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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-7350 | |||||||||
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タイトル | CryoEM structure of E.coli RNA polymerase elongation complex bound with RfaH | |||||||||
マップデータ | primary map | |||||||||
試料 |
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キーワード | RNAP / elongation complex / anti-pausing / TRANSCRIPTION / transcription-dna-rna complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 regulatory RNA binding / transcription antitermination factor activity, DNA binding / translation activator activity / DNA-templated transcription elongation / transcription elongation-coupled chromatin remodeling / RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex ...regulatory RNA binding / transcription antitermination factor activity, DNA binding / translation activator activity / DNA-templated transcription elongation / transcription elongation-coupled chromatin remodeling / RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / bacterial-type flagellum assembly / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / transcription elongation factor complex / regulation of DNA-templated transcription elongation / positive regulation of translation / DNA-templated transcription initiation / transcription antitermination / cell motility / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / response to heat / protein-containing complex assembly / intracellular iron ion homeostasis / protein dimerization activity / response to antibiotic / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / membrane / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) / Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.5 Å | |||||||||
データ登録者 | Kang JY / Darst SA | |||||||||
資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: Cell / 年: 2018 タイトル: Structural Basis for Transcript Elongation Control by NusG Family Universal Regulators. 著者: Jin Young Kang / Rachel Anne Mooney / Yuri Nedialkov / Jason Saba / Tatiana V Mishanina / Irina Artsimovitch / Robert Landick / Seth A Darst / 要旨: NusG/RfaH/Spt5 transcription elongation factors are the only transcription regulators conserved across all life. Bacterial NusG regulates RNA polymerase (RNAP) elongation complexes (ECs) across most ...NusG/RfaH/Spt5 transcription elongation factors are the only transcription regulators conserved across all life. Bacterial NusG regulates RNA polymerase (RNAP) elongation complexes (ECs) across most genes, enhancing elongation by suppressing RNAP backtracking and coordinating ρ-dependent termination and translation. The NusG paralog RfaH engages the EC only at operon polarity suppressor (ops) sites and suppresses both backtrack and hairpin-stabilized pausing. We used single-particle cryoelectron microscopy (cryo-EM) to determine structures of ECs at ops with NusG or RfaH. Both factors chaperone base-pairing of the upstream duplex DNA to suppress backtracking, explaining stimulation of elongation genome-wide. The RfaH-opsEC structure reveals how RfaH confers operon specificity through specific recognition of an ops hairpin in the single-stranded nontemplate DNA and tighter binding to the EC to exclude NusG. Tight EC binding by RfaH sterically blocks the swiveled RNAP conformation necessary for hairpin-stabilized pausing. The universal conservation of NusG/RfaH/Spt5 suggests that the molecular mechanisms uncovered here are widespread. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_7350.map.gz | 59.9 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-7350-v30.xml emd-7350.xml | 25 KB 25 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_7350.png | 204.7 KB | ||
Filedesc metadata | emd-7350.cif.gz | 8.8 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-7350 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-7350 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_7350_validation.pdf.gz | 577 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_7350_full_validation.pdf.gz | 576.6 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_7350_validation.xml.gz | 6.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_7350_validation.cif.gz | 6.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-7350 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-7350 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_7350.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | primary map | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.3 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
+全体 : E.coli RfaH-elongation complex
+超分子 #1: E.coli RfaH-elongation complex
+分子 #1: DNA (29-MER)
+分子 #2: DNA (29-MER)
+分子 #3: RNA (5'-R(*GP*CP*AP*UP*UP*CP*AP*AP*AP*GP*CP*CP*GP*AP*GP*AP*GP*GP*...
+分子 #4: DNA-directed RNA polymerase subunit alpha
+分子 #5: DNA-directed RNA polymerase subunit beta
+分子 #6: DNA-directed RNA polymerase subunit beta'
+分子 #7: DNA-directed RNA polymerase subunit omega
+分子 #8: Transcription antitermination protein RfaH
+分子 #9: MAGNESIUM ION
+分子 #10: ZINC ION
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 5 mg/mL | |||||||||||||||
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緩衝液 | pH: 8 構成要素:
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グリッド | モデル: C-flat-1.2/1.3 4C / 材質: GOLD / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 15 sec. | |||||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 295.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 3-50 / 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 3495 / 平均露光時間: 15.0 sec. / 平均電子線量: 71.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 70.0 µm / 最大 デフォーカス(補正後): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(補正後): 0.5 µm / 倍率(補正後): 38462 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.4 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT |
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得られたモデル | PDB-6c6t: |