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万見
- PDB-8d1v: Cryo-EM structure of guide RNA and target RNA bound Cas7-11 -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8d1v
タイトルCryo-EM structure of guide RNA and target RNA bound Cas7-11
要素
  • CRISPR RNA (34-MER)
  • CRISPR-associated RAMP family protein
  • SS target RNA (5'-R(P*AP*GP*CP*UP*UP*GP*GP*UP*UP*CP*AP*AP*AP*GP*AP*AP*CP*G)-3')
キーワードRNA BINDING PROTEIN/RNA / Crispr / type III-E Cas7-11 / RNA BINDING PROTEIN / RNA BINDING PROTEIN-RNA complex
機能・相同性: / CRISPR type III-associated protein / RAMP superfamily / defense response to virus / RNA / RNA (> 10) / CRISPR-associated RAMP family protein
機能・相同性情報
生物種Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.82 Å
データ登録者Rai, J. / Goswami, H. / Li, H.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM R01 101343 米国
引用ジャーナル: Elife / 年: 2022
タイトル: Molecular mechanism of active Cas7-11 in processing CRISPR RNA and interfering target RNA.
著者: Hemant N Goswami / Jay Rai / Anuska Das / Hong Li /
要旨: Cas7-11 is a Type III-E CRISPR Cas effector that confers programmable RNA cleavage and has potential applications in RNA interference. Cas7-11 encodes a single polypeptide containing four Cas7- and ...Cas7-11 is a Type III-E CRISPR Cas effector that confers programmable RNA cleavage and has potential applications in RNA interference. Cas7-11 encodes a single polypeptide containing four Cas7- and one Cas11-like segments that obscures the distinction between the multi-subunit Class 1 and the single-subunit Class-2 CRISPR Cas systems. We report a cryo-EM (cryo-electron microscopy) structure of the active Cas7-11 from (DiCas7-11) that reveals the molecular basis for RNA processing and interference activities. DiCas7-11 arranges its Cas7- and Cas11-like domains in an extended form that resembles the backbone made up by four Cas7 and one Cas11 subunits in the multi-subunit enzymes. Unlike the multi-subunit enzymes, however, the backbone of DiCas7-11 contains evolutionarily different Cas7 and Cas11 domains, giving rise to their unique functionality. The first Cas7-like domain nearly engulfs the last 15 direct repeat nucleotides in processing and recognition of the CRISPR RNA, and its free-standing fragment retains most of the activity. Both the second and the third Cas7-like domains mediate target RNA cleavage in a metal-dependent manner. The structure and mutational data indicate that the long variable insertion to the fourth Cas7 domain has little impact on RNA processing or targeting, suggesting the possibility for engineering a compact and programmable RNA interference tool.
履歴
登録2022年5月27日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02022年11月2日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: EM metadata / Data content type: EM metadata / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Half map / Part number: 1 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Half map / Part number: 2 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Image / Data content type: Image / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Primary map / Data content type: Primary map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Half map / Part number: 1 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Half map / Part number: 2 / Data content type: Half map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Image / Data content type: Image / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年11月2日Data content type: Primary map / Data content type: Primary map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年6月12日Group: Data collection / カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond
改定 1.22025年5月14日Group: Data collection / Structure summary / カテゴリ: em_admin / em_software / pdbx_entry_details / Item: _em_admin.last_update / _em_software.name
改定 1.12025年5月14日Data content type: EM metadata / Data content type: EM metadata / EM metadata / Group: Data processing / Experimental summary / Data content type: EM metadata / EM metadata / カテゴリ: em_admin / em_software / Data content type: EM metadata / EM metadata / Item: _em_admin.last_update / _em_software.name

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: CRISPR-associated RAMP family protein
J: CRISPR RNA (34-MER)
N: SS target RNA (5'-R(P*AP*GP*CP*UP*UP*GP*GP*UP*UP*CP*AP*AP*AP*GP*AP*AP*CP*G)-3')
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)200,8297
ポリマ－200,5673
非ポリマー2624
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: タンパク質 CRISPR-associated RAMP family protein


分子量: 183933.000 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
遺伝子: DENIS_1082 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: A0A401FT36
#2: RNA鎖 CRISPR RNA (34-MER)


分子量: 10837.447 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#3: RNA鎖 SS target RNA (5'-R(P*AP*GP*CP*UP*UP*GP*GP*UP*UP*CP*AP*AP*AP*GP*AP*AP*CP*G)-3')


分子量: 5796.516 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#4: 化合物
ChemComp-ZN / ZINC ION


分子量: 65.409 Da / 分子数: 4 / 由来タイプ: 合成 / 式: Zn
Has protein modificationN

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: CryoEM structure of type III-E Cas7-11 from Desulfonema ishimotonii
タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#3 / 由来: RECOMBINANT
由来(天然)生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
緩衝液pH: 8
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
急速凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2200 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1000 nm
撮影電子線照射量: 60 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.20.1_4487: / 分類: 精密化
EMソフトウェア名称: PHENIX / カテゴリ: モデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 2.82 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 226320 / 対称性のタイプ: POINT
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00611327
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.72315507
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d14.7371963
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0431673
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0051829

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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