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- PDB-8tlt: Cryo-EM structure of Rev1(deltaN)-Polzeta-DNA-dCTP complex -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8tlt
タイトルCryo-EM structure of Rev1(deltaN)-Polzeta-DNA-dCTP complex
要素
  • (DNA polymerase delta ...) x 2
  • (DNA polymerase zeta ...) x 2
  • DNA (5'-D(*TP*AP*AP*TP*GP*GP*TP*AP*GP*GP*GP*GP*AP*GP*GP*GP*AP*AP*T)-3')
  • DNA (5'-D(P*CP*CP*CP*TP*CP*CP*CP*CP*TP*AP*C)-3')
  • DNA repair protein REV1
キーワードDNA BINDING PROTEIN/DNA / DNA repair / DNA replication / translesion DNA synthesis / DNA polymerase / DNA BINDING PROTEIN / DNA BINDING PROTEIN-DNA complex
機能・相同性
機能・相同性情報


delta DNA polymerase complex / DNA amplification / deoxycytidyl transferase activity / zeta DNA polymerase complex / RNA-templated DNA biosynthetic process / DNA replication, removal of RNA primer / Translesion synthesis by REV1 / Translesion synthesis by POLK / Translesion synthesis by POLI / Termination of translesion DNA synthesis ...delta DNA polymerase complex / DNA amplification / deoxycytidyl transferase activity / zeta DNA polymerase complex / RNA-templated DNA biosynthetic process / DNA replication, removal of RNA primer / Translesion synthesis by REV1 / Translesion synthesis by POLK / Translesion synthesis by POLI / Termination of translesion DNA synthesis / lagging strand elongation / double-strand break repair via break-induced replication / DNA metabolic process / DNA strand elongation involved in DNA replication / error-free translesion synthesis / leading strand elongation / error-prone translesion synthesis / replication fork / nucleotide-excision repair / double-strand break repair via homologous recombination / base-excision repair / 転移酵素; リンを含む基を移すもの; 核酸を移すもの / 4 iron, 4 sulfur cluster binding / DNA replication / damaged DNA binding / DNA-directed DNA polymerase / DNA-directed DNA polymerase activity / nucleotide binding / chromatin / mitochondrion / DNA binding / nucleus / metal ion binding / cytoplasm
類似検索 - 分子機能
DNA polymerase delta subunit, OB-fold domain / DNA polymerase delta subunit 2, C-terminal domain / DNA polymerase delta subunit OB-fold domain / DNA polymerase zeta catalytic subunit / DNA polymerase delta/II small subunit family / DNA repair protein Rev1 / C4-type zinc-finger of DNA polymerase delta / C4-type zinc-finger of DNA polymerase delta / Mad2-like / HORMA domain ...DNA polymerase delta subunit, OB-fold domain / DNA polymerase delta subunit 2, C-terminal domain / DNA polymerase delta subunit OB-fold domain / DNA polymerase zeta catalytic subunit / DNA polymerase delta/II small subunit family / DNA repair protein Rev1 / C4-type zinc-finger of DNA polymerase delta / C4-type zinc-finger of DNA polymerase delta / Mad2-like / HORMA domain / HORMA domain / HORMA domain profile. / HORMA domain superfamily / DNA polymerase alpha/delta/epsilon, subunit B / DNA polymerase alpha/epsilon subunit B / BRCT domain, a BRCA1 C-terminus domain / DNA polymerase family B, thumb domain / DNA polymerase family B signature. / DNA-directed DNA polymerase, family B, conserved site / DNA polymerase family B / DNA polymerase family B, exonuclease domain / DNA-directed DNA polymerase, family B, exonuclease domain / DNA-directed DNA polymerase, family B, multifunctional domain / DNA polymerase, palm domain superfamily / DNA polymerase type-B family / DNA-directed DNA polymerase, family B / DNA polymerase, Y-family, little finger domain / impB/mucB/samB family C-terminal domain / UmuC domain / DNA polymerase, Y-family, little finger domain superfamily / impB/mucB/samB family / UmuC domain profile. / breast cancer carboxy-terminal domain / BRCT domain profile. / BRCT domain / BRCT domain superfamily / Ribonuclease H superfamily / Ribonuclease H-like superfamily / Reverse transcriptase/Diguanylate cyclase domain / DNA/RNA polymerase superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
2'-DEOXYCYTIDINE-5'-TRIPHOSPHATE / IRON/SULFUR CLUSTER / DNA / DNA (> 10) / POL31 isoform 1 / DNA repair protein REV1 / DNA polymerase zeta catalytic subunit / DNA polymerase zeta processivity subunit / DNA polymerase delta subunit 3
類似検索 - 構成要素
生物種Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
synthetic construct (人工物)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.85 Å
データ登録者Malik, R. / Aggarwal, A.K.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Cancer Institute (NIH/NCI)R35-GM131780 米国
引用ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2024
タイトル: Cryo-EM structure of the Rev1-Polζ holocomplex reveals the mechanism of their cooperativity in translesion DNA synthesis.
著者: Radhika Malik / Robert E Johnson / Iban Ubarretxena-Belandia / Louise Prakash / Satya Prakash / Aneel K Aggarwal /
要旨: Rev1-Polζ-dependent translesion synthesis (TLS) of DNA is crucial for maintaining genome integrity. To elucidate the mechanism by which the two polymerases cooperate in TLS, we determined the ...Rev1-Polζ-dependent translesion synthesis (TLS) of DNA is crucial for maintaining genome integrity. To elucidate the mechanism by which the two polymerases cooperate in TLS, we determined the cryogenic electron microscopic structure of the Saccharomyces cerevisiae Rev1-Polζ holocomplex in the act of DNA synthesis (3.53 Å). We discovered that a composite N-helix-BRCT module in Rev1 is the keystone of Rev1-Polζ cooperativity, interacting directly with the DNA template-primer and with the Rev3 catalytic subunit of Polζ. The module is positioned akin to the polymerase-associated domain in Y-family TLS polymerases and is set ideally to interact with PCNA. We delineate the full extent of interactions that the carboxy-terminal domain of Rev1 makes with Polζ and identify potential new druggable sites to suppress chemoresistance from first-line chemotherapeutics. Collectively, our results provide fundamental new insights into the mechanism of cooperativity between Rev1 and Polζ in TLS.
履歴
登録2023年7月27日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02024年5月15日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年5月22日Group: Database references / Structure summary / カテゴリ: citation / citation_author / struct
Item: _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed ..._citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation_author.identifier_ORCID / _citation_author.name / _struct.title

