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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8ehx | ||||||
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タイトル | cryo-EM structure of TMEM63B in LMNG | ||||||
要素 | CSC1-like protein 2 | ||||||
キーワード | MEMBRANE PROTEIN / ion channel / mechanosensitive / monomeric | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 alveolar lamellar body membrane / surfactant secretion / osmolarity-sensing monoatomic cation channel activity / mechanosensitive monoatomic cation channel activity / mechanosensitive monoatomic ion channel activity / calcium-activated cation channel activity / sensory perception of sound / actin cytoskeleton / early endosome membrane / plasma membrane 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.6 Å | ||||||
データ登録者 | Zheng, W. / Fu, T.M. / Holt, J.R. | ||||||
資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: Neuron / 年: 2023 タイトル: TMEM63 proteins function as monomeric high-threshold mechanosensitive ion channels. 著者: Wang Zheng / Shaun Rawson / Zhangfei Shen / Elakkiya Tamilselvan / Harper E Smith / Julia Halford / Chen Shen / Swetha E Murthy / Maximilian H Ulbrich / Marcos Sotomayor / Tian-Min Fu / Jeffrey R Holt / 要旨: OSCA/TMEM63s form mechanically activated (MA) ion channels in plants and animals, respectively. OSCAs and related TMEM16s and transmembrane channel-like (TMC) proteins form homodimers with two pores. ...OSCA/TMEM63s form mechanically activated (MA) ion channels in plants and animals, respectively. OSCAs and related TMEM16s and transmembrane channel-like (TMC) proteins form homodimers with two pores. Here, we uncover an unanticipated monomeric configuration of TMEM63 proteins. Structures of TMEM63A and TMEM63B (referred to as TMEM63s) revealed a single highly restricted pore. Functional analyses demonstrated that TMEM63s are bona fide mechanosensitive ion channels, characterized by small conductance and high thresholds. TMEM63s possess evolutionary variations in the intracellular linker IL2, which mediates dimerization in OSCAs. Replacement of OSCA1.2 IL2 with TMEM63A IL2 or mutations to key variable residues resulted in monomeric OSCA1.2 and MA currents with significantly higher thresholds. Structural analyses revealed substantial conformational differences in the mechano-sensing domain IL2 and gating helix TM6 between TMEM63s and OSCA1.2. Our studies reveal that mechanosensitivity in OSCA/TMEM63 channels is affected by oligomerization and suggest gating mechanisms that may be shared by OSCA/TMEM63, TMEM16, and TMC channels. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8ehx.cif.gz | 126.7 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8ehx.ent.gz | 96.1 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 8ehx.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8ehx_validation.pdf.gz | 1.4 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8ehx_full_validation.pdf.gz | 1.4 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8ehx_validation.xml.gz | 31.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8ehx_validation.cif.gz | 43.7 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/eh/8ehx ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/eh/8ehx | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 28154MC 8ehwC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 96051.203 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: TMEM63B, C6orf110 / 細胞株 (発現宿主): Expi293 / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: Q5T3F8 |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: TMEM63B purified protein in LMNG / タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT | |||||||||||||||
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分子量 | 値: 0.11 MDa / 実験値: YES | |||||||||||||||
由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) | |||||||||||||||
由来(組換発現) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) | |||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7.4 | |||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 濃度: 2.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | |||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3 | |||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 279 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 105000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2100 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 800 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 2.8 sec. / 電子線照射量: 53 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) |
電子光学装置 | エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 198144 / アルゴリズム: BACK PROJECTION / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: AB INITIO MODEL / 空間: REAL |