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- PDB-8e52: MicroED structure of proteinase K recorded on K2 -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8.0E+52
タイトルMicroED structure of proteinase K recorded on K2
要素Proteinase K
キーワードHYDROLASE / serine protease
機能・相同性
機能・相同性情報


peptidase K / serine-type endopeptidase activity / proteolysis / extracellular space / metal ion binding
類似検索 - 分子機能
Proteinase K-like catalytic domain / : / Peptidase S8 propeptide/proteinase inhibitor I9 / Peptidase inhibitor I9 / Peptidase S8 propeptide/proteinase inhibitor I9 superfamily / Peptidase S8, subtilisin, His-active site / Serine proteases, subtilase family, histidine active site. / Serine proteases, subtilase family, aspartic acid active site. / Peptidase S8, subtilisin, Asp-active site / Serine proteases, subtilase family, serine active site. ...Proteinase K-like catalytic domain / : / Peptidase S8 propeptide/proteinase inhibitor I9 / Peptidase inhibitor I9 / Peptidase S8 propeptide/proteinase inhibitor I9 superfamily / Peptidase S8, subtilisin, His-active site / Serine proteases, subtilase family, histidine active site. / Serine proteases, subtilase family, aspartic acid active site. / Peptidase S8, subtilisin, Asp-active site / Serine proteases, subtilase family, serine active site. / Peptidase S8, subtilisin, Ser-active site / Serine proteases, subtilase domain profile. / Peptidase S8, subtilisin-related / Peptidase S8/S53 domain superfamily / Subtilase family / Peptidase S8/S53 domain
類似検索 - ドメイン・相同性
生物種Parengyodontium album (菌類)
手法電子線結晶学 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.8 Å
データ登録者Clabbers, M.T.B. / Martynowycz, M.W. / Hattne, J. / Nannenga, B.L. / Gonen, T.
資金援助 米国, 2件
組織認可番号国
Howard Hughes Medical Institute (HHMI) 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)P41GM136508 米国
引用ジャーナル: J Struct Biol / 年: 2022
タイトル: Electron-counting MicroED data with the K2 and K3 direct electron detectors.
著者: Max T B Clabbers / Michael W Martynowycz / Johan Hattne / Brent L Nannenga / Tamir Gonen /
要旨: Microcrystal electron diffraction (MicroED) uses electron cryo-microscopy (cryo-EM) to collect diffraction data from small crystals during continuous rotation of the sample. As a result of advances ...Microcrystal electron diffraction (MicroED) uses electron cryo-microscopy (cryo-EM) to collect diffraction data from small crystals during continuous rotation of the sample. As a result of advances in hardware as well as methods development, the data quality has continuously improved over the past decade, to the point where even macromolecular structures can be determined ab initio. Detectors suitable for electron diffraction should ideally have fast readout to record data in movie mode, and high sensitivity at low exposure rates to accurately report the intensities. Direct electron detectors are commonly used in cryo-EM imaging for their sensitivity and speed, but despite their availability are generally not used in diffraction. Primary concerns with diffraction experiments are the dynamic range and coincidence loss, which will corrupt the measurement if the flux exceeds the count rate of the detector. Here, we describe instrument setup and low-exposure MicroED data collection in electron-counting mode using K2 and K3 direct electron detectors and show that the integrated intensities can be effectively used to solve structures of two macromolecules between 1.2 Å and 2.8 Å resolution. Even though a beam stop was not used with the K3 studies we did not observe damage to the camera. As these cameras are already available in many cryo-EM facilities, this provides opportunities for users who do not have access to dedicated facilities for MicroED.
履歴
登録2022年8月19日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02022年9月21日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12022年10月19日Group: Database references / カテゴリ: citation / Item: _citation.journal_volume

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
AAA: Proteinase K
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)29,0915
ポリマ－28,9311
非ポリマー1604
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
タイプ名称対称操作数
identity operation1_555x,y,z1
単位格子
Length a, b, c (Å)67.570, 67.570, 100.910
Angle α, β, γ (deg.)90.000, 90.000, 90.000
Int Tables number96
Space group name H-MP43212

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要素

#1: タンパク質 Proteinase K / Endopeptidase K / Tritirachium alkaline proteinase


分子量: 28930.783 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Parengyodontium album (菌類) / 遺伝子: PROK / 発現宿主: Parengyodontium album (菌類) / 参照: UniProt: P06873, peptidase K
#2: 化合物
ChemComp-CA / CALCIUM ION / カルシウムジカチオン


分子量: 40.078 Da / 分子数: 4 / 由来タイプ: 合成 / 式: Ca
研究の焦点であるリガンドがあるかN

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実験情報

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実験

実験手法: 電子線結晶学
EM実験試料の集合状態: 3D ARRAY / ３次元再構成法: 電子線結晶学

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試料調製

構成要素名称: Proteinase K / タイプ: COMPLEX / 詳細: Serine protease / Entity ID: #1 / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 0.0289 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: Parengyodontium album (菌類)
由来(組換発現)生物種: Parengyodontium album (菌類)
緩衝液pH: 8
試料濃度: 50 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: Microcrystals
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/1
急速凍結装置: LEICA PLUNGER / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 277 K

