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タイトルA robust approach for MicroED sample preparation of lipidic cubic phase embedded membrane protein crystals.
ジャーナル・号・ページNat Commun, Vol. 14, Issue 1, Page 1086, Year 2023
掲載日2023年2月25日
著者Michael W Martynowycz / Anna Shiriaeva / Max T B Clabbers / William J Nicolas / Sara J Weaver / Johan Hattne / Tamir Gonen /
PubMed 要旨Crystallizing G protein-coupled receptors (GPCRs) in lipidic cubic phase (LCP) often yields crystals suited for the cryogenic electron microscopy (cryoEM) method microcrystal electron diffraction ...Crystallizing G protein-coupled receptors (GPCRs) in lipidic cubic phase (LCP) often yields crystals suited for the cryogenic electron microscopy (cryoEM) method microcrystal electron diffraction (MicroED). However, sample preparation is challenging. Embedded crystals cannot be targeted topologically. Here, we use an integrated fluorescence light microscope (iFLM) inside of a focused ion beam and scanning electron microscope (FIB-SEM) to identify fluorescently labeled GPCR crystals. Crystals are targeted using the iFLM and LCP is milled using a plasma focused ion beam (pFIB). The optimal ion source for preparing biological lamellae is identified using standard crystals of proteinase K. Lamellae prepared using either argon or xenon produced the highest quality data and structures. MicroED data are collected from the milled lamellae and the structures are determined. This study outlines a robust approach to identify and mill membrane protein crystals for MicroED and demonstrates plasma ion-beam milling is a powerful tool for preparing biological lamellae.
リンクNat Commun / PubMed:36841804 / PubMed Central
手法EM (電子線結晶学)
解像度1.39 - 2.0 Å
構造データ

EMDB-29586, PDB-8fyn:
MicroED structure of A2A from plasma milled lamellae
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 2.0 Å

EMDB-29587, PDB-8fyo:
MicroED structure of Proteinase K from lamellae milled from multiple plasma sources
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.39 Å

EMDB-29588, PDB-8fyp:
MicroED structure of Proteinase K from xenon milled lamellae
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.45 Å

EMDB-29590, PDB-8fyq:
MicroED structure of Proteinase K from argon milled lamellae
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.4 Å

EMDB-29595, PDB-8fyr:
MicroED structure of Proteinase K from oxygen milled lamellae
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.5 Å

EMDB-29596, PDB-8fys:
MicroED structure of Proteinase K from nitrogen milled lamellae
手法: EM (電子線結晶学) / 解像度: 1.8 Å

化合物

ChemComp-ZMA:
4-{2-[(7-amino-2-furan-2-yl[1,2,4]triazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-5-yl)amino]ethyl}phenol / ZM-241385 / アンタゴニスト*YM

ChemComp-CLR:
CHOLESTEROL / コレステロ-ル

ChemComp-OLA:
OLEIC ACID / オレイン酸

ChemComp-OLC:
(2R)-2,3-dihydroxypropyl (9Z)-octadec-9-enoate / L-グリセロ-ル3-オレア-ト

ChemComp-OLB:
(2S)-2,3-dihydroxypropyl (9Z)-octadec-9-enoate / 1-O-オレオイル-L-グリセロ-ル

ChemComp-NA:
Unknown entry / ナトリウムカチオン

ChemComp-HOH:
WATER

ChemComp-NO3:
NITRATE ION

ChemComp-CA:
Unknown entry / カルシウムジカチオン

由来
  • homo sapiens (ヒト)
  • parengyodontium album (菌類)
キーワードMEMBRANE PROTEIN / A2A Adenosine Receptor / HYDROLASE

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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  • EMDB/PDB/SASBDBのエントリから引用されている文献のデータベースです
  • Pubmedのデータを利用しています

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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