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基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 5o9z | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of a pre-catalytic human spliceosome primed for activation (B complex) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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![]() | SPLICING / Spliceosome / pre-mRNA splicing / macromolecular complex | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
機能・相同性 | ![]() microfibril / Lsm2-8 complex / U6 snRNA 3'-end binding / spliceosomal snRNP complex / ribonucleoprotein complex localization / U4atac snRNP / positive regulation of cytotoxic T cell differentiation / maturation of 5S rRNA / RNA localization / U4atac snRNA binding ...microfibril / Lsm2-8 complex / U6 snRNA 3'-end binding / spliceosomal snRNP complex / ribonucleoprotein complex localization / U4atac snRNP / positive regulation of cytotoxic T cell differentiation / maturation of 5S rRNA / RNA localization / U4atac snRNA binding / mRNA decay by 5' to 3' exoribonuclease / Lsm1-7-Pat1 complex / box C/D sno(s)RNA binding / U11/U12 snRNP / U6 snRNP / PH domain binding / U2 snRNP binding / U7 snRNA binding / histone pre-mRNA DCP binding / U7 snRNP / dense fibrillar component / histone pre-mRNA 3'end processing complex / cis assembly of pre-catalytic spliceosome / SLBP independent Processing of Histone Pre-mRNAs / SLBP Dependent Processing of Replication-Dependent Histone Pre-mRNAs / box C/D methylation guide snoRNP complex / B-WICH complex / spliceosome conformational change to release U4 (or U4atac) and U1 (or U11) / U4/U6 snRNP / protein methylation / U12-type spliceosomal complex / protein localization to kinetochore / 7-methylguanosine cap hypermethylation / RNA splicing, via transesterification reactions / U1 snRNP binding / sno(s)RNA-containing ribonucleoprotein complex / methylosome / pICln-Sm protein complex / U2-type catalytic step 1 spliceosome / U4 snRNA binding / snRNP binding / small nuclear ribonucleoprotein complex / splicing factor binding / SMN-Sm protein complex / P granule / proline-rich region binding / spliceosomal tri-snRNP complex / U2-type precatalytic spliceosome / telomerase holoenzyme complex / U2-type spliceosomal complex / telomerase RNA binding / commitment complex / mRNA cis splicing, via spliceosome / U2-type prespliceosome assembly / U2-type catalytic step 2 spliceosome / box C/D snoRNP assembly / SAGA complex / U4 snRNP / U2 snRNP / RNA Polymerase II Transcription Termination / P-body assembly / U1 snRNP / U3 snoRNA binding / U2-type prespliceosome / positive regulation of transcription by RNA polymerase III / tRNA processing / rRNA modification in the nucleus and cytosol / K63-linked polyubiquitin modification-dependent protein binding / precatalytic spliceosome / cyclosporin A binding / mitotic spindle assembly checkpoint signaling / regulation of alternative mRNA splicing, via spliceosome / spliceosomal complex assembly / positive regulation of transcription by RNA polymerase I / regulation of RNA splicing / mRNA catabolic process / mRNA Splicing - Minor Pathway / nuclear-transcribed mRNA catabolic process / MLL1 complex / spliceosomal tri-snRNP complex assembly / U5 snRNA binding / U5 snRNP / U2 snRNA binding / single fertilization / U6 snRNA binding / pre-mRNA intronic binding / Major pathway of rRNA processing in the nucleolus and cytosol / spliceosomal snRNP assembly / RNA processing / ribonucleoprotein complex binding / positive regulation of viral genome replication / Cajal body / U1 snRNA binding / regulation of DNA repair / U4/U6 x U5 tri-snRNP complex / catalytic step 2 spliceosome / Gene and protein expression by JAK-STAT signaling after Interleukin-12 stimulation / mRNA Splicing - Major Pathway / RNA splicing / peptidylprolyl isomerase 類似検索 - 分子機能 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
生物種 | ![]() | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.5 Å | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
![]() | Bertram, K. / Kastner, B. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Cryo-EM Structure of a Pre-catalytic Human Spliceosome Primed for Activation. 著者: Karl Bertram / Dmitry E Agafonov / Olexandr Dybkov / David Haselbach / Majety N Leelaram / Cindy L Will / Henning Urlaub / Berthold Kastner / Reinhard Lührmann / Holger Stark / ![]() 要旨: Little is known about the spliceosome's structure before its extensive remodeling into a catalytically active complex. Here, we report a 3D cryo-EM structure of a pre-catalytic human spliceosomal B ...Little is known about the spliceosome's structure before its extensive remodeling into a catalytically active complex. Here, we report a 3D cryo-EM structure of a pre-catalytic human spliceosomal B complex. The U2 snRNP-containing head domain is connected to the B complex main body via three main bridges. U4/U6.U5 tri-snRNP proteins, which are located in the main body, undergo significant rearrangements during tri-snRNP integration into the B complex. These include formation of a partially closed Prp8 conformation that creates, together with Dim1, a 5' splice site (ss) binding pocket, displacement of Sad1, and rearrangement of Brr2 such that it contacts its U4/U6 substrate and is poised for the subsequent spliceosome activation step. The molecular organization of several B-specific proteins suggests that they are involved in negatively regulating Brr2, positioning the U6/5'ss helix, and stabilizing the B complex structure. Our results indicate significant differences between the early activation phase of human and yeast spliceosomes. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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集合体
