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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8g7q | |||||||||
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タイトル | Structure of the Escherichia coli 70S ribosome in complex with EF-Tu and Ile-tRNAIle(LAU) bound to the near-cognate AUG codon (Structure II) | |||||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME / Elongation factor Tu / paromomycin / lysidine 34 / cryo-EM / tRNA | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 negative regulation of cytoplasmic translational initiation / guanosine tetraphosphate binding / stringent response / positive regulation of ribosome biogenesis / translation elongation factor activity / translational termination / DnaA-L2 complex / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / negative regulation of translational initiation / mRNA regulatory element binding translation repressor activity ...negative regulation of cytoplasmic translational initiation / guanosine tetraphosphate binding / stringent response / positive regulation of ribosome biogenesis / translation elongation factor activity / translational termination / DnaA-L2 complex / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / negative regulation of translational initiation / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / ribosome assembly / assembly of large subunit precursor of preribosome / cytosolic ribosome assembly / transcription antitermination / regulation of cell growth / translational initiation / DNA-templated transcription termination / maintenance of translational fidelity / mRNA 5'-UTR binding / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / large ribosomal subunit / ribosome binding / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / 5S rRNA binding / large ribosomal subunit rRNA binding / transferase activity / cytosolic small ribosomal subunit / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / response to antibiotic / GTPase activity / mRNA binding / GTP binding / RNA binding / zinc ion binding / membrane / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) Escherichia phage T4 (ファージ) | |||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.1 Å | |||||||||
データ登録者 | Rybak, M.Y. / Gagnon, M.G. | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2024 タイトル: Structures of the ribosome bound to EF-Tu-isoleucine tRNA elucidate the mechanism of AUG avoidance. 著者: Mariia Yu Rybak / Matthieu G Gagnon / 要旨: The frequency of errors upon decoding of messenger RNA by the bacterial ribosome is low, with one misreading event per 1 × 10 codons. In the universal genetic code, the AUN codon box specifies ...The frequency of errors upon decoding of messenger RNA by the bacterial ribosome is low, with one misreading event per 1 × 10 codons. In the universal genetic code, the AUN codon box specifies two amino acids, isoleucine and methionine. In bacteria and archaea, decoding specificity of the AUA and AUG codons relies on the wobble avoidance strategy that requires modification of C34 in the anticodon loop of isoleucine transfer RNA (tRNA). Bacterial tRNA with 2-lysylcytidine (lysidine) at the wobble position deciphers AUA while avoiding AUG. Here we report cryo-electron microscopy structures of the Escherichia coli 70S ribosome complexed with elongation factor thermo unstable (EF-Tu) and isoleucine-tRNA in the process of decoding AUA and AUG. Lysidine in tRNA excludes AUG by promoting the formation of an unusual Hoogsteen purine-pyrimidine nucleobase geometry at the third position of the codon, weakening the interactions with the mRNA and destabilizing the EF-Tu ternary complex. Our findings elucidate the molecular mechanism by which tRNA specifically decodes AUA over AUG. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8g7q.cif.gz | 3.3 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8g7q.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 8g7q.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8g7q_validation.pdf.gz | 2 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8g7q_full_validation.pdf.gz | 2.1 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8g7q_validation.xml.gz | 228.9 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8g7q_validation.cif.gz | 402.2 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/g7/8g7q ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/g7/8g7q | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-RNA鎖 , 6種, 7分子 awyxvAB
#1: RNA鎖 | 分子量: 499873.406 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1758835854 | ||||||||
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#22: RNA鎖 | 分子量: 24884.094 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: Aminoacylated isoleucine-tRNA / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / プラスミド: pBSTNAV-tRNAIle / 発現宿主: Escherichia coli HB101 (大腸菌) #23: RNA鎖 | | 分子量: 24846.902 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: Deacylated Initiator Methionyl-tRNA / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / プラスミド: pBS-tRNAfMet / 発現宿主: Escherichia coli HB101 (大腸菌) / 参照: GenBank: 732678099 #24: RNA鎖 | | 分子量: 8894.456 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: Synthetic 27-nt M-M mRNA / 由来: (合成) Escherichia phage T4 (ファージ) #26: RNA鎖 | | 分子量: 941811.562 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 #27: RNA鎖 | | 分子量: 38814.113 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1817378070 |
-30S ribosomal protein ... , 20種, 20分子 bcdefghijklmnopqrstu
#2: タンパク質 | 分子量: 26795.695 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: J7QM75 |
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#3: タンパク質 | 分子量: 26031.316 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MCS9 |
#4: タンパク質 | 分子量: 23514.199 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: P0A7V8 |
#5: タンパク質 | 分子量: 17629.398 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: P0A7W1 |
