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- PDB-9mx1: Clostridioides difficile Toxin A with mCDIFA-248-25 Fab -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 9mx1
タイトルClostridioides difficile Toxin A with mCDIFA-248-25 Fab
要素
  • Toxin A
  • mCDIFA-248-25 Fab Heavy Chain
  • mCDIFA-248-25 Fab Light Chain
キーワードTRANSFERASE / TOXIN/IMMUNE SYSTEM / Toxin A / TcdA / C.diff / Complex / TOXIN-IMMUNE SYSTEM complex
機能・相同性
機能・相同性情報


host cell cytosol / 転移酵素; グリコシル基を移すもの; 六炭糖残基を移すもの / glycosyltransferase activity / cysteine-type peptidase activity / host cell endosome membrane / toxin activity / 加水分解酵素; プロテアーゼ; ペプチド結合加水分解酵素; システインプロテアーゼ / lipid binding / host cell plasma membrane / proteolysis ...host cell cytosol / 転移酵素; グリコシル基を移すもの; 六炭糖残基を移すもの / glycosyltransferase activity / cysteine-type peptidase activity / host cell endosome membrane / toxin activity / 加水分解酵素; プロテアーゼ; ペプチド結合加水分解酵素; システインプロテアーゼ / lipid binding / host cell plasma membrane / proteolysis / extracellular region / metal ion binding / membrane
類似検索 - 分子機能
TcdA/TcdB toxin, pore forming domain / TcdA/TcdB pore forming domain / CGT/MARTX, cysteine protease (CPD) domain / CGT/MARTX, cysteine protease (CPD) domain superfamily / Peptidase C80 family / CGT/MARTX cysteine protease (CPD) domain profile. / TcdA/TcdB toxin, N-terminal helical domain / TcdB toxin N-terminal helical domain / TcdA/TcdB toxin, catalytic glycosyltransferase domain / TcdA/TcdB catalytic glycosyltransferase domain ...TcdA/TcdB toxin, pore forming domain / TcdA/TcdB pore forming domain / CGT/MARTX, cysteine protease (CPD) domain / CGT/MARTX, cysteine protease (CPD) domain superfamily / Peptidase C80 family / CGT/MARTX cysteine protease (CPD) domain profile. / TcdA/TcdB toxin, N-terminal helical domain / TcdB toxin N-terminal helical domain / TcdA/TcdB toxin, catalytic glycosyltransferase domain / TcdA/TcdB catalytic glycosyltransferase domain / Choline-binding repeat / Putative cell wall binding repeat / Cell wall/choline-binding repeat / Cell wall-binding repeat profile. / Nucleotide-diphospho-sugar transferases
類似検索 - ドメイン・相同性
生物種Clostridioides difficile (バクテリア)
Mus musculus (ハツカネズミ)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å
データ登録者Huynh, K.W. / Ammirati, M. / Kroh, H.K. / Lacy, D.B. / Han, S.
資金援助1件
組織認可番号国
Not funded
引用ジャーナル: Infect Immun / 年: 2025
タイトル: Mouse monoclonal antibodies against toxins TcdA and TcdB target diverse epitopes for neutralization.
著者: Heather K Kroh / Jaime L Jensen / Sabine Wellnitz / Jeong Jin Park / Alexandre Esadze / Kevin W Huynh / Mark Ammirati / Seungil Han / Annaliesa S Anderson / D Borden Lacy / Alexey Gribenko /
要旨: is a spore-forming, Gram-positive bacterium that can cause infections in subjects with weakened immune system or following antibiotic treatment. These infections may lead to pseudomembranous colitis ... is a spore-forming, Gram-positive bacterium that can cause infections in subjects with weakened immune system or following antibiotic treatment. These infections may lead to pseudomembranous colitis and antibiotic-associated diarrhea in humans. As such, is a major cause of nosocomial illness worldwide. Major virulence factors of the bacterium are the large clostridium toxins A (TcdA) and B (TcdB)-high molecular mass proteins with intrinsic glucosyltransferase activity. Toxins bind to the intestinal epithelium and undergo endocytosis by the epithelial cells, followed by a conformational change triggered by the low pH of early endosomes. This conformational change leads to the exposure of hydrophobic segments, followed by membrane insertion, formation of pores, and translocation of the glucosyltransferase domain into the cellular cytoplasm. Once in the cytoplasm, the glucosyltransferase domain inactivates small GTPases of the Rho family of proteins, leading to the disruption of the cytoskeleton. In the current work, we describe the discovery and characterization of a panel of neutralizing mouse monoclonal antibodies capable of interfering with several steps of cellular intoxication by the toxins. The antibodies were produced using hybridoma technology. Neutralizing activity of the antibodies was confirmed using toxin neutralization assays, and functional assays were used to identify specific neutralization mechanisms. Binding epitopes of the antibodies were identified by hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry and confirmed through negative-stain and cryo-electron microscopy. Together, our results show that full-length toxins and/or genetically- and chemically-modified toxoids can induce a wide spectrum of antibodies capable of neutralizing the toxins via a variety of mechanisms.
履歴
登録2025年1月17日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02025年7月9日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02025年7月9日Data content type: EM metadata / Data content type: EM metadata / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02025年7月9日Data content type: FSC / Data content type: FSC / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02025年7月9日Data content type: Half map / Part number: 1 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02025年7月9日Data content type: Half map / Part number: 2 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02025年7月9日Data content type: Image / Data content type: Image / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02025年7月9日Data content type: Primary map / Data content type: Primary map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12025年9月3日Group: Data collection / Database references / カテゴリ: citation / citation_author / em_admin
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.page_first / _citation.page_last / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation.year / _citation_author.identifier_ORCID / _em_admin.last_update