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: DNA polymerase zeta catalytic subunit
D: DNA polymerase zeta processivity subunit
E: DNA polymerase zeta processivity subunit
F: DNA polymerase delta small subunit
G: DNA polymerase delta subunit 3
B: DNA repair protein REV1
P: DNA (5'-D(P*CP*CP*CP*TP*CP*CP*CP*CP*TP*AP*C)-3')
T: DNA (5'-D(*TP*AP*AP*TP*GP*GP*TP*AP*GP*GP*GP*GP*AP*GP*GP*GP*AP*AP*T)-3')
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)453,46411
ポリマ－452,6058
非ポリマー8593
水7,873437
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

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DNA polymerase zeta ... , 2種, 3分子 ADE

#1: タンパク質 DNA polymerase zeta catalytic subunit / Protein reversionless 3


分子量: 177068.516 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: REV3, PSO1, YPL167C, P2535 / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P14284, DNA-directed DNA polymerase
#2: タンパク質 DNA polymerase zeta processivity subunit / Revertibility protein 7


分子量: 28791.654 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: REV7, YIL139C / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P38927

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DNA polymerase delta ... , 2種, 2分子 FG

#3: タンパク質 DNA polymerase delta small subunit / SX2_G0007820.mRNA.1.CDS.1


分子量: 55987.352 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: PACBIOSEQ_LOCUS3277, PACBIOSEQ_LOCUS3308 / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: A0A6A5PTG9
#4: タンパク質 DNA polymerase delta subunit 3


分子量: 40377.715 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: POL32, YJR043C, J1626 / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P47110

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タンパク質 , 1種, 1分子 B

#5: タンパク質 DNA repair protein REV1 / Reversionless protein 1


分子量: 112384.219 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: REV1, YOR346W, O6339 / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
参照: UniProt: P12689, 転移酵素; リンを含む基を移すもの; 核酸を移すもの

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DNA鎖 , 2種, 2分子 PT

#6: DNA鎖 DNA (5'-D(P*CP*CP*CP*TP*CP*CP*CP*CP*TP*AP*C)-3')


分子量: 3190.089 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) synthetic construct (人工物)
#7: DNA鎖 DNA (5'-D(*TP*AP*AP*TP*GP*GP*TP*AP*GP*GP*GP*GP*AP*GP*GP*GP*AP*AP*T)-3')


分子量: 6013.907 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) synthetic construct (人工物)

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非ポリマー , 4種, 440分子

#8: 化合物 ChemComp-SF4 / IRON/SULFUR CLUSTER


分子量: 351.640 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: Fe4S4 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
#9: 化合物 ChemComp-CA / CALCIUM ION / カルシウムジカチオン


分子量: 40.078 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: Ca / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
#10: 化合物 ChemComp-DCP / 2'-DEOXYCYTIDINE-5'-TRIPHOSPHATE / dCTP


分子量: 467.157 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: C9H16N3O13P3
#11: 水 ChemComp-HOH / water


分子量: 18.015 Da / 分子数: 437 / 由来タイプ: 天然 / 式: H2O

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詳細

研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素
ID名称タイプEntity IDParent-ID由来
1DNA complexCOMPLEX#1-#50MULTIPLE SOURCES
2DNA polymerase zeta catalytic subunit, DNA polymerase zeta processivity subunit, DNA polymerase delta small subunit, DNA polymerase delta subunit 3, DNA repair protein REV1COMPLEX#1-#41RECOMBINANT
3DNACOMPLEX#5-#61SYNTHETIC
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
由来(組換発現)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
緩衝液pH: 8
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
急速凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 500 nm
撮影電子線照射量: 50.79 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)

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解析

CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
3次元再構成解像度: 2.85 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 368486 / 対称性のタイプ: POINT
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00419760
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.51926943
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d9.1022822
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.043081
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0043292

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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