validation.pdf.gz | 2 MB | 表示 | |
XML形式データ | 7nwi_validation.xml.gz | 350.9 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 7nwi_validation.cif.gz | 618 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/nw/7nwi ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/nw/7nwi | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
+タンパク質 , 32種, 32分子 ABFHLOPQSTVXacdefhkorstEEKKOOQQRRTTUUVVff
-60S ribosomal protein ... , 14種, 14分子 CDEGIRUWZbgimn
#3: タンパク質 | 分子量: 47727.559 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
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#4: タンパク質 | 分子量: 34481.828 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SYJ6 |
#5: タンパク質 | 分子量: 33055.297 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SKF7 |
#7: タンパク質 | 分子量: 27480.555 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1STW0 |
#9: タンパク質 | 分子量: 24643.057 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: B7NZQ2 |
#17: タンパク質 | 分子量: 23535.281 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: Q3T0W9 |
#20: タンパク質 | 分子量: 14784.962 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: Q4R5I3 |
#22: タンパク質 | 分子量: 15538.256 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: A0A061I3X8 |
#25: タンパク質 | 分子量: 15704.635 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TXF6 |
#27: タンパク質 | 分子量: 26708.707 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
#32: タンパク質 | 分子量: 14210.088 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1U945 |
#34: タンパク質 | 分子量: 13546.292 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
#38: タンパク質 | 分子量: 14695.310 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: A0A6P4TG29 |
#39: タンパク質・ペプチド | 分子量: 3213.075 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: A0A087WNH4 |
-Ribosomal protein ... , 15種, 15分子 JMNYjlpFFHHNNSSWWXXddgg
#10: タンパク質 | 分子量: 20670.904 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
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#12: タンパク質 | 分子量: 23870.549 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SZ12 |
#13: タンパク質 | 分子量: 24076.088 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1T0C1 |
#24: タンパク質 | 分子量: 15891.787 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SQH0 |
#35: タンパク質 | 分子量: 11111.032 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: U3KPD5 |
#37: タンパク質・ペプチド | 分子量: 6295.562 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SYU7 |
#41: タンパク質 | 分子量: 10168.153 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SY53 |
#50: タンパク質 | 分子量: 23044.650 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TFM5 |
#52: タンパク質 | 分子量: 21716.387 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SVB0 |
#58: タンパク質 | 分子量: 17128.191 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SP51 |
#63: タンパク質 | 分子量: 16170.774 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TPG3 |
#67: タンパク質 | 分子量: 15778.584 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
#68: タンパク質 | 分子量: 15626.392 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SZ47 |
#74: タンパク質 | 分子量: 6364.426 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1U7M4 |
#77: タンパク質 | 分子量: 34669.113 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SJB4 |
-40S ribosomal protein ... , 16種, 16分子 AABBCCDDGGIIJJLLMMPPYYZZaabbccee
#45: タンパク質 | 分子量: 32927.988 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TLT8 |
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#46: タンパク質 | 分子量: 29942.010 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: P97351 |
#47: タンパク質 | 分子量: 27956.623 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: O55214 |
#48: タンパク質 | 分子量: 31146.607 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) 参照: UniProt: G1TNM3, DNA-(apurinic or apyrimidinic site) lyase |
#51: タンパク質 | 分子量: 30070.432 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: A0A6G1APX9 |
#53: タンパク質 | 分子量: 24003.012 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TJW1 |
#54: タンパク質 | 分子量: 22655.590 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: A0A1S3APZ1 |
#56: タンパク質 | 分子量: 18468.826 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TRM4 |
#57: タンパク質 | 分子量: 13766.122 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1SFR8 |
#60: タンパク質 | 分子量: 17049.182 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1U0Q2 |
#69: タンパク質 | 分子量: 17007.125 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
#70: タンパク質 | 分子量: 13581.994 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TDB3 |
#71: タンパク質 | 分子量: 13147.561 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: T0M5X4 |
#72: タンパク質 | 分子量: 9480.186 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TZ76 |
#73: タンパク質 | 分子量: 7776.891 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1TIB4 |
#75: タンパク質 | 分子量: 14498.884 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: UniProt: G1T8A2 |
-タンパク質・ペプチド , 1種, 1分子 1
#78: タンパク質・ペプチド | 分子量: 1788.032 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
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-RNA鎖 , 6種, 6分子 25789K
#79: RNA鎖 | 分子量: 24436.551 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
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#80: RNA鎖 | 分子量: 1226739.500 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
#81: RNA鎖 | 分子量: 38691.914 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: GenBank: 4CXE_4 |
#82: RNA鎖 | 分子量: 50143.648 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) / 参照: GenBank: 4CXE_3 |
#83: RNA鎖 | 分子量: 573221.562 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
#84: RNA鎖 | 分子量: 3225.980 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
-非ポリマー , 3種, 216分子
#85: 化合物 | ChemComp-MG / #86: 化合物 | ChemComp-ZN / #87: 化合物 | ChemComp-BLS / | |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Mammalian pre-termination 80S ribosome with Empty-A site bound by Blasticidin S タイプ: RIBOSOME 詳細: Rabbit reticulocyte lysate derived (in vitro transcription-FLAG affinity purified) ribosomal complex. Entity ID: #1-#2, #4-#8, #10-#14, #16-#20, #22-#31, #33-#34, #36-#37, #39, #42-#79 由来: NATURAL |
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分子量 | 値: 3.8 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Oryctolagus cuniculus (ウサギ) |
緩衝液 | pH: 7.4 詳細: 50 mM HEPES pH 7.4 100 mM KOAc 5 mM Mg(Oac)2 1mM DTT |
試料 | 濃度: 0.63 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: 165nM (OD260nm~10.5) |
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/2 |
急速凍結 | 装置: LEICA EM GP / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 70 % / 凍結前の試料温度: 288.15 K 詳細: 30s sample incubation on grid followed by 1.1s blotting time. |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TALOS ARCTICA 詳細: Collected in super-resolution mode (0.675A pixel size) |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 200 kV / 照射モード: OTHER |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(補正後): 79000 X / Calibrated defocus min: 400 nm / 最大 デフォーカス(補正後): 2000 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 100 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 8 sec. / 電子線照射量: 41.92 e/Å2 / 検出モード: SUPER-RESOLUTION フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 3500 |
画像スキャン | 動画フレーム数/画像: 40 |
-解析
ソフトウェア |
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EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 730463 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.13 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 103842 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: RIGID BODY FIT | ||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 3JAH | ||||||||||||||||||||||||||||||||
精密化 | 立体化学のターゲット値: GeoStd + Monomer Library | ||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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