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- PDB-5jul: Near atomic structure of the Dark apoptosome -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 5jul
タイトルNear atomic structure of the Dark apoptosome
要素Apaf-1 related killer DARK
キーワードAPOPTOSIS / Dark / apoptosome / apotosis / AAA+ ATPase
機能・相同性
機能・相同性情報


negative regulation of humoral immune response / positive regulation of glial cell apoptotic process / Formation of apoptosome / salivary gland histolysis / positive regulation of compound eye retinal cell programmed cell death / melanization defense response / sarcosine catabolic process / Activation of caspases through apoptosome-mediated cleavage / Regulation of the apoptosome activity / central nervous system formation ...negative regulation of humoral immune response / positive regulation of glial cell apoptotic process / Formation of apoptosome / salivary gland histolysis / positive regulation of compound eye retinal cell programmed cell death / melanization defense response / sarcosine catabolic process / Activation of caspases through apoptosome-mediated cleavage / Regulation of the apoptosome activity / central nervous system formation / chaeta development / sperm individualization / apoptosome / autophagic cell death / Neutrophil degranulation / S-adenosylmethionine cycle / CARD domain binding / programmed cell death / triglyceride homeostasis / dendrite morphogenesis / response to starvation / cysteine-type endopeptidase activator activity involved in apoptotic process / response to gamma radiation / ADP binding / neuron cellular homeostasis / positive regulation of apoptotic process / ATP binding / identical protein binding
類似検索 - 分子機能
APAF-1 helical domain / APAF-1 helical domain / NB-ARC / NB-ARC domain / WD40 repeats / WD40 repeat / WD40-repeat-containing domain superfamily / Winged helix-like DNA-binding domain superfamily / WD40/YVTN repeat-like-containing domain superfamily / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
2'-DEOXYADENOSINE 5'-TRIPHOSPHATE / Apaf-1 related killer DARK
類似検索 - 構成要素
生物種Drosophila melanogaster (キイロショウジョウバエ)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.4 Å
データ登録者Cheng, T.C. / Akey, I.V. / Yuan, S. / Yu, Z. / Ludtke, S.J. / Akey, C.W.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)RO1 GM63834 米国
引用ジャーナル: Structure / 年: 2017
タイトル: A Near-Atomic Structure of the Dark Apoptosome Provides Insight into Assembly and Activation.
著者: Tat Cheung Cheng / Ildikó V Akey / Shujun Yuan / Zhiheng Yu / Steven J Ludtke / Christopher W Akey /
要旨: In Drosophila, the Apaf-1-related killer (Dark) forms an apoptosome that activates procaspases. To investigate function, we have determined a near-atomic structure of Dark double rings using cryo- ...In Drosophila, the Apaf-1-related killer (Dark) forms an apoptosome that activates procaspases. To investigate function, we have determined a near-atomic structure of Dark double rings using cryo-electron microscopy. We then built a nearly complete model of the apoptosome that includes 7- and 8-blade β-propellers. We find that the preference for dATP during Dark assembly may be governed by Ser325, which is in close proximity to the 2' carbon of the deoxyribose ring. Interestingly, β-propellers in V-shaped domains of the Dark apoptosome are more widely separated, relative to these features in the Apaf-1 apoptosome. This wider spacing may be responsible for the lack of cytochrome c binding to β-propellers in the Dark apoptosome. Our structure also highlights the roles of two loss-of-function mutations that may block Dark assembly. Finally, the improved model provides a framework to understand apical procaspase activation in the intrinsic cell death pathway.
履歴
登録2016年5月10日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02017年2月22日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12017年9月27日Group: Author supporting evidence / カテゴリ: pdbx_audit_support / Item: _pdbx_audit_support.funding_organization
改定 1.22018年7月18日Group: Data collection / Experimental preparation / カテゴリ: em_sample_support / Item: _em_sample_support.grid_type
改定 1.32019年12月25日Group: Author supporting evidence / カテゴリ: pdbx_audit_support / Item: _pdbx_audit_support.funding_organization

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構造の表示

ムービー
  • 登録構造単位
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • EMマップとの重ね合わせ
  • マップデータ: EMDB-8177
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Apaf-1 related killer DARK
B: Apaf-1 related killer DARK
C: Apaf-1 related killer DARK
D: Apaf-1 related killer DARK
E: Apaf-1 related killer DARK
F: Apaf-1 related killer DARK
G: Apaf-1 related killer DARK
H: Apaf-1 related killer DARK
I: Apaf-1 related killer DARK
J: Apaf-1 related killer DARK
K: Apaf-1 related killer DARK
L: Apaf-1 related killer DARK
M: Apaf-1 related killer DARK
N: Apaf-1 related killer DARK
O: Apaf-1 related killer DARK
P: Apaf-1 related killer DARK
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)2,665,95532
ポリマ－2,658,09616
非ポリマー7,85916
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: タンパク質
Apaf-1 related killer DARK / Apaf-1/CED-4-related caspase activator Dapaf-1L / Cell death protein HAC-1 / Death-associated APAF1- ...Apaf-1/CED-4-related caspase activator Dapaf-1L / Cell death protein HAC-1 / Death-associated APAF1-related killer / isoform B / FI21208p1


分子量: 166131.000 Da / 分子数: 16 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Drosophila melanogaster (キイロショウジョウバエ)
遺伝子: Dark, Ark, Ark-RB, dapaf-1L, Hac1, CG6829, Dmel_CG6829
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: Q7KLI1
#2: 化合物
ChemComp-DTP / 2'-DEOXYADENOSINE 5'-TRIPHOSPHATE / dATP


分子量: 491.182 Da / 分子数: 16 / 由来タイプ: 合成 / 式: C10H16N5O12P3

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Dark apoptosome / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1 / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 2.3 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: Drosophila melanogaster (キイロショウジョウバエ)
由来(組換発現)生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
プラスミド: pFastBac
緩衝液pH: 7.5 / 詳細: Buffer A
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
110 mMHepes1
220 mMpotassium chlorideKCl1
31 mMEDTA1
41 mMEGTA1
51.5 mMmagnesium chlorideMg2Cl21
試料濃度: 2 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK III / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 293 K
詳細: 2.5ul sample blot additives present at the indicated final concentrations: NP-40 (0.025%), DHPG (diheptanoylphosphatidylglycerol; 0.05%), cytochrome c (0.5 mg/ml), DeoxybigChaps (0.01%), and lysine (0.03 mg/ml)

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 81000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2400 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1500 nm / Cs: 0.01 mm / C2レンズ絞り径: 100 µm / アライメント法: COMA FREE
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 0.3 sec. / 電子線照射量: 1.8 e/Å2 / 検出モード: COUNTING
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1991
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF / 球面収差補正装置: FEI Cs corrector
画像スキャン横: 7476 / 縦: 7420 / 動画フレーム数/画像: 23 / 利用したフレーム数/画像: 2-23

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1e2boxer粒子像選択
2SerialEM画像取得
4CTFFIND3CTF補正
7MDFFモデルフィッティング
9RELION1.3初期オイラー角割当
10RELION1.3最終オイラー角割当
11RELION1.3分類
12RELION1.3３次元再構成
19PHENIXモデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 88485
対称性点対称性: D8 (2回x8回 2面回転対称)
3次元再構成解像度: 4.4 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 17769 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: FLEXIBLE FIT
詳細: local fitting with Chimera followed by flexible fitting with MDFF and refinement with Phenix.

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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