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- EMDB-22680: Structure of T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-22680
タイトルStructure of T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel
マップデータPost-process map from Relion-3.0
試料
  • 複合体: Multisubunit T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel with 6x copies of Gp15 and 6x copies of Gp16
    • タンパク質・ペプチド: Internal virion protein gp15
    • タンパク質・ペプチド: Peptidoglycan transglycosylase gp16
  • リガンド: water
キーワードT7 / ejectosome / ejection protein / genome-delivery / podoviridae / VIRAL PROTEIN
機能・相同性
機能・相同性情報


symbiont genome ejection through host cell envelope / host cell periplasmic space / : / symbiont entry into host cell via disruption of host cell wall peptidoglycan / lytic transglycosylase activity / symbiont genome ejection through host cell envelope, short tail mechanism / symbiont entry into host cell via disruption of host cell envelope / peptidoglycan metabolic process / symbiont entry into host / virion component ...symbiont genome ejection through host cell envelope / host cell periplasmic space / : / symbiont entry into host cell via disruption of host cell wall peptidoglycan / lytic transglycosylase activity / symbiont genome ejection through host cell envelope, short tail mechanism / symbiont entry into host cell via disruption of host cell envelope / peptidoglycan metabolic process / symbiont entry into host / virion component / killing of cells of another organism / hydrolase activity / defense response to bacterium / host cell plasma membrane / membrane
類似検索 - 分子機能
Internal virion protein Gp16 / Internal virion protein Gp15 / Prokaryotic transglycosylase, active site / Prokaryotic transglycosylases signature. / Transglycosylase SLT domain 1 / Transglycosylase SLT domain / Lysozyme-like domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Internal virion protein gp15 / Peptidoglycan transglycosylase gp16
類似検索 - 構成要素
生物種Escherichia phage T7 (ファージ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.7 Å
データ登録者Swanson N / Cingolani G
資金援助 米国, 1件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM100888 米国
引用ジャーナル: Mol Cell / 年: 2021
タイトル: Cryo-EM structure of the periplasmic tunnel of T7 DNA-ejectosome at 2.7 Å resolution.
著者: Nicholas A Swanson / Ravi K Lokareddy / Fenglin Li / Chun-Feng David Hou / Sebastian Leptihn / Mikhail Pavlenok / Michael Niederweis / Ruth A Pumroy / Vera Y Moiseenkova-Bell / Gino Cingolani /
要旨: Hershey and Chase used bacteriophage T2 genome delivery inside Escherichia coli to demonstrate that DNA, not protein, is the genetic material. Seventy years later, our understanding of viral genome ...Hershey and Chase used bacteriophage T2 genome delivery inside Escherichia coli to demonstrate that DNA, not protein, is the genetic material. Seventy years later, our understanding of viral genome delivery in prokaryotes remains limited, especially for short-tailed phages of the Podoviridae family. These viruses expel mysterious ejection proteins found inside the capsid to form a DNA-ejectosome for genome delivery into bacteria. Here, we reconstitute the phage T7 DNA-ejectosome components gp14, gp15, and gp16 and solve the periplasmic tunnel structure at 2.7 Å resolution. We find that gp14 forms an outer membrane pore, gp15 assembles into a 210 Å hexameric DNA tube spanning the host periplasm, and gp16 extends into the host cytoplasm forming a ∼4,200 residue hub. Gp16 promotes gp15 oligomerization, coordinating peptidoglycan hydrolysis, DNA binding, and lipid insertion. The reconstituted gp15:gp16 complex lacks channel-forming activity, suggesting that the pore for DNA passage forms only transiently during genome ejection.
履歴
登録2020年9月16日-
ヘッダ(付随情報) 公開2021年7月28日-
マップ公開2021年7月28日-
更新2024年5月29日-
現状2024年5月29日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.025
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.025
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-7k5c
  • 表面レベル: 0.025
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_22680.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_22680.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 166.4 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Post-process map from Relion-3.0
ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.08 Å
密度
表面レベルBy EMDB: 0.0267 / ムービー #1: 0.025
最小 - 最大-0.17808002 - 0.2799669
平均 (標準偏差)-0.0000007178213 (±0.0076619512)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ352352352
Spacing352352352
セルA=B=C: 380.16 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.081.081.08
M x/y/z352352352
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z380.160380.160380.160
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ1331310
NX/NY/NZ223226424
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS352352352
D min/max/mean-0.1780.280-0.000

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : Multisubunit T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel with 6x copies ...

