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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 5u9g | |||||||||
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タイトル | 3.2 A cryo-EM ArfA-RF2 ribosome rescue complex (Structure I) | |||||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME / ARFA RF2 ribosome rescue complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / stringent response / ribosomal large subunit binding / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / transcriptional attenuation ...translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / stringent response / ribosomal large subunit binding / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / transcriptional attenuation / endoribonuclease inhibitor activity / RNA-binding transcription regulator activity / positive regulation of ribosome biogenesis / negative regulation of cytoplasmic translation / translational termination / four-way junction DNA binding / DnaA-L2 complex / translation repressor activity / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / negative regulation of translational initiation / regulation of mRNA stability / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / ribosome assembly / rescue of stalled ribosome / assembly of large subunit precursor of preribosome / positive regulation of RNA splicing / transcription elongation factor complex / cytosolic ribosome assembly / regulation of DNA-templated transcription elongation / DNA endonuclease activity / response to reactive oxygen species / transcription antitermination / regulation of cell growth / translational initiation / DNA-templated transcription termination / maintenance of translational fidelity / response to radiation / mRNA 5'-UTR binding / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / large ribosomal subunit / ribosome biogenesis / ribosome binding / regulation of translation / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / 5S rRNA binding / large ribosomal subunit rRNA binding / transferase activity / cytosolic small ribosomal subunit / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / molecular adaptor activity / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / viral translational frameshifting / response to antibiotic / negative regulation of DNA-templated transcription / mRNA binding / DNA binding / RNA binding / zinc ion binding / membrane / metal ion binding / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Escherichia coli K-12 (大腸菌) Escherichia coli (大腸菌) | |||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å | |||||||||
データ登録者 | Demo, G. / Svidritskiy, E. / Madireddy, R. / Diaz-Avalos, R. / Grant, T. / Grigorieff, N. / Sousa, D. / Korostelev, A.A. | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Elife / 年: 2017 タイトル: Mechanism of ribosome rescue by ArfA and RF2. 著者: Gabriel Demo / Egor Svidritskiy / Rohini Madireddy / Ruben Diaz-Avalos / Timothy Grant / Nikolaus Grigorieff / Duncan Sousa / Andrei A Korostelev / 要旨: ArfA rescues ribosomes stalled on truncated mRNAs by recruiting release factor RF2, which normally binds stop codons to catalyze peptide release. We report two 3.2 Å resolution cryo-EM structures - ...ArfA rescues ribosomes stalled on truncated mRNAs by recruiting release factor RF2, which normally binds stop codons to catalyze peptide release. We report two 3.2 Å resolution cryo-EM structures - determined from a single sample - of the 70S ribosome with ArfA•RF2 in the A site. In both states, the ArfA C-terminus occupies the mRNA tunnel downstream of the A site. One state contains a compact inactive RF2 conformation. Ordering of the ArfA N-terminus in the second state rearranges RF2 into an extended conformation that docks the catalytic GGQ motif into the peptidyl-transferase center. Our work thus reveals the structural dynamics of ribosome rescue. The structures demonstrate how ArfA 'senses' the vacant mRNA tunnel and activates RF2 to mediate peptide release without a stop codon, allowing stalled ribosomes to be recycled. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 5u9g.cif.gz | 3.8 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb5u9g.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 5u9g.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 5u9g_validation.pdf.gz | 1.4 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 5u9g_full_validation.pdf.gz | 1.7 MB | 表示 | |
XML形式データ | 5u9g_validation.xml.gz | 259.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 5u9g_validation.cif.gz | 427.6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/u9/5u9g ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/u9/5u9g | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-RNA鎖 , 5種, 6分子 A0102XWV
#1: RNA鎖 | 分子量: 498725.406 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 944404559 | ||