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データ収集

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: DIFFRACTION / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm / アライメント法: BASIC
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
最高温度: 90 K / 最低温度: 77 K
撮影平均露光時間: 0.025 sec. / 電子線照射量: 0.01 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 BASE (4k x 4k)
Num. of diffraction images: 1600 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1
画像スキャンサンプリングサイズ: 10 µm / 横: 1650 / 縦: 1470
EM回折カメラ長: 590 mm
EM回折 シェル解像度: 2.7→3.4 Å / フーリエ空間範囲: 83 % / 多重度: 6 / 構造因子数: 2499 / 位相残差: 33 °
EM回折 統計フーリエ空間範囲: 83 % / 再高解像度: 2.7 Å / 測定した強度の数: 30326 / 構造因子数: 5453 / 位相誤差: 28 ° / 位相誤差の除外基準: None / Rmerge: 64 / Rsym: 30

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解析

ソフトウェア名称: REFMAC / バージョン: 5.8.0257 / 分類: 精密化 / Contact author: Garib N. Murshudov / Contact author email: garib[at]mrc-lmb.cam.ac.uk / 日付: 2019年8月22日
解説: (un)restrained refinement or idealisation of macromolecular structures
EMソフトウェア
ID名称カテゴリ
11AIMLESScrystallography merging
12REFMAC３次元再構成
EM 3D crystal entity∠α: 90 ° / ∠β: 90 ° / ∠γ: 90 ° / A: 67.57 Å / B: 67.57 Å / C: 100.91 Å / 空間群名: P43212 / 空間群番号: 96
CTF補正タイプ: NONE
3次元再構成解像度の算出法: DIFFRACTION PATTERN/LAYERLINES / 対称性のタイプ: 3D CRYSTAL
原子モデル構築B value: 20.32 / プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: RECIPROCAL / Target criteria: Maximum liklihood
精密化解像度: 2.8→25.924 Å / Cor.coef. Fo:Fc: 0.87 / Cor.coef. Fo:Fc free: 0.809 / SU B: 34.683 / SU ML: 0.614 / 交差検証法: THROUGHOUT / ESU R Free: 0.506 / 詳細: Hydrogens have been added in their riding positions
Rfactor反射数%反射
Rfree0.292 391 6.479 %
Rwork0.2472 5644 -
all0.25 --
obs-6035 97.812 %
溶媒の処理イオンプローブ半径: 0.8 Å / 減衰半径: 0.8 Å / VDWプローブ半径: 1.2 Å / 溶媒モデル: MASK BULK SOLVENT
原子変位パラメータBiso mean: 20.322 Å2
Baniso -1Baniso -2Baniso -3
1-0.785 Å2-0 Å20 Å2
2--0.785 Å20 Å2
3----1.57 Å2
拘束条件
Refine-IDタイプDev idealDev ideal target数
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_bond_refined_d0.0040.0132070
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_bond_other_d00.0171806
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_angle_refined_deg1.3361.6392814
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_angle_other_deg1.231.5714188
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_dihedral_angle_1_deg7.0675278
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_dihedral_angle_2_deg33.9421.89595
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_dihedral_angle_3_deg15.51515299
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_dihedral_angle_4_deg17.6681512
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_chiral_restr0.0450.2279
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_gen_planes_refined0.0040.022417
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_gen_planes_other0.0010.02447
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_nbd_refined0.2090.2500
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_symmetry_nbd_other0.1920.21897
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_nbtor_refined0.1610.21060
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_symmetry_nbtor_other0.0770.2908
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_xyhbond_nbd_refined0.1520.262
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_metal_ion_refined0.0880.23
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_symmetry_nbd_refined0.1930.213
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_nbd_other0.2050.260
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_mcbond_it0.6322.1951115
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_mcbond_other0.6322.1941114
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_mcangle_it1.13.2931392
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_mcangle_other1.0993.2951393
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_scbond_it0.6632.296955
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_scbond_other0.6632.297956
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_scangle_it1.1953.4121422
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_scangle_other1.1953.4131423
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_lrange_it3.61326.9712388
ELECTRON CRYSTALLOGRAPHYr_lrange_other3.56226.9682388
LS精密化 シェル

Refine-ID: ELECTRON CRYSTALLOGRAPHY / Total num. of bins used: 20

解像度 (Å)Rfactor RfreeNum. reflection RfreeRfactor RworkNum. reflection RworkRfactor allNum. reflection allFsc freeFsc work% reflection obs (%)WRfactor Rwork
2.8-2.8720.369260.343970.3424300.4770.53998.37210.341
2.872-2.950.422270.3313970.3374280.6330.61399.06540.329
2.95-3.0340.359240.3473870.3484170.6510.65198.56110.351
3.034-3.1260.345280.3233650.3253980.7140.70598.74370.325
3.126-3.2270.348260.3143720.3174020.750.73499.0050.318
3.227-3.3390.366240.2913450.2963750.690.74698.40.296
3.339-3.4620.32240.2713400.2743690.8090.81498.6450.281
3.462-3.6010.265230.2193360.2223640.8530.88498.62640.227
3.601-3.7580.22190.2333190.2323430.9080.89498.54230.239
3.758-3.9370.262220.2153010.2183280.8790.89998.47560.223
3.937-4.1450.305200.1842840.1933150.9050.91496.50790.187
4.145-4.3890.239200.1922690.1952980.9180.92996.97990.192
4.389-4.6830.14180.1732610.1712880.9540.94196.8750.173
4.683-5.0440.185190.1972470.1962740.9560.9497.08030.199
5.044-5.5050.27170.1722230.1792460.9040.9497.5610.174
5.505-6.120.282120.1952170.1982330.8950.93198.28330.188
6.12-7.0020.225130.2141900.2152060.9350.92298.54370.214
7.002-8.4240.441120.2121670.2231860.8070.92596.23660.214
8.424-11.330.2890.2461370.2481520.850.92396.05260.244
11.33-25.9240.82180.69900.6991060.3520.67792.45281.184

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlc1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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