#6: タンパク質 | 分子量: 15211.058 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SFQ7 |
#7: タンパク質 | 分子量: 17637.445 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: P02359 |
#8: タンパク質 | 分子量: 14146.557 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7XKZ3 |
#9: タンパク質 | 分子量: 14886.270 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A1X3LT86 |
#10: タンパク質 | 分子量: 11755.597 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: V0ANK5 |
#11: タンパク質 | 分子量: 13871.959 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0H3PWX2 |
#12: タンパク質 | 分子量: 13814.249 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0F1AUC4 |
#13: タンパク質 | 分子量: 13128.467 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A7U9IV78 |
#14: タンパク質 | 分子量: 11606.560 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: U9Y6H3 |
#15: タンパク質 | 分子量: 10290.816 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D8EB41 |
#16: タンパク質 | 分子量: 9207.572 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3SYP2 |
#17: タンパク質 | 分子量: 9724.491 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A8E0MHL6 |
#18: タンパク質 | 分子量: 9005.472 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2KXL3 |
#19: タンパク質 | 分子量: 10455.355 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: S1EA57 |
#20: タンパク質 | 分子量: 9708.464 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: C3TRH7 |
#21: タンパク質 | 分子量: 8524.039 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2L2J1 |
-タンパク質 , 2種, 2分子 zT
#25: タンパク質 | 分子量: 43152.219 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: Elongation factor Tu / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 遺伝子: tufA_2, tuf, tufA, tufA_1, tufA_3, tufA_4, tufB, tufB_1, tufB_2, A5U30_004581, A9X72_23960, AAS29_002155, AAS29_004093, ACN68_05365, AM464_13225, AT845_003992, AWP47_16755, B6R15_000408, ...遺伝子: tufA_2, tuf, tufA, tufA_1, tufA_3, tufA_4, tufB, tufB_1, tufB_2, A5U30_004581, A9X72_23960, AAS29_002155, AAS29_004093, ACN68_05365, AM464_13225, AT845_003992, AWP47_16755, B6R15_000408, BANRA_00548, BANRA_05052, BG944_004744, BGM66_002194, BJJ90_25160, BLM69_004391, BMT49_21045, BMT50_08130, BMT91_03325, BTQ06_27310, BvCmsKKP036_03588, BVL39_05405, BZL69_05770, C0P57_003010, C3F40_15505, C9E67_28700, CA593_06065, CCV12_004444, CDC27_21515, CO706_19465, CR538_24255, CR539_01630, CR628_004228, CV83915_02073, CY655_25255, D1H34_004550, D3Y67_20900, D9E49_24235, DAH19_24560, DAH21_23365, DAH22_22865, DAH27_25225, DAH28_23840, DAH32_23225, DAH33_24610, DAH34_21600, DAH37_22525, DAH38_23185, DAH40_23380, DAH41_23505, DAH42_24340, DAH43_24835, DAH45_24780, DAH46_24615, DAH47_25180, DAH48_24880, DAH49_24790, DNQ45_05140, DS732_01505, DU321_23465, E3N34_20940, E5P27_19115, E5P28_08865, E5P29_14360, EC95NR1_03445, EKI52_13985, EL79_4415, ELT25_22120, ELU85_23630, ELU98_01540, ELV02_23595, ELV12_15580, ExPECSC038_04335, FA849_13360, FA849_22895, FE584_21060, FE587_22575, FEL34_21300, FHO90_24295, FOI11_015750, FOI11_24390, FZN31_22945, FZU14_22815, G9448_13515, GAJ12_23515, GJ11_25160, H0O37_04690, H6Y26_004587, HV109_22460, HV146_01010, HV146_21790, HV209_21230, HVV39_13100, HVW04_13870, HVW43_15020, HVX31_01850, HVX31_19145, HVX32_01070, HVX32_19165, HVY77_24410, HVZ29_01065, HVZ29_19215, HVZ30_01935, HVZ30_19855, HVZ71_23905, HX136_23675, I6H00_17205, I6H01_14295, I6H02_15680, JE86ST02C_45170, JE86ST05C_45270, JFD_05085, JNP96_01240, NCTC10082_02089, NCTC10089_04881, NCTC10418_07157, NCTC10764_02980, NCTC10767_00724, NCTC10865_05903, NCTC11112_02273, NCTC11126_05444, NCTC11181_01973, NCTC11341_02766, NCTC12950_05222, NCTC13127_06172, NCTC13148_04399, NCTC13216_02099, NCTC4450_01743, NCTC7927_05257, NCTC7928_03622, NCTC8333_05566, NCTC8500_05333, NCTC8621_04880, NCTC8959_04056, NCTC8960_02348, NCTC9036_04657, NCTC9037_04790, NCTC9044_02296, NCTC9045_05550, NCTC9073_00863, NCTC9075_06435, NCTC9077_05944, NCTC9111_04963, NCTC9117_05912, NCTC9702_05647, NCTC9706_02011, NCTC9775_03134, NCTC9777_01126, RG28_25305, SAMEA3472044_04882, SAMEA3751407_05016, SAMEA3752557_04835, SAMEA3753106_04223, TUM18780_41760, WP4S18E07_42760 プラスミド: pET21a-EF-Tu / 発現宿主: Escherichia coli HB101 (大腸菌) / 参照: UniProt: E2QJ06 |
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#43: タンパク質 | 分子量: 11586.374 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A829CSJ4 |
+50S ribosomal protein ... , 29種, 29分子 CDEFGHJLMNOPQRSUVWXYZ12345678
-非ポリマー , 6種, 1461分子
#58: 化合物 | ChemComp-PAR / | ||||||||
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#59: 化合物 | ChemComp-MG / #60: 化合物 | #61: 化合物 | ChemComp-GCP / | #62: 化合物 | #63: 水 | ChemComp-HOH / | |
-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Structure of the Escherichia coli 70S ribosome in complex with EF-Tu and Ile-tRNAIle(LAU) bound to the near-cognate AUG codon (Structure II) タイプ: RIBOSOME / Entity ID: #1-#21, #23, #22, #24-#57 / 由来: NATURAL |
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分子量 | 値: 2.6 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
緩衝液 | pH: 7.4 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
試料支持 | グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 200 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/1 |
急速凍結 | 装置: LEICA EM GP / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 85 % / 凍結前の試料温度: 295 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: TFS KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 96000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2300 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1000 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 1 sec. / 電子線照射量: 40 e/Å2 / 検出モード: INTEGRATING フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 10734 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.1 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 47694 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 |
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拘束条件 |
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