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#2: RNA鎖 | 分子量: 941322.188 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 42756 | ||
#3: RNA鎖 | 分子量: 38483.926 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1072784372 | ||
#5: RNA鎖 | 分子量: 24802.785 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1114191980 #38: RNA鎖 | | 分子量: 4597.844 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Escherichia coli (大腸菌) |
-タンパク質 , 2種, 2分子 YZ
#4: タンパク質 | 分子量: 8190.438 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: arfA, yhdL, b4550, JW3253 / 発現宿主: Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 参照: UniProt: P36675 |
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#39: タンパク質 | 分子量: 41300.660 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: prfB, supK, b2891, JW5847 / 発現宿主: Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 参照: UniProt: P07012 |
+50S ribosomal protein ... , 32種, 32分子 0304050607080910111213141516171819202122232425262728293031323334
-30S ribosomal protein ... , 20種, 20分子 BCDEFGHIJKLMNOPQRSTU
#40: タンパク質 | 分子量: 26781.670 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZK99, UniProt: P0A7V0*PLUS |
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#41: タンパク質 | 分子量: 26031.316 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MCS9, UniProt: P0A7V3*PLUS |
#42: タンパク質 | 分子量: 23514.199 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9H7, UniProt: P0A7V8*PLUS |
#43: タンパク質 | 分子量: 17629.398 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9H2, UniProt: P0A7W1*PLUS |
#44: タンパク質 | 分子量: 15211.058 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZI17, UniProt: P02358*PLUS |
#45: タンパク質 | 分子量: 17637.445 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZAN1, UniProt: P02359*PLUS |
#46: タンパク質 | 分子量: 14146.557 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9G9, UniProt: P0A7W7*PLUS |
#47: タンパク質 | 分子量: 14886.270 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZES9, UniProt: P0A7X3*PLUS |
#48: タンパク質 | 分子量: 11755.597 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9F4, UniProt: P0A7R5*PLUS |
#49: タンパク質 | 分子量: 13870.975 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MCR3, UniProt: P0A7R9*PLUS |
#50: タンパク質 | 分子量: 13768.157 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZAN0, UniProt: P0A7S3*PLUS |
#51: タンパク質 | 分子量: 13128.467 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: H4UQ02, UniProt: P0A7S9*PLUS |
#52: タンパク質 | 分子量: 11606.560 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9G8, UniProt: P0AG59*PLUS |
#53: タンパク質 | 分子量: 10290.816 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZEL4, UniProt: P0ADZ4*PLUS |
#54: タンパク質 | 分子量: 9207.572 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MIU7, UniProt: P0A7T3*PLUS |
#55: タンパク質 | 分子量: 9724.491 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9G4, UniProt: P0AG63*PLUS |
#56: タンパク質 | 分子量: 9005.472 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2KXL3, UniProt: P0A7T7*PLUS |
#57: タンパク質 | 分子量: 10455.355 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9F9, UniProt: P0A7U3*PLUS |
#58: タンパク質 | 分子量: 9708.464 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZAS2, UniProt: P0A7U7*PLUS |
#59: タンパク質 | 分子量: 8524.039 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2L2J1, UniProt: P68679*PLUS |
-非ポリマー , 2種, 349分子
#60: 化合物 | ChemComp-MG / #61: 化合物 | ChemComp-ZN / | |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: ArfA-RF2 ribosome rescue complex (Structure I) / タイプ: RIBOSOME / Entity ID: #1-#59 / 由来: MULTIPLE SOURCES | ||||||||||||||||||||||||||||||
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分子量 | 値: 2.5 MDa / 実験値: NO | ||||||||||||||||||||||||||||||
由来(天然) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 | ||||||||||||||||||||||||||||||
由来(組換発現) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: K-12 | ||||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7 | ||||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | ||||||||||||||||||||||||||||||
試料支持 | 詳細: Using a Solarus 950 plasma cleaning system. The forward RF target was set to 7w. グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 200 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-2/2 | ||||||||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 29000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 500 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 1.2 e/Å2 / 検出モード: COUNTING フィルム・検出器のモデル: DIRECT ELECTRON DE-20 (5k x 3k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 3760 |
画像スキャン | 動画フレーム数/画像: 54 / 利用したフレーム数/画像: 2-27 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 539311 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 139861 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | B value: 100 / プロトコル: OTHER / 空間: REAL / Target criteria: Correlation coefficient |