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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8cah | ||||||||||||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of native Otu2-bound ubiquitinated 43S pre-initiation complex | ||||||||||||||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME / Translation / Ubiquitin / Deubiquitinating enzyme / Initiation / Complex | ||||||||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 eukaryotic translation initiation factor 3 complex, eIF3e / eukaryotic translation initiation factor 3 complex, eIF3m / incipient cellular bud site / translation reinitiation / eukaryotic translation initiation factor 3 complex / formation of cytoplasmic translation initiation complex / multi-eIF complex / maturation of SSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, LSU-rRNA,5S) / eukaryotic 43S preinitiation complex / eukaryotic 48S preinitiation complex ...eukaryotic translation initiation factor 3 complex, eIF3e / eukaryotic translation initiation factor 3 complex, eIF3m / incipient cellular bud site / translation reinitiation / eukaryotic translation initiation factor 3 complex / formation of cytoplasmic translation initiation complex / multi-eIF complex / maturation of SSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, LSU-rRNA,5S) