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万見
- PDB-9b5a: Ubiquitin E2-Ub-E3 HECT tetrahedral transthiolation intermediate ... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 9b5a
タイトルUbiquitin E2-Ub-E3 HECT tetrahedral transthiolation intermediate mimic - state 6
要素
  • E3 ubiquitin-protein ligase pub2
  • Ubiquitin
  • Ubiquitin-conjugating enzyme E2 4
キーワードLIGASE / UBIQUITIN / E2 / E3 / HECT / NEDD4 / RSP5 / PUB2 / UBC4 / TRANSTHIOESTERIFICATION / THIOESTER / TRANSTHIOLATION / TETRAHEDRAL INTERMEDIATE / ADENYLATION / INHIBITOR / NUCLEUS / PHOSPHOPROTEIN / UBL CONJUGATION PATHWAY / UBL / ATP ATP-BINDING / AMP / NUCLEOTIDE-BINDING / ISOPEPTIDE BOND
機能・相同性
機能・相同性情報


RHOQ GTPase cycle / RHOU GTPase cycle / Regulation of PTEN localization / Regulation of PTEN stability and activity / cytoplasm to vacuole targeting by the NVT pathway / cell cortex of cell tip / E3 ubiquitin ligases ubiquitinate target proteins / Peroxisomal protein import / nuclear SCF ubiquitin ligase complex / Synthesis of active ubiquitin: roles of E1 and E2 enzymes ...RHOQ GTPase cycle / RHOU GTPase cycle / Regulation of PTEN localization / Regulation of PTEN stability and activity / cytoplasm to vacuole targeting by the NVT pathway / cell cortex of cell tip / E3 ubiquitin ligases ubiquitinate target proteins / Peroxisomal protein import / nuclear SCF ubiquitin ligase complex / Synthesis of active ubiquitin: roles of E1 and E2 enzymes / Antigen processing: Ubiquitination & Proteasome degradation / SREBP signaling pathway / positive regulation of mitotic metaphase/anaphase transition / HECT-type E3 ubiquitin transferase / E2 ubiquitin-conjugating enzyme / SCF-dependent proteasomal ubiquitin-dependent protein catabolic process / cell division site / ubiquitin conjugating enzyme activity / protein K48-linked ubiquitination / ubiquitin ligase complex / modification-dependent protein catabolic process / protein polyubiquitination / ubiquitin-protein transferase activity / protein tag activity / ubiquitin protein ligase activity / ribosome biogenesis / ubiquitin-dependent protein catabolic process / cytosolic large ribosomal subunit / cytoplasmic translation / protein ubiquitination / structural constituent of ribosome / ubiquitin protein ligase binding / nucleolus / ATP binding / membrane / nucleus / cytoplasm / cytosol
類似検索 - 分子機能
E3 ubiquitin-protein ligase, SMURF1 type / HECT domain / HECT, E3 ligase catalytic domain / HECT-domain (ubiquitin-transferase) / HECT domain profile. / Domain Homologous to E6-AP Carboxyl Terminus with / Ubiquitin-conjugating enzyme, active site / Ubiquitin-conjugating (UBC) active site signature. / WW domain / WW/rsp5/WWP domain signature. ...E3 ubiquitin-protein ligase, SMURF1 type / HECT domain / HECT, E3 ligase catalytic domain / HECT-domain (ubiquitin-transferase) / HECT domain profile. / Domain Homologous to E6-AP Carboxyl Terminus with / Ubiquitin-conjugating enzyme, active site / Ubiquitin-conjugating (UBC) active site signature. / WW domain / WW/rsp5/WWP domain signature. / C2 domain / C2 domain profile. / WW domain superfamily / Ubiquitin-conjugating enzyme E2, catalytic domain homologues / Ubiquitin-conjugating enzyme E2 / Ubiquitin-conjugating enzyme / Ubiquitin-conjugating (UBC) core domain profile. / WW/rsp5/WWP domain profile. / Domain with 2 conserved Trp (W) residues / WW domain / Ubiquitin-conjugating enzyme/RWD-like / Ribosomal L40e family / Ribosomal_L40e / Ribosomal protein L40e / Ribosomal protein L40e superfamily / C2 domain superfamily / Ubiquitin domain signature. / Ubiquitin conserved site / Ubiquitin domain / Ubiquitin family / Ubiquitin homologues / Ubiquitin domain profile. / Ubiquitin-like domain / Ubiquitin-like domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
: / Ubiquitin-ribosomal protein eL40B fusion protein / Ubiquitin-conjugating enzyme E2 4 / E3 ubiquitin-protein ligase pub2
類似検索 - 構成要素
生物種Schizosaccharomyces pombe 972h- (分裂酵母)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.65 Å
データ登録者Kochanczyk, T. / Lima, C.D.
資金援助 米国, 2件
組織認可番号国
Howard Hughes Medical Institute (HHMI) 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R35GM118080 米国
引用ジャーナル: To be published
タイトル: Structural basis for transthiolation intermediates in the ubiquitin pathway
著者: Kochanczyk, T. / Hann, Z.S. / Lux, M.C. / Reyes, A.M.V.D. / Ji, C. / Tan, D.S. / Lima, C.D.
履歴
登録2024年3月22日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02024年6月5日Provider: repository / タイプ: Initial release

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Ubiquitin-conjugating enzyme E2 4
B: Ubiquitin
C: E3 ubiquitin-protein ligase pub2
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)70,1294
ポリマ－70,0453
非ポリマー841
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable, gel filtration
タイプ名称対称操作数
identity operation1_555x,y,z1

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要素

#1: タンパク質 Ubiquitin-conjugating enzyme E2 4 / E2 ubiquitin-conjugating enzyme 4 / Ubiquitin carrier protein 4 / Ubiquitin-protein ligase 4


分子量: 17043.336 Da / 分子数: 1 / 変異: C21S/C107S / 由来タイプ: 組換発現
詳細: C-terminal GGLVPR is a residual artifact after thrombin cleavage of affinity tag
由来: (組換発現) Schizosaccharomyces pombe 972h- (分裂酵母)
株: 972 / ATCC 24843 / 遺伝子: ubc4, SPBC119.02 / プラスミド: pET29b+ / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P46595, E2 ubiquitin-conjugating enzyme
#2: タンパク質 Ubiquitin


分子量: 8769.948 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
詳細: N-terminal GSGG is a residual artifact after TEV protease cleavage of affinity tag
由来: (組換発現) Schizosaccharomyces pombe 972h- (分裂酵母)
株: 972 / ATCC 24843 / 遺伝子: uep1, ubi2, SPAC1805.12c / プラスミド: pTXB1 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P0CH07
#3: タンパク質 E3 ubiquitin-protein ligase pub2 / HECT-type E3 ubiquitin transferase pub2


分子量: 44231.828 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
詳細: N-terminal SHM is a residual artifact after cleaving the affinity tag
由来: (組換発現) Schizosaccharomyces pombe 972h- (分裂酵母)
株: 972 / ATCC 24843 / 遺伝子: pub2, SPAC1805.15c / プラスミド: pSMT3 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q9UTG2, HECT-type E3 ubiquitin transferase
#4: 化合物 ChemComp-A1AIV / 4-aminobutanenitrile


分子量: 84.120 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: C4H8N2 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Covalent E2-Ub-E3 HECT transthiolation intermediate mimic complex
タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1, #3 / 由来: RECOMBINANT
分子量実験値: NO
由来(天然)生物種: Schizosaccharomyces pombe 972h- (分裂酵母) / 株: 972 / ATCC 24843
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
緩衝液pH: 7.2 / 詳細: 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 0.1% CHAPSO
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
120 mMTris HCl bufferC4H12NO31
2100 mMSodium chlorideNaCl1
31 mg/mlCHAPSOC32H59N2O8S1
試料濃度: 4.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: UltrAuFoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 295 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 800 nm / アライメント法: COMA FREE
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 4 sec. / 電子線照射量: 72 e/Å2 / 検出モード: SUPER-RESOLUTION / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k)

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1Topaz粒子像選択
2PHENIX1.20.1_4487:モデル精密化
3SerialEM画像取得
4cryoSPARCmasking
5GctfCTF補正
6PHENIXモデルフィッティング
7RELIONその他
10cryoSPARC初期オイラー角割当
11cryoSPARC最終オイラー角割当
12cryoSPARC分類
13cryoSPARC３次元再構成
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
3次元再構成解像度: 3.65 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 46757 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.0034983
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.476747
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d10.2011877
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.039737
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.003873

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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