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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-7851 | |||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of RAG in complex with melted 12-RSS and unmelted 23-RSS substrates | |||||||||
マップデータ | RAG in complex with 12-RSS and 23-RSS substrate DNAs | |||||||||
試料 |
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キーワード | V(D)J recombination / RAG complex / Melted RSS / Unmelted RSS / Recombination-DNA complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 somatic diversification of immune receptors via germline recombination within a single locus / hematopoietic or lymphoid organ development / protein-DNA complex assembly / DNA recombinase complex / endodeoxyribonuclease complex / immunoglobulin V(D)J recombination / lymphocyte differentiation / V(D)J recombination / phosphatidylinositol-3,4-bisphosphate binding / phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate binding ...somatic diversification of immune receptors via germline recombination within a single locus / hematopoietic or lymphoid organ development / protein-DNA complex assembly / DNA recombinase complex / endodeoxyribonuclease complex / immunoglobulin V(D)J recombination / lymphocyte differentiation / V(D)J recombination / phosphatidylinositol-3,4-bisphosphate binding / phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate binding / detection of maltose stimulus / maltose transport complex / maltose binding / carbohydrate transport / phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate binding / maltose transport / maltodextrin transmembrane transport / T cell differentiation / carbohydrate transmembrane transporter activity / ATP-binding cassette (ABC) transporter complex, substrate-binding subunit-containing / phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate binding / methylated histone binding / B cell differentiation / ATP-binding cassette (ABC) transporter complex / phosphatidylinositol binding / cell chemotaxis / thymus development / RING-type E3 ubiquitin transferase / ubiquitin-protein transferase activity / ubiquitin protein ligase activity / chromatin organization / outer membrane-bounded periplasmic space / histone binding / T cell differentiation in thymus / endonuclease activity / DNA recombination / sequence-specific DNA binding / adaptive immune response / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / periplasmic space / DNA damage response / chromatin binding / magnesium ion binding / protein homodimerization activity / DNA binding / zinc ion binding / membrane / nucleus / metal ion binding 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Danio rerio (ゼブラフィッシュ) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.29 Å | |||||||||
データ登録者 | Wu H / Liao M | |||||||||
資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2018 タイトル: DNA melting initiates the RAG catalytic pathway. 著者: Heng Ru / Wei Mi / Pengfei Zhang / Frederick W Alt / David G Schatz / Maofu Liao / Hao Wu / 要旨: The mechanism for initiating DNA cleavage by DDE-family enzymes, including the RAG endonuclease, which initiates V(D)J recombination, is not well understood. Here we report six cryo-EM structures of ...The mechanism for initiating DNA cleavage by DDE-family enzymes, including the RAG endonuclease, which initiates V(D)J recombination, is not well understood. Here we report six cryo-EM structures of zebrafish RAG in complex with one or two intact recombination signal sequences (RSSs), at up to 3.9-Å resolution. Unexpectedly, these structures reveal DNA melting at the heptamer of the RSSs, thus resulting in a corkscrew-like rotation of coding-flank DNA and the positioning of the scissile phosphate in the active site. Substrate binding is associated with dimer opening and a piston-like movement in RAG1, first outward to accommodate unmelted DNA and then inward to wedge melted DNA. These precleavage complexes show limited base-specific contacts of RAG at the conserved terminal CAC/GTG sequence of the heptamer, thus suggesting conservation based on a propensity to unwind. CA and TG overwhelmingly dominate terminal sequences in transposons and retrotransposons, thereby implicating a universal mechanism for DNA melting during the initiation of retroviral integration and DNA transposition. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_7851.map.gz | 22.3 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-7851-v30.xml emd-7851.xml | 22 KB 22 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_7851.png | 64.4 KB | ||
Filedesc metadata | emd-7851.cif.gz | 7.1 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-7851 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-7851 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_7851_validation.pdf.gz | 553.8 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_7851_full_validation.pdf.gz | 553.4 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_7851_validation.xml.gz | 5.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_7851_validation.cif.gz | 6.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-7851 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-7851 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 6dbvMC 7843C 7844C 7845C 7846C 7847C 7848C 7849C 7850C 7852C 7853C 6dbiC 6dbjC 6dblC 6dboC 6dbqC 6dbrC 6dbtC 6dbuC 6dbwC 6dbxC C: 同じ文献を引用 (文献) M: このマップから作成された原子モデル |
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類似構造データ |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_7851.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 27 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | RAG in complex with 12-RSS and 23-RSS substrate DNAs | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.238 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
+全体 : RAG in complex with 12-RSS and 23-RSS substrate DNAs
+超分子 #1: RAG in complex with 12-RSS and 23-RSS substrate DNAs
+分子 #1: Recombination activating gene 1 - MBP chimera
+分子 #2: Recombination activating gene 2
+分子 #3: Recombination activating gene 1 - MBP chimera
+分子 #4: Forward strand of 12-RSS substrate DNA
+分子 #5: Reverse strand of 12-RSS substrate DNA
+分子 #6: Forward strand of 23-RSS substrate DNA
+分子 #7: Reverse strand of 23-RSS substrate DNA
+分子 #8: ZINC ION
+分子 #9: CALCIUM ION
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7.5 構成要素:
詳細: Solutions were made fresh from concentrated to avoid microbial contamination. | |||||||||||||||
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凍結 | 凍結剤: ETHANE | |||||||||||||||
詳細 | This sample was monodisperse. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI POLARA 300 |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 平均電子線量: 47.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD |
実験機器 | モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
初期モデル | モデルのタイプ: NONE |
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最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.29 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 45159 |
初期 角度割当 | タイプ: PROJECTION MATCHING |
最終 角度割当 | タイプ: PROJECTION MATCHING |