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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8pn9 | ||||||
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タイトル | Structure of human oligosaccharyltransferase OST-A complex bound to NGI-1 | ||||||
要素 |
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キーワード | TRANSFERASE / N-glycosylation / OST-A complex / NGI-1 inhibitor | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 oligosaccharyltransferase complex binding / : / : / Asparagine N-linked glycosylation / membrane-bounded organelle / oligosaccharyltransferase complex / co-translational protein modification / dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycotransferase / dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycotransferase activity / protein N-linked glycosylation via asparagine ...oligosaccharyltransferase complex binding / : / : / Asparagine N-linked glycosylation / membrane-bounded organelle / oligosaccharyltransferase complex / co-translational protein modification / dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycotransferase / dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycotransferase activity / protein N-linked glycosylation via asparagine / protein N-linked glycosylation / epithelial cell apoptotic process / azurophil granule membrane / protein glycosylation / blastocyst development / Advanced glycosylation endproduct receptor signaling / SRP-dependent cotranslational protein targeting to membrane / rough endoplasmic reticulum / enzyme activator activity / response to endoplasmic reticulum stress / post-translational protein modification / response to cytokine / T cell activation / protein modification process / regulation of protein stability / melanosome / Maturation of spike protein / nuclear body / inflammatory response / intracellular membrane-bounded organelle / Neutrophil degranulation / endoplasmic reticulum membrane / negative regulation of apoptotic process / apoptotic process / endoplasmic reticulum / protein-containing complex / RNA binding / membrane / metal ion binding / plasma membrane / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.61 Å | ||||||
データ登録者 | Ramirez, A.S. / Kowal, J. / Locher, K.P. | ||||||
資金援助 | スイス, 1件
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引用 | ジャーナル: Cell / 年: 2024 タイトル: Positive selection CRISPR screens reveal a druggable pocket in an oligosaccharyltransferase required for inflammatory signaling to NF-κB. 著者: Benjamin L Lampson / Ana S Ramίrez / Marta Baro / Lixia He / Mudra Hegde / Vidyasagar Koduri / Jamie L Pfaff / Ruth E Hanna / Julia Kowal / Nitin H Shirole / Yanfeng He / John G Doench / ...著者: Benjamin L Lampson / Ana S Ramίrez / Marta Baro / Lixia He / Mudra Hegde / Vidyasagar Koduri / Jamie L Pfaff / Ruth E Hanna / Julia Kowal / Nitin H Shirole / Yanfeng He / John G Doench / Joseph N Contessa / Kaspar P Locher / William G Kaelin / 要旨: Nuclear factor κB (NF-κB) plays roles in various diseases. Many inflammatory signals, such as circulating lipopolysaccharides (LPSs), activate NF-κB via specific receptors. Using whole-genome ...Nuclear factor κB (NF-κB) plays roles in various diseases. Many inflammatory signals, such as circulating lipopolysaccharides (LPSs), activate NF-κB via specific receptors. Using whole-genome CRISPR-Cas9 screens of LPS-treated cells that express an NF-κB-driven suicide gene, we discovered that the LPS receptor Toll-like receptor 4 (TLR4) is specifically dependent on the oligosaccharyltransferase complex OST-A for N-glycosylation and cell-surface localization. The tool compound NGI-1 inhibits OST complexes in vivo, but the underlying molecular mechanism remained unknown. We did a CRISPR base-editor screen for NGI-1-resistant variants of STT3A, the catalytic subunit of OST-A. These variants, in conjunction with cryoelectron microscopy studies, revealed that NGI-1 binds the catalytic site of STT3A, where it traps a molecule of the donor substrate dolichyl-PP-GlcNAc-Man-Glc, suggesting an uncompetitive inhibition mechanism. Our results provide a rationale for and an initial step toward the development of STT3A-specific inhibitors and illustrate the power of contemporaneous base-editor and structural studies to define drug mechanism of action. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8pn9.cif.gz | 423.2 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8pn9.ent.gz | 331.6 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 8pn9.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8pn9_validation.pdf.gz | 2.4 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8pn9_full_validation.pdf.gz | 2.4 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8pn9_validation.xml.gz | 81.2 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8pn9_validation.cif.gz | 114.6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/pn/8pn9 ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/pn/8pn9 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 17779MC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-Dolichyl-diphosphooligosaccharide--protein glycosyltransferase subunit ... , 5種, 5分子 ABDEF
#1: タンパク質 | 分子量: 80607.320 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: STT3A, ITM1, TMC / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) 参照: UniProt: P46977, dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycotransferase |
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#2: タンパク質・ペプチド | 分子量: 4196.004 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: OST4 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: P0C6T2 |
#4: タンパク質 | 分子量: 12503.631 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: DAD1 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: P61803 |
#5: タンパク質 | 分子量: 68656.156 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: RPN1 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: P04843 |
#6: タンパク質 | 分子量: 69347.508 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: RPN2 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: P04844 |
-タンパク質 , 3種, 3分子 CHG
#3: タンパク質 | 分子量: 9083.804 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: TMEM258, C11orf10, HSPC005 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: P61165 |
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#7: タンパク質 | 分子量: 16844.215 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: OSTC, DC2, HDCMD45P, HSPC307 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: Q9NRP0 |
#8: タンパク質 | 分子量: 50293.977 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: DDOST, KIAA0115, OST48, OK/SW-cl.45 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: P39656 |
-糖 , 4種, 4分子
#9: 多糖 | 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose |
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#10: 多糖 | alpha-D-mannopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose-(1-3)-[alpha-D- ...alpha-D-mannopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose-(1-3)-[alpha-D-mannopyranose-(1-6)-alpha-D-mannopyranose-(1-6)]beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose |
#11: 多糖 | alpha-D-mannopyranose-(1-3)-[alpha-D-mannopyranose-(1-6)]alpha-D-mannopyranose-(1-6)-[alpha-D- ...alpha-D-mannopyranose-(1-3)-[alpha-D-mannopyranose-(1-6)]alpha-D-mannopyranose-(1-6)-[alpha-D-mannopyranose-(1-3)]beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose |
#12: 多糖 | alpha-D-glucopyranose-(1-2)-alpha-D-glucopyranose-(1-3)-alpha-D-glucopyranose-(1-3)-alpha-D- ...alpha-D-glucopyranose-(1-2)-alpha-D-glucopyranose-(1-3)-alpha-D-glucopyranose-(1-3)-alpha-D-mannopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose-(1-3)-[alpha-D-mannopyranose-(1-6)-alpha-D-mannopyranose-(1-6)]beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-alpha-D-glucopyranose タイプ: oligosaccharide / 分子量: 1883.668 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 |
-非ポリマー , 6種, 10分子
#13: 化合物 | ChemComp-KZB / ( #14: 化合物 | #15: 化合物 | ChemComp-MN / | #16: 化合物 | ChemComp-OTP / ( | #17: 化合物 | ChemComp-ZXT / | 分子量: 394.512 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: C17H22N4O3S2 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION #18: 水 | ChemComp-HOH / | |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: OLIGOSACCHARYLTRANSFERASE COMPLEX OST-A WITH BOUND NGI-1 INHIBITOR タイプ: COMPLEX / Entity ID: #2-#5, #7 / 由来: NATURAL |
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分子量 | 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
緩衝液 | pH: 7.5 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE-PROPANE |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 2400 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 600 nm |
撮影 | 電子線照射量: 54.2 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) |
-解析
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION |
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3次元再構成 | 解像度: 3.61 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 101699 / 対称性のタイプ: POINT |