全体名称: Multisubunit T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel with 6x copies of Gp15 and 6x copies of Gp16
要素
  • 複合体: Multisubunit T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel with 6x copies of Gp15 and 6x copies of Gp16
    • タンパク質・ペプチド: Internal virion protein gp15
    • タンパク質・ペプチド: Peptidoglycan transglycosylase gp16
  • リガンド: water

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超分子 #1: Multisubunit T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel with 6x copies ...

超分子名称: Multisubunit T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel with 6x copies of Gp15 and 6x copies of Gp16
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#2
由来(天然)生物種: Escherichia phage T7 (ファージ)
分子量理論値: 590 KDa

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分子 #1: Internal virion protein gp15

分子名称: Internal virion protein gp15 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 6 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Escherichia phage T7 (ファージ)
分子量理論値: 84.454008 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MSKIESALQA AQPGLSRLRG GAGGMGYRAA TTQAEQPRSS LLDTIGRFAK AGADMYTAKE QRARDLADER SNEIIRKLTP EQRREALNN GTLLYQDDPY AMEALRVKTG RNAAYLVDDD VMQKIKEGVF RTREEMEEYR HSRLQEGAKV YAEQFGIDPE D VDYQRGFN ...文字列:
MSKIESALQA AQPGLSRLRG GAGGMGYRAA TTQAEQPRSS LLDTIGRFAK AGADMYTAKE QRARDLADER SNEIIRKLTP EQRREALNN GTLLYQDDPY AMEALRVKTG RNAAYLVDDD VMQKIKEGVF RTREEMEEYR HSRLQEGAKV YAEQFGIDPE D VDYQRGFN GDITERNISL YGAHDNFLSQ QAQKGAIMNS RVELNGVLQD PDMLRRPDSA DFFEKYIDNG LVTGAIPSDA QA TQLISQA FSDASSRAGG ADFLMRVGDK KVTLNGATTT YRELIGEEQW NALMVTAQRS QFETDAKLNE QYRLKINSAL NQE DPRTAW EMLQGIKAEL DKVQPDEQMT PQREWLISAQ EQVQNQMNAW TKAQAKALDD SMKSMNKLDV IDKQFQKRIN GEWV STDFK DMPVNENTGE FKHSDMVNYA NKKLAEIDSM DIPDGAKDAM KLKYLQADSK DGAFRTAIGT MVTDAGQEWS AAVIN GKLP ERTPAMDALR RIRNADPQLI AALYPDQAEL FLTMDMMDKQ GIDPQVILDA DRLTVKRSKE QRFEDDKAFE SALNAS KAP EIARMPASLR ESARKIYDSV KYRSGNESMA MEQMTKFLKE STYTFTGDDV DGDTVGVIPK NMMQVNSDPK SWEQGRD IL EEARKGIIAS NPWITNKQLT MYSQGDSIYL MDTTGQVRVR YDKELLSKVW SENQKKLEEK AREKALADVN KRAPIVAA T KAREAAAKRV REKRKQTPKF IYGRKE

UniProtKB: Internal virion protein gp15

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分子 #2: Peptidoglycan transglycosylase gp16

