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- PDB-9yc5: Human uPAR bound to the Fab fragment of targeted cancer therapeut... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 9yc5
タイトルHuman uPAR bound to the Fab fragment of targeted cancer therapeutic antibody FL1
要素
  • Anti-uPAR antibody FL1 Fab heavy chain
  • Anti-uPAR antibody FL1 Fab light chain
  • Urokinase plasminogen activator surface receptor
キーワードIMMUNE SYSTEM / Complex / Targeted cancer therapy / Monoclonal anti-uPAR antibody FL1 / Antibody-drug conjugate
機能・相同性
機能・相同性情報


urokinase plasminogen activator receptor activity / Attachment of GPI anchor to uPAR / urokinase plasminogen activator signaling pathway / positive regulation of homotypic cell-cell adhesion / regulation of plasminogen activation / regulation of fibrinolysis / protein complex involved in cell-matrix adhesion / serine-type endopeptidase complex / Dissolution of Fibrin Clot / extrinsic component of membrane ...urokinase plasminogen activator receptor activity / Attachment of GPI anchor to uPAR / urokinase plasminogen activator signaling pathway / positive regulation of homotypic cell-cell adhesion / regulation of plasminogen activation / regulation of fibrinolysis / protein complex involved in cell-matrix adhesion / serine-type endopeptidase complex / Dissolution of Fibrin Clot / extrinsic component of membrane / positive regulation of DNA binding / negative regulation of intrinsic apoptotic signaling pathway / positive regulation of release of cytochrome c from mitochondria / regulation of proteolysis / regulation of cell adhesion / specific granule membrane / positive regulation of epidermal growth factor receptor signaling pathway / cell projection / positive regulation of protein phosphorylation / chemotaxis / blood coagulation / signaling receptor activity / endoplasmic reticulum lumen / signaling receptor binding / external side of plasma membrane / protein domain specific binding / focal adhesion / Neutrophil degranulation / endoplasmic reticulum membrane / negative regulation of apoptotic process / enzyme binding / cell surface / signal transduction / extracellular region / membrane / plasma membrane
類似検索 - 分子機能
CD59 antigen, conserved site / Ly-6 / u-PAR domain signature. / u-PAR/Ly-6 domain / Ly-6 antigen / uPA receptor -like domain / Ly-6 antigen/uPA receptor-like / Snake toxin-like superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Urokinase plasminogen activator surface receptor
類似検索 - 構成要素
生物種Homo sapiens (ヒト)
Mus musculus (ハツカネズミ)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.94 Å
データ登録者Anane, R.F. / Whisstock, J.C. / Engelholm, L.H. / Law, R.H.P. / Ploug, M.
資金援助 デンマーク, オーストラリア, 4件
組織認可番号国
Other private デンマーク
Other governmentR231-A13832 and R352-A20542 デンマーク
Australian Research Council (ARC)FL180100019 オーストラリア
National Health and Medical Research Council (NHMRC, Australia)APP2000728 オーストラリア
引用ジャーナル: Protein Sci / 年: 2026
タイトル: Structural basis for uPAR binding to an antibody developed for targeted cancer therapy. Mechanistic insights into flexibility, ligand recognition, and molecular imaging.
著者: Rex F Anane / Anni Kumari / Hari Venugopal / Sylvain Trépout / James C Whisstock / Lars H Engelholm / Ruby H P Law / Michael Ploug /
要旨: The urokinase-type plasminogen activator receptor (uPAR) is currently gaining momentum as a promising molecular target for treatment of various solid cancers. For patient stratification, we developed ...The urokinase-type plasminogen activator receptor (uPAR) is currently gaining momentum as a promising molecular target for treatment of various solid cancers. For patient stratification, we developed a high-affinity uPAR-targeting peptide (AE105) detecting primary cancer lesions as well as occult metastasis by positron emission tomography (PET) imaging. uPAR-targeting by AE105 is also used for optical imaging in fluorescence-guided surgery of, for example, head-and-neck cancers. Recently, we showed that a monoclonal anti-uPAR antibody (FL1), in the form of an antibody-drug conjugate (FL1-ADC), efficiently eradicate pancreatic ductal carcinomas in surrogate mouse models leading to long-term remissions. In the current study, we solved high-resolution cryo-EM structures of FL1 in complex with two different conformational states of uPAR. Combined with comprehensive kinetic data from surface plasmon resonance studies, our cryo-EM structures provide essential insights into how FL1 binding impacts the interdomain flexibility of uPAR by restricting the movement of its N-terminal LU domain. This constraint from the bound FL1 drives uPAR into its open conformation, which leads to a pronounced reduction in the binding affinity for both its natural protease ligand (300-fold) and the PET imaging probe AE105 (25-fold). Collectively, these consequences of FL1-binding on uPAR conformation are considered beneficial for both targeted cancer treatment with FL1-ADCs and for the accompanying evaluation of treatment efficacy by longitudinal AE105-based PET imaging.
履歴
登録2025年9月18日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02026年2月4日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02026年2月4日Data content type: EM metadata / Data content type: EM metadata / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02026年2月4日Data content type: FSC / Data content type: FSC / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02026年2月4日Data content type: Half map / Part number: 1 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02026年2月4日Data content type: Half map / Part number: 2 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02026年2月4日Data content type: Image / Data content type: Image / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02026年2月4日Data content type: Primary map / Data content type: Primary map / Provider: repository / タイプ: Initial release