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Toxin A
B: mCDIFA-248-25 Fab Heavy Chain
C: mCDIFA-248-25 Fab Light Chain


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)355,7123
ポリマ－355,7123
非ポリマー00
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: タンパク質 Toxin A


分子量: 308331.188 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Clostridioides difficile (バクテリア)
遺伝子: tcdA, toxA / 発現宿主: Clostridioides difficile (バクテリア)
参照: UniProt: P16154, 加水分解酵素; プロテアーゼ; ペプチド結合加水分解酵素; システインプロテアーゼ
#2: 抗体 mCDIFA-248-25 Fab Heavy Chain


分子量: 23654.594 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 発現宿主: Mus musculus (ハツカネズミ)
#3: 抗体 mCDIFA-248-25 Fab Light Chain


分子量: 23726.217 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Mus musculus (ハツカネズミ) / 発現宿主: Mus musculus (ハツカネズミ)
Has protein modificationY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Clostridioides difficile Toxin A with mCDIFA-248-25 Fab
タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: MULTIPLE SOURCES
分子量値: 0.358 MDa / 実験値: YES
緩衝液pH: 7.5
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
125 mMTris1
2150 mMSodium ChlorideNaCl1
試料濃度: 0.125 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 200 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: TFS KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 165000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1500 nm / Cs: 2.7 mm
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 12 sec. / 電子線照射量: 52.2 e/Å2 / 検出モード: COUNTING
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 2511

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ詳細
1Warp1.0.9粒子像選択Template-Free Particle Picking
2RELION3.1.0粒子像選択Template-Based Particle Picking
3SerialEM画像取得
5CTFFIND4CTF補正
10RELION3.1.0初期オイラー角割当Initial Refinement
11RELION3.1.0最終オイラー角割当Final Refinement
14PHENIX1.20_3594モデル精密化Atomic Model Refinement
CTF補正タイプ: NONE
粒子像の選択選択した粒子像数: 527742
3次元再構成解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 212265 / 対称性のタイプ: POINT
精密化最高解像度: 3.2 Å
立体化学のターゲット値: REAL-SPACE (WEIGHTED MAP SUM AT ATOM CENTERS)
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00421268
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.76128795
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d5.1992800
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0533191
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0053692

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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