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- PDB-8giz: E. coli clamp loader with open clamp -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8giz
タイトルE. coli clamp loader with open clamp
要素
  • (DNA polymerase III subunit ...) x 4
  • Beta sliding clamp
キーワードDNA BINDING PROTEIN/DNA / clamp loader / DNA clamp / AAA+ / ATPase / DNA BINDING PROTEIN-DNA complex
機能・相同性
機能・相同性情報


DNA polymerase III, clamp loader complex / DNA clamp loader activity / DNA polymerase III complex / replisome / DNA polymerase processivity factor activity / 3'-5' exonuclease activity / ribonucleoside triphosphate phosphatase activity / response to radiation / DNA-templated DNA replication / DNA replication ...DNA polymerase III, clamp loader complex / DNA clamp loader activity / DNA polymerase III complex / replisome / DNA polymerase processivity factor activity / 3'-5' exonuclease activity / ribonucleoside triphosphate phosphatase activity / response to radiation / DNA-templated DNA replication / DNA replication / DNA-directed DNA polymerase / DNA-directed DNA polymerase activity / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / viral translational frameshifting / ATP hydrolysis activity / DNA binding / ATP binding / identical protein binding / metal ion binding
類似検索 - 分子機能
DNA polymerase III, psi subunit / DNA polymerase III, psi subunit, subgroup / DNA polymerase III, psi subunit superfamily / DNA polymerase III psi subunit / DNA polymerase III, delta prime subunit / DNA polymerase III, delta subunit, C-terminal / : / DNA polymerase III, delta subunit, C terminal / DNA polymerase III subunit delta', AAA+ ATPase lid domain / DNA polymerase III subunit delta, C-terminal ...DNA polymerase III, psi subunit / DNA polymerase III, psi subunit, subgroup / DNA polymerase III, psi subunit superfamily / DNA polymerase III psi subunit / DNA polymerase III, delta prime subunit / DNA polymerase III, delta subunit, C-terminal / : / DNA polymerase III, delta subunit, C terminal / DNA polymerase III subunit delta', AAA+ ATPase lid domain / DNA polymerase III subunit delta, C-terminal / Processivity clamp loader gamma complex DNA pol III C-term / DNA polymerase III, delta subunit / DNA polymerase III delta, N-terminal / : / DNA polymerase III, delta subunit / DNA polymerase III, tau subunit, domain V / DNA polymerase III subunit tau, DnaB-binding domain IV / DNA polymerase III, tau subunit, domain V superfamily / DNA polymerase III subunits tau domain IV DnaB-binding / DNA polymerase III tau subunit V interacting with alpha / DNA polymerase III, subunit gamma/tau, helical lid domain / DNA polymerase III clamp loader subunit, ATPase lid domain / DNA polymerase III, subunit gamma/ tau, N-terminal / DNA polymerase III, gamma subunit, domain III / DNA polymerase III subunits gamma and tau domain III / DNA polymerase III, delta subunit / : / DNA polymerase III, clamp loader complex, gamma/delta/delta subunit, C-terminal / ClpA/B family / Ribosomal protein L34, conserved site / Ribosomal protein L34 signature. / Ribosomal protein L34 / Ribosomal protein L34 / ATPases associated with a variety of cellular activities / AAA+ ATPase domain / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER / DNA polymerase III subunit tau / Large ribosomal subunit protein bL34 / DNA polymerase III subunit delta / DNA polymerase III subunit delta' / DNA polymerase III subunit psi
類似検索 - 構成要素
生物種Escherichia coli K-12 (大腸菌)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.7 Å
データ登録者Oakley, A.J. / Xu, Z.-Q. / Dixon, N.E.
資金援助 オーストラリア, 1件
組織認可番号国
Australian Research Council (ARC)DP210100365 オーストラリア
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2024
タイトル: Structural characterisation of the complete cycle of sliding clamp loading in Escherichia coli.
著者: Zhi-Qiang Xu / Slobodan Jergic / Allen T Y Lo / Alok C Pradhan / Simon H J Brown / James C Bouwer / Harshad Ghodke / Peter J Lewis / Gökhan Tolun / Aaron J Oakley / Nicholas E Dixon /
要旨: Ring-shaped DNA sliding clamps are essential for DNA replication and genome maintenance. Clamps need to be opened and chaperoned onto DNA by clamp loader complexes (CLCs). Detailed understanding of ...Ring-shaped DNA sliding clamps are essential for DNA replication and genome maintenance. Clamps need to be opened and chaperoned onto DNA by clamp loader complexes (CLCs). Detailed understanding of the mechanisms by which CLCs open and place clamps around DNA remains incomplete. Here, we present a series of six structures of the Escherichia coli CLC bound to an open or closed clamp prior to and after binding to a primer-template DNA, representing the most significant intermediates in the clamp loading process. We show that the ATP-bound CLC first binds to a clamp, then constricts to hold onto it. The CLC then expands to open the clamp with a gap large enough for double-stranded DNA to enter. Upon binding to DNA, the CLC constricts slightly, allowing clamp closing around DNA. These structures provide critical high-resolution snapshots of clamp loading by the E. coli CLC, revealing how the molecular machine works.
履歴
登録2023年3月14日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02024年3月27日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年10月16日Group: Data collection / Database references / Structure summary
カテゴリ: citation / citation_author ...citation / citation_author / em_admin / pdbx_entry_details
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation.year / _em_admin.last_update / _pdbx_entry_details.has_protein_modification

