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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-11988 | |||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of complement C4b in complex with nanobody E3 | |||||||||
マップデータ | DeepEMhancer-postprocessed, locally sharpened cryo-EM density map of complement C4b in complex with nanobody E3. | |||||||||
試料 |
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キーワード | Complement / nanobody / C4b / complement classical pathway / nanobody-antigen complex / IMMUNE SYSTEM | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 complement component C1q complex binding / positive regulation of apoptotic cell clearance / Activation of C3 and C5 / complement activation / endopeptidase inhibitor activity / Initial triggering of complement / complement activation, classical pathway / Regulation of Complement cascade / Post-translational protein phosphorylation / Regulation of Insulin-like Growth Factor (IGF) transport and uptake by Insulin-like Growth Factor Binding Proteins (IGFBPs) ...complement component C1q complex binding / positive regulation of apoptotic cell clearance / Activation of C3 and C5 / complement activation / endopeptidase inhibitor activity / Initial triggering of complement / complement activation, classical pathway / Regulation of Complement cascade / Post-translational protein phosphorylation / Regulation of Insulin-like Growth Factor (IGF) transport and uptake by Insulin-like Growth Factor Binding Proteins (IGFBPs) / blood microparticle / inflammatory response / endoplasmic reticulum lumen / axon / innate immune response / neuronal cell body / dendrite / synapse / extracellular space / extracellular exosome / extracellular region / plasma membrane 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) / Lama glama (ラマ) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.39 Å | |||||||||
データ登録者 | Oosterheert W / De la O Becerra KI | |||||||||
資金援助 | メキシコ, 1件
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引用 | ジャーナル: J Immunol / 年: 2022 タイトル: Multifaceted Activities of Seven Nanobodies against Complement C4b. 著者: Karla I De la O Becerra / Wout Oosterheert / Ramon M van den Bos / Katerina T Xenaki / Joseph H Lorent / Maartje Ruyken / Arie Schouten / Suzan H M Rooijakkers / Paul M P van Bergen En Henegouwen / Piet Gros / 要旨: Cleavage of the mammalian plasma protein C4 into C4b initiates opsonization, lysis, and clearance of microbes and damaged host cells by the classical and lectin pathways of the complement system. ...Cleavage of the mammalian plasma protein C4 into C4b initiates opsonization, lysis, and clearance of microbes and damaged host cells by the classical and lectin pathways of the complement system. Dysregulated activation of C4 and other initial components of the classical pathway may cause or aggravate pathologies, such as systemic lupus erythematosus, Alzheimer disease, and schizophrenia. Modulating the activity of C4b by small-molecule or protein-based inhibitors may represent a promising therapeutic approach for preventing excessive inflammation and damage to host cells and tissue. Here, we present seven nanobodies, derived from llama () immunization, that bind to human C4b () with high affinities ranging from 3.2 nM to 14 pM. The activity of the nanobodies varies from no to complete inhibition of the classical pathway. The inhibiting nanobodies affect different steps in complement activation, in line with blocking sites for proconvertase formation, C3 substrate binding to the convertase, and regulator-mediated inactivation of C4b. For four nanobodies, we determined single-particle cryo-electron microscopy structures in complex with C4b at 3.4-4 Å resolution. The structures rationalize the observed functional effects of the nanobodies and define their mode of action during complement activation. Thus, we characterized seven anti-C4b nanobodies with diverse effects on the classical pathway of complement activation that may be explored for imaging, diagnostic, or therapeutic applications. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_11988.map.gz | 91.3 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-11988-v30.xml emd-11988.xml | 31.5 KB 31.5 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_11988_fsc.xml | 10.7 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_11988.png | 92.9 KB | ||
マスクデータ | emd_11988_msk_1.map | 103 MB | マスクマップ | |
Filedesc metadata | emd-11988.cif.gz | 8.3 KB | ||
その他 | emd_11988_additional_1.map.gz emd_11988_additional_2.map.gz emd_11988_half_map_1.map.gz emd_11988_half_map_2.map.gz | 80.8 MB 63 MB 80.9 MB 80.9 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-11988 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-11988 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_11988_validation.pdf.gz | 838.4 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_11988_full_validation.pdf.gz | 837.9 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_11988_validation.xml.gz | 18 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_11988_validation.cif.gz | 23.7 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-11988 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-11988 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_11988.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 103 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | DeepEMhancer-postprocessed, locally sharpened cryo-EM density map of complement C4b in complex with nanobody E3. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.0285 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | emd_11988_msk_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: Refined, unsharpened density map of complement C4b in...
ファイル | emd_11988_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Refined, unsharpened density map of complement C4b in complex with nanobody E3. | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: Local-resolution filtered, sharpenend (B = -72 A2) density...
ファイル | emd_11988_additional_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Local-resolution filtered, sharpenend (B = -72 A2) density map of complement C4b in complex with nanobody E3. | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Half map 1 of the refinement of complement...
ファイル | emd_11988_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Half map 1 of the refinement of complement C4b in complex with nanobody E3. | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Half map 2 of the refinement of complement...
ファイル | emd_11988_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Half map 2 of the refinement of complement C4b in complex with nanobody E3. | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
+全体 : Complement C4b bound to nanobody E3
+超分子 #1: Complement C4b bound to nanobody E3
+超分子 #2: Complement C4 beta chain
+超分子 #3: Complement C4 alpha chain
+超分子 #4: Complement C4 gamma chain
+超分子 #5: Nanobody E3
+分子 #1: Complement C4 beta chain
+分子 #2: Complement C4 alpha chain
+分子 #3: Complement C4 gamma chain
+分子 #4: Anti-C4b nanobody E3
+分子 #5: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.25 mg/mL | |||||||||
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緩衝液 | pH: 7.3 構成要素:
詳細: 1x PBS. | |||||||||
グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 200 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec. | |||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: blot 4.5 seconds, force 1. | |||||||||
詳細 | Purified components were mixed before vitrification. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TALOS ARCTICA |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: GIF Quantum LS / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / デジタル化 - サイズ - 横: 3838 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 3710 pixel / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 1-32 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1396 / 平均露光時間: 6.4 sec. / 平均電子線量: 51.7 e/Å2 / 詳細: 32 frames of 0.2 seconds. |
電子線 | 加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm / 倍率(公称値): 130000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
初期モデル |
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詳細 | Model was refined in the local-resolution filtered Relion map using Phenix real space refine. | ||||||||
精密化 | 空間: REAL / 当てはまり具合の基準: Map to model FSC | ||||||||
得られたモデル | PDB-7b2m: |