登録構造単位 | ![]()
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1 |
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要素
-タンパク質 , 15種, 17分子 ABGIJKLMNOPQRfmXy
#1: タンパク質 | 分子量: 273974.250 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
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#2: タンパク質 | 分子量: 109560.625 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#7: タンパク質 | 分子量: 107092.242 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#9: タンパク質 | 分子量: 37563.863 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#10: タンパク質 | 分子量: 16807.346 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#11: タンパク質 | 分子量: 52050.527 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#12: タンパク質 | 分子量: 57616.742 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#13: タンパク質 | 分子量: 19230.117 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#14: タンパク質 | 分子量: 23664.047 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#15: タンパク質 | 分子量: 14191.524 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#16: タンパク質 | 分子量: 90414.117 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#17: タンパク質 | 分子量: 42575.801 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#18: タンパク質 | 分子量: 65731.508 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() | ||
#24: タンパク質 | 分子量: 24642.131 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() #36: タンパク質 | | 分子量: 12427.524 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-U5 small nuclear ribonucleoprotein ... , 2種, 2分子 CD
#3: タンパク質 | 分子量: 244823.422 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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#4: タンパク質 | 分子量: 39359.492 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein ... , 3種, 3分子 EFH
#5: タンパク質 | 分子量: 77669.188 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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#6: タンパク質 | 分子量: 58407.980 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#8: タンパク質 | 分子量: 55528.969 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-Small nuclear ribonucleoprotein ... , 6種, 18分子 ahSbiTcjUdkVelWgnZ
#19: タンパク質 | 分子量: 13551.928 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() #20: タンパク質 | 分子量: 9734.171 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() #21: タンパク質 | 分子量: 10817.601 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() #22: タンパク質 | 分子量: 8508.084 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() #23: タンパク質 | 分子量: 13940.308 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() #25: タンパク質 | 分子量: 13310.653 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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-U6 snRNA-associated Sm-like protein ... , 7種, 7分子 opqrstu
#26: タンパク質 | 分子量: 10847.495 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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#27: タンパク質 | 分子量: 11859.390 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#28: タンパク質 | 分子量: 15375.775 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#29: タンパク質 | 分子量: 9945.448 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#30: タンパク質 | 分子量: 9139.571 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#31: タンパク質 | 分子量: 11617.363 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#32: タンパク質 | 分子量: 10410.589 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-Splicing factor 3B subunit ... , 3種, 3分子 vwx
#33: タンパク質 | 分子量: 146024.938 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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#34: タンパク質 | 分子量: 135718.844 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#35: タンパク質 | 分子量: 10149.369 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-U2 small nuclear ribonucleoprotein ... , 2種, 2分子 z1
#37: タンパク質 | 分子量: 28631.766 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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#38: タンパク質 | 分子量: 25524.367 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-RNA鎖 , 2種, 2分子 Y2
#39: RNA鎖 | 分子量: 103979.148 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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#40: RNA鎖 | 分子量: 60186.445 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-Homo sapiens ... , 3種, 3分子 456
#41: RNA鎖 | 分子量: 46528.465 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
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#42: RNA鎖 | 分子量: 36908.668 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
#43: RNA鎖 | 分子量: 34098.270 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() |
-詳細
Has protein modification | N |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
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試料調製
構成要素 | 名称: Human B Complex Spliceosome, sharpened map, masked refinement タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: NATURAL |
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分子量 | 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: ![]() |
緩衝液 | pH: 7.9 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE / 湿度: 80 % / 凍結前の試料温度: 277 K |
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電子顕微鏡撮影
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: ![]() |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / Cs: 0.01 mm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 0.05 sec. / 電子線照射量: 1.5 e/Å2 フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k) |
画像スキャン | サンプリングサイズ: 14 µm / 横: 4096 / 縦: 4096 / 動画フレーム数/画像: 17 / 利用したフレーム数/画像: 2-17 |
-
解析
画像処理 | 詳細: FALCON III Direct Electron Detector |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION |
3次元再構成 | 解像度: 4.5 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 44629 / 対称性のタイプ: POINT |
原子モデル構築 | 空間: REAL |