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: DNA polymerase III subunit delta
B: DNA polymerase III subunit tau
C: DNA polymerase III subunit tau
D: DNA polymerase III subunit tau
E: DNA polymerase III subunit delta'
F: DNA polymerase III subunit psi
H: Beta sliding clamp
I: Beta sliding clamp
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)316,88518
ポリマ－314,9818
非ポリマー1,90410
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: gel filtration
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

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DNA polymerase III subunit ... , 4種, 6分子 ABCDEF

#1: タンパク質 DNA polymerase III subunit delta


分子量: 38745.574 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 遺伝子: holA, b0640, JW0635 / 発現宿主: Escherichia coli BL21 (大腸菌) / 参照: UniProt: P28630, DNA-directed DNA polymerase
#2: タンパク質 DNA polymerase III subunit tau / DNA polymerase III subunit gamma


分子量: 47601.766 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 遺伝子: dnaX, dnaZ, dnaZX, b0470, JW0459 / 発現宿主: Escherichia coli BL21 (大腸菌) / 参照: UniProt: P06710, DNA-directed DNA polymerase
#3: タンパク質 DNA polymerase III subunit delta'


分子量: 36980.484 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 遺伝子: holB, b1099, JW1085 / 発現宿主: Escherichia coli BL21 (大腸菌) / 参照: UniProt: P28631, DNA-directed DNA polymerase
#4: タンパク質 DNA polymerase III subunit psi


分子量: 15188.276 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 遺伝子: holD, b4372, JW4334 / 発現宿主: Escherichia coli BL21 (大腸菌) / 参照: UniProt: P28632, DNA-directed DNA polymerase

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タンパク質 , 1種, 2分子 HI

#5: タンパク質 Beta sliding clamp / Beta clamp / Sliding clamp / Beta-clamp processivity factor / DNA polymerase III beta sliding clamp subunit


分子量: 40630.508 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 遺伝子: dnaN, b3701, JW3678 / 発現宿主: Escherichia coli BL21 (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A988

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非ポリマー , 3種, 10分子

#6: 化合物 ChemComp-AGS / PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER / ATP-GAMMA-S / ADENOSINE 5'-(3-THIOTRIPHOSPHATE) / ADENOSINE 5'-(GAMMA-THIOTRIPHOSPHATE) / ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE MONOTHIOPHOSPHATE / ATP-γ-S


