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タイトルHigh-resolution structure determination of sub-100 kDa complexes using conventional cryo-EM.
ジャーナル・号・ページNat Commun, Vol. 10, Issue 1, Page 1032, Year 2019
掲載日2019年3月4日
著者Mark A Herzik / Mengyu Wu / Gabriel C Lander /
PubMed 要旨Determining high-resolution structures of biological macromolecules amassing less than 100 kilodaltons (kDa) has been a longstanding goal of the cryo-electron microscopy (cryo-EM) community. While ...Determining high-resolution structures of biological macromolecules amassing less than 100 kilodaltons (kDa) has been a longstanding goal of the cryo-electron microscopy (cryo-EM) community. While the Volta phase plate has enabled visualization of specimens in this size range, this instrumentation is not yet fully automated and can present technical challenges. Here, we show that conventional defocus-based cryo-EM methodologies can be used to determine high-resolution structures of specimens amassing less than 100 kDa using a transmission electron microscope operating at 200 keV coupled with a direct electron detector. Our ~2.7 Å structure of alcohol dehydrogenase (82 kDa) proves that bound ligands can be resolved with high fidelity to enable investigation of drug-target interactions. Our ~2.8 Å and ~3.2 Å structures of methemoglobin demonstrate that distinct conformational states can be identified within a dataset for proteins as small as 64 kDa. Furthermore, we provide the sub-nanometer cryo-EM structure of a sub-50 kDa protein.
リンクNat Commun / PubMed:30833564 / PubMed Central
手法EM (単粒子)
解像度2.8 - 6.0 Å
構造データ

EMDB-0406: Single-particle cryo-EM reconstruction of horse liver alcohol dehydrogenase using 200 keV
PDB-6nbb: Horse liver alcohol dehydrogenase determined using single-particle cryo-EM at 200 keV
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.9 Å

EMDB-0407: Single-particle cryo-EM reconstruction of human methemoglobin using 200 keV, state 1
PDB-6nbc: human methemoglobin state 1 determined using single-particle cryo-EM at 200 keV
手法: EM (単粒子) / 解像度: 2.8 Å

EMDB-0408: Single-particle cryo-EM reconstruction of human methemoglobin using 200 keV, state 2
PDB-6nbd: Human methemoglobin state 2 determined using single-particle cryo-EM at 200 keV
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-0409:
Single-particle cryo-EM reconstruction of the catalytic subunit of protein kinase A bound to ATP and IP20 using 200 keV
手法: EM (単粒子) / 解像度: 6.0 Å

化合物

ChemComp-NAD:
NICOTINAMIDE-ADENINE-DINUCLEOTIDE / NAD*YM

ChemComp-ZN:
Unknown entry

ChemComp-HEM:
PROTOPORPHYRIN IX CONTAINING FE

由来
  • equus caballus (ウマ)
  • homo sapiens (ヒト)
  • Mus musculus (ハツカネズミ)
キーワードOXIDOREDUCTASE / dehydrogenase / NADH-binding / homo-2-mer / OXYGEN TRANSPORT / heme-binding / hetero-4-mer / globin

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見文献

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関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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