分子名称: Peptidoglycan transglycosylase gp16 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 6 / 光学異性体: LEVO
EC番号: 付加脱離酵素（リアーゼ）; 炭素-酸素リアーゼ類; 多糖に作用する
由来(天然)生物種: Escherichia phage T7 (ファージ)
分子量理論値: 144.028219 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MDKYDKNVPS DYDGLFQKAA DANGVSYDLL RKVAWTESRF VPTAKSKTGP LGMMQFTKAT AKALGLRVTD GPDDDRLNPE LAINAAAKQ LAGLVGKFDG DELKAALAYN QGEGRLGNPQ LEAYSKGDFA SISEEGRNYM RNLLDVAKSP MAGQLETFGG I TPKGKGIP ...文字列:
MDKYDKNVPS DYDGLFQKAA DANGVSYDLL RKVAWTESRF VPTAKSKTGP LGMMQFTKAT AKALGLRVTD GPDDDRLNPE LAINAAAKQ LAGLVGKFDG DELKAALAYN QGEGRLGNPQ LEAYSKGDFA SISEEGRNYM RNLLDVAKSP MAGQLETFGG I TPKGKGIP AEVGLAGIGH KQKVTQELPE STSFDVKGIE QEATAKPFAK DFWETHGETL DEYNSRSTFF GFKNAAEAEL SN SVAGMAF RAGRLDNGFD VFKDTITPTR WNSHIWTPEE LEKIRTEVKN PAYINVVTGG SPENLDDLIK LANENFENDS RAA EAGLGA KLSAGIIGAG VDPLSYVPMV GVTGKGFKLI NKALVVGAES AALNVASEGL RTSVAGGDAD YAGAALGGFV FGAG MSAIS DAVAAGLKRS KPEAEFDNEF IGPMMRLEAR ETARNANSAD LSRMNTENMK FEGEHNGVPY EDLPTERGAV VLHDG SVLS ASNPINPKTL KEFSEVDPEK AARGIKLAGF TEIGLKTLGS DDADIRRVAI DLVRSPTGMQ SGASGKFGAT ASDIHE RLH GTDQRTYNDL YKAMSDAMKD PEFSTGGAKM SREETRYTIY RRAALAIERP ELQKALTPSE RIVMDIIKRH FDTKREL ME NPAIFGNTKA VSIFPESRHK GTYVPHVYDR HAKALMIQRY GAEGLQEGIA RSWMNSYVSR PEVKARVDEM LKELHGVK E VTPEMVEKYA MDKAYGISHS DQFTNSSIIE ENIEGLVGIE NNSFLEARNL FDSDLSITMP DGQQFSVNDL RDFDMFRIM PAYDRRVNGD IAIMGSTGKT TKELKDEILA LKAKAEGDGK KTGEVHALMD TVKILTGRAR RNQDTVWETS LRAINDLGFF AKNAYMGAQ NITEIAGMIV TGNVRALGHG IPILRDTLYK SKPVSAKELK ELHASLFGKE VDQLIRPKRA DIVQRLREAT D TGPAVANI VGTLKYSTQE LAARSPWTKL LNGTTNYLLD AARQGMLGDV ISATLTGKTT RWEKEGFLRG ASVTPEQMAG IK SLIKEHM VRGEDGKFTV KDKQAFSMDP RAMDLWRLAD KVADEAMLRP HKVSLQDSHA FGALGKMVMQ FKSFTIKSLN SKF LRTFYD GYKNNRAIDA ALSIITSMGL AGGFYAMAAH VKAYALPKEK RKEYLERALD PTMIAHAALS RSSQLGAPLA MVDL VGGVL GFESSKMARS TILPKDTVKE RDPNKPYTSR EVMGAMGSNL LEQMPSAGFV ANVGATLMNA AGVVNSPNKA TEQDF MTGL MNSTKELVPN DPLTQQLVLK IYEANGVNLR ERRK

UniProtKB: Peptidoglycan transglycosylase gp16

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分子 #3: water

分子名称: water / タイプ: ligand / ID: 3 / コピー数: 219 / 式: HOH
分子量理論値: 18.015 Da
Chemical component information

ChemComp-HOH:
WATER

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度2.2 mg/mL
緩衝液pH: 8.5
構成要素:
濃度式名称
100.0 mMTris/HClTris buffer
10.0 mMMgCl2magnesium chloride
100.0 mMNa3C6H5O7sodium citrate

詳細: Solutions were made fresh and filtered.
グリッドモデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 120 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.03 kPa
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 278 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: blot for 6 seconds before plunging.
詳細This sample was monodisperse, but high concentration. Some preferred orientation.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 8601 / 平均露光時間: 3.4 sec. / 平均電子線量: 50.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 100.0 µm / 最大 デフォーカス（補正後）: 2.5 µm / 最小 デフォーカス（補正後）: 1.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.0 µm / 倍率（公称値）: 81000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 4700000
詳細: Manually picked 2000 particles using Relion GUI, followed by 2D-Classification to select templates, then Relion auto-picking was used.
初期モデルモデルのタイプ: NONE
詳細: Generated ab initio with Relion-3.0-b from this dataset
最終 再構成使用したクラス数: 2 / 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 2.7 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0-b) / 使用した粒子像数: 208024
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0-b) / 詳細: RELION
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0-b) / 詳細: RELION
最終 3次元分類クラス数: 6 / 平均メンバー数/クラス: 75000 / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0-b)

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原子モデル構築 1

精密化空間: REAL / プロトコル: AB INITIO MODEL / 温度因子: 45.1 / 当てはまり具合の基準: 0.92
得られたモデル

PDB-7k5c:
Structure of T7 DNA ejectosome periplasmic tunnel

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlc1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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