分子量: 523.247 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 合成 / 式: C10H16N5O12P3S
コメント: ATP-gamma-S, エネルギー貯蔵分子類似体*YM
#7: 化合物 ChemComp-MG / MAGNESIUM ION / マグネシウムジカチオン


分子量: 24.305 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 合成 / 式: Mg
#8: 化合物
ChemComp-ZN / ZINC ION


分子量: 65.409 Da / 分子数: 4 / 由来タイプ: 合成 / 式: Zn

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詳細

研究の焦点であるリガンドがあるかN
Has protein modificationN

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: E. coli clamp loader with open clamp / タイプ: COMPLEX
詳細: Clamp loader complex composed of DNA polymerase III delta gamma(3) delta' chi and psi subunits. Clamp composed of DNA polymerase III beta(2) subunits.
Entity ID: #1-#5 / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 0.331 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: K-12
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: BL21
緩衝液pH: 7.5
詳細: 30 mM Na.HEPES pH 7.5, 3 mM MgCl2, 2 mM dithiothreitol, 0.25 mM EDTA, 2% glycerol, 1 mM ATPgammaS.
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
130 mMHEPES1
23 mMMagnesium ChlorideMgCl21
32 mMdithiothreitol1
40.25 mMEDTA1
52 %glycerol1
61 mMATPgammaS1
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
詳細: 30 microL of 6 microM delta/tau3/delta' mixed with chi/psi complex at a molar ratio of 1:1.2, beta2 at 1:1.3, and dialysed twice at 4 degrees C against 250 mL of 30 mM Na.HEPES pH 7.5, 3 mM ...詳細: 30 microL of 6 microM delta/tau3/delta' mixed with chi/psi complex at a molar ratio of 1:1.2, beta2 at 1:1.3, and dialysed twice at 4 degrees C against 250 mL of 30 mM Na.HEPES pH 7.5, 3 mM MgCl2, 2 mM dithiothreitol, 0.25 mM EDTA, 2% glycerol. 1 mM ATPgammaS was added to the dialysate.
試料支持詳細: Used a Zepto Low-pressure plasma systems (PLASMA CLEANER) (Diener Electronic) at 10% power for 120 seconds.
グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: UltrAuFoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 279 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 1300 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 400 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 70 µm / アライメント法: COMA FREE
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 6 sec. / 電子線照射量: 50 e/Å2 / 検出モード: COUNTING
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 7269
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum / 詳細: unfiltered mode
画像スキャン横: 4096 / 縦: 4096 / 動画フレーム数/画像: 60 / 利用したフレーム数/画像: 1-60

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解析

ソフトウェア
名称バージョン分類
phenix.real_space_refinedev_4788精密化
PHENIXdev_4788精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1RELION3.1粒子像選択
2EPU画像取得
4RELION3.1CTF補正
7PHENIXdev-4788モデルフィッティング
9PHENIXdev-4788モデル精密化
10RELION3.1初期オイラー角割当
11RELION3.1最終オイラー角割当
12RELION3.1分類
13RELION3.1３次元再構成
CTF補正詳細: CTF refinement per-particle was performed in RELION before final 3D reconstruction.
タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 1376000
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 2.7 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 280000 / アルゴリズム: BACK PROJECTION / クラス平均像の数: 2 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: RIGID BODY FIT
原子モデル構築
IDPDB-ID 3D fitting-IDAccession codeInitial refinement model-IDSource nameタイプ
13GLH

3glh

13GLH1PDBexperimental model
21MMI

1mmi

11MMI2PDBexperimental model
精密化交差検証法: NONE
立体化学のターゲット値: GeoStd + Monomer Library + CDL v1.2
原子変位パラメータBiso mean: 121.76 Å2
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.001920277
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.451827537
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.03533182
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.00263582
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d10.56687605

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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