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Urokinase plasminogen activator surface receptor
H: Anti-uPAR antibody FL1 Fab heavy chain
L: Anti-uPAR antibody FL1 Fab light chain
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)80,2806
ポリマ－79,2513
非ポリマー1,0293
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_555x,y,z1

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要素

#1: タンパク質 Urokinase plasminogen activator surface receptor / U-PAR / uPAR / Monocyte activation antigen Mo3


分子量: 31501.342 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: PLAUR, MO3, UPAR / 細胞株 (発現宿主): S2
発現宿主: Drosophila melanogaster (キイロショウジョウバエ)
参照: UniProt: Q03405
#2: 抗体 Anti-uPAR antibody FL1 Fab heavy chain


分子量: 23581.258 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / Cell (発現宿主): Hybridomas / 細胞株 (発現宿主): Hybridomas / 発現宿主: Mus musculus (ハツカネズミ)
#3: 抗体 Anti-uPAR antibody FL1 Fab light chain


分子量: 24168.818 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / Cell (発現宿主): Hybridomas / 細胞株 (発現宿主): Hybridomas / 発現宿主: Mus musculus (ハツカネズミ)
#4: 多糖 beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta- ...beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose


タイプ: oligosaccharide / 分子量: 586.542 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
記述子タイププログラム
DManpb1-4DGlcpNAcb1-4DGlcpNAcb1-Glycam Condensed SequenceGMML 1.0
WURCS=2.0/2,3,2/[a2122h-1b_1-5_2*NCC/3=O][a1122h-1b_1-5]/1-1-2/a4-b1_b4-c1WURCSPDB2Glycan 1.1.0
[]{[(4+1)][b-D-GlcpNAc]{[(4+1)][b-D-GlcpNAc]{[(4+1)][b-D-Manp]{}}}}LINUCSPDB-CARE
#5: 糖 ChemComp-NAG / 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose / N-acetyl-beta-D-glucosamine / 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucose / 2-acetamido-2-deoxy-D-glucose / 2-acetamido-2-deoxy-glucose / N-ACETYL-D-GLUCOSAMINE


タイプ: D-saccharide, beta linking / 分子量: 221.208 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: C8H15NO6
識別子タイププログラム
DGlcpNAcbCONDENSED IUPAC CARBOHYDRATE SYMBOLGMML 1.0
N-acetyl-b-D-glucopyranosamineCOMMON NAMEGMML 1.0
b-D-GlcpNAcIUPAC CARBOHYDRATE SYMBOLPDB-CARE 1.0
GlcNAcSNFG CARBOHYDRATE SYMBOLGMML 1.0
研究の焦点であるリガンドがあるかN
Has protein modificationY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Binary complex of human uPAR and Fab fragment of anti-uPAR antibody FL1
タイプ: COMPLEX
詳細: Full-length human uPAR, and full-length antibody FL1 (IgG) were mixed to form the protein complex which was used for EM sample.
Entity ID: #1-#3 / 由来: MULTIPLE SOURCES
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
由来(組換発現)生物種: Drosophila melanogaster (キイロショウジョウバエ)
緩衝液pH: 7.4
詳細: 20mM Tris, 150mM NaCl, 2.5% Glycerol, 1mM EDTA, pH 7.4
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
120 mMTris(hydroxymethyl)aminomethaneC4H11NO31
2150 mMSodium chlorideNaCl1
32.5 %GlycerolC3H8O31
41 mMEDTAC10H16N2O81
試料濃度: 3.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
詳細: Full-length human uPAR, and full-length antibody FL1 (IgG) were mixed in 2:1 molar ratio to form the protein complex which was used for EM sample.
試料支持グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: UltrAuFoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: TFS KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 105000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2000 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 500 nm / Cs: 2.7 mm
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 4.92 sec. / 電子線照射量: 10.7 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 7181 / 詳細: Images were collected at a pixel size of 0.8234
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルタースリット幅: 10 eV / 位相板: VOLTA PHASE PLATE
画像スキャン横: 5760 / 縦: 4092

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ詳細
1cryoSPARC4.5.3粒子像選択
2EPU3.9画像取得Images were automatically collected using EPU software
4cryoSPARC4.5.3CTF補正
7ISOLDE1.10.1モデルフィッティング
9cryoSPARC4.5.3初期オイラー角割当
10cryoSPARC4.5.3最終オイラー角割当
11cryoSPARC4.5.3分類
12cryoSPARC4.5.3３次元再構成
13PHENIX1.21.2_5419:モデル精密化
画像処理詳細: Following motion correction, 4345 images were selected for particle picking
CTF補正詳細: CTF corrections were performed after 3D reconstruction to improve the final resolution
タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 7426690
詳細: The 7426690 particles were picked by automated particle picking using blob picker. Several rounds of 2D classification were performed to discard particles of low quality, producing 184642 ...詳細: The 7426690 particles were picked by automated particle picking using blob picker. Several rounds of 2D classification were performed to discard particles of low quality, producing 184642 particles of good quality which were used for 3D reconstruction.
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 2.94 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 184642 / クラス平均像の数: 16 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築B value: 112 / プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL / Target criteria: cross-correlation coefficient
詳細: An initial local fitting was performed with ISOLDE implemented in ChimeraX prior to real-space refinement in phenix.
原子モデル構築Accession code: AF-Q03405-F1-v4 / Chain residue range: 114-299 / Source name: AlphaFold / タイプ: in silico model
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.0044799
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.7546522
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d9.121755
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.044738
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.008836

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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