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万見
- PDB-8fm9: Nodavirus RNA replication proto-crown, detergent-solubliized C12 ... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8fm9
タイトルNodavirus RNA replication proto-crown, detergent-solubliized C12 multimer
要素RNA-directed RNA polymeraseRNA依存性RNAポリメラーゼ
キーワードVIRAL PROTEIN (ウイルスタンパク質) / Nodavirus RNA replication and RNA capping complex / Dodecamer ring / Outer mitochondrial membrane protein complex (ミトコンドリア)
機能・相同性Nodavirus methyltransferase domain / Nodavirus Vmethyltransferase / host cell mitochondrial outer membrane / RNA依存性RNAポリメラーゼ / RNA-dependent RNA polymerase activity / DNA/RNA polymerase superfamily / 生体膜 / RNA依存性RNAポリメラーゼ
機能・相同性情報
生物種Flock House virus (ウイルス)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å
データ登録者Zhan, H. / Unchwaniwala, N. / Rebolledo Viveros, A. / Pennington, J. / Horswill, M. / Broadberry, R. / Myers, J. / den Boon, J. / Grant, T. / Ahlquist, P.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
Other private 米国
引用ジャーナル: Proc Natl Acad Sci U S A / 年: 2023
タイトル: Nodavirus RNA replication crown architecture reveals proto-crown precursor and viral protein A conformational switching.
著者: Hong Zhan / Nuruddin Unchwaniwala / Andrea Rebolledo-Viveros / Janice Pennington / Mark Horswill / Roma Broadberry / Jonathan Myers / Johan A den Boon / Timothy Grant / Paul Ahlquist /
要旨: Positive-strand RNA viruses replicate their genomes in virus-induced membrane vesicles, and the resulting RNA replication complexes are a major target for virus control. Nodavirus studies first ...Positive-strand RNA viruses replicate their genomes in virus-induced membrane vesicles, and the resulting RNA replication complexes are a major target for virus control. Nodavirus studies first revealed viral RNA replication proteins forming a 12-fold symmetric "crown" at the vesicle opening to the cytosol, an arrangement recently confirmed to extend to distantly related alphaviruses. Using cryoelectron microscopy (cryo-EM), we show that mature nodavirus crowns comprise two stacked 12-mer rings of multidomain viral RNA replication protein A. Each ring contains an ~19 nm circle of C-proximal polymerase domains, differentiated by strikingly diverged positions of N-proximal RNA capping/membrane binding domains. The lower ring is a "proto-crown" precursor that assembles prior to RNA template recruitment, RNA synthesis, and replication vesicle formation. In this proto-crown, the N-proximal segments interact to form a toroidal central floor, whose 3.1 Å resolution structure reveals many mechanistic details of the RNA capping/membrane binding domains. In the upper ring, cryo-EM fitting indicates that the N-proximal domains extend radially outside the polymerases, forming separated, membrane-binding "legs." The polymerase and N-proximal domains are connected by a long linker accommodating the conformational switch between the two rings and possibly also polymerase movements associated with RNA synthesis and nonsymmetric electron density in the lower center of mature crowns. The results reveal remarkable viral protein multifunctionality, conformational flexibility, and evolutionary plasticity and insights into (+)RNA virus replication and control.
履歴
登録2022年12月22日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02023年2月1日Provider: repository / タイプ: Initial release

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: RNA-directed RNA polymerase
B: RNA-directed RNA polymerase
C: RNA-directed RNA polymerase
D: RNA-directed RNA polymerase
E: RNA-directed RNA polymerase
F: RNA-directed RNA polymerase
G: RNA-directed RNA polymerase
H: RNA-directed RNA polymerase
I: RNA-directed RNA polymerase
J: RNA-directed RNA polymerase
K: RNA-directed RNA polymerase
L: RNA-directed RNA polymerase
M: RNA-directed RNA polymerase
N: RNA-directed RNA polymerase
O: RNA-directed RNA polymerase
P: RNA-directed RNA polymerase
Q: RNA-directed RNA polymerase
R: RNA-directed RNA polymerase
S: RNA-directed RNA polymerase
T: RNA-directed RNA polymerase
U: RNA-directed RNA polymerase
V: RNA-directed RNA polymerase
W: RNA-directed RNA polymerase
X: RNA-directed RNA polymerase


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)2,735,91824
ポリマ－2,735,91824
非ポリマー00
水0
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: タンパク質 ...
RNA-directed RNA polymerase / RNA依存性RNAポリメラーゼ / RdRp / RNA replicase / Protein A


分子量: 113996.586 Da / 分子数: 24 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Flock House virus (ウイルス) / 細胞株 (発現宿主): Sf9
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: Q66929, RNA依存性RNAポリメラーゼ

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Nodavirus RNA replication proto-crown, detergent-solubliized C12 multimer
タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT
分子量実験値: NO
由来(天然)生物種: Flock House virus (ウイルス)
由来(組換発現)生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
緩衝液pH: 7.4
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 最大 デフォーカス（公称値）: 2500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 500 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 100 µm
撮影電子線照射量: 100 e/Å2 / 検出モード: INTEGRATING
フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k)
画像スキャン横: 4096 / 縦: 4096

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.20.1_4487: / 分類: 精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1cisTEM2粒子像選択
2SerialEM3.8画像取得
4cisTEM2CTF補正
7UCSF ChimeraX1.3モデルフィッティング
8Coot0.9.8.1モデルフィッティング
9ISOLDE1.3モデルフィッティング
11cisTEM2初期オイラー角割当
12cisTEM2最終オイラー角割当
13cisTEM2分類
14cisTEM2３次元再構成
21PHENIX1.20.1モデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
対称性点対称性: C12 (12回回転対称)
3次元再構成解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 11093 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: FLEXIBLE FIT
詳細: The final model includes 24 chains representing 12 protein A polypeptides. Chains A-L represent the N-terminal floor segment built into the high-resolution EM density. Chains M-X represent a ...詳細: The final model includes 24 chains representing 12 protein A polypeptides. Chains A-L represent the N-terminal floor segment built into the high-resolution EM density. Chains M-X represent a mainchain trace of the polymerase segment rigid body fit into the map and are included to give a more complete picture of the molecule. The polymerase mainchain trace was refined from an Alphafold prediction into a map obtained by symmetry expansion with subtraction. The polymerase map is uploaded as a separate entry. The two segments have separate chain IDs as it is unclear from the density which polymerase connects to which floor segment.
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.0011409
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.3721766
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d3.474329
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.04621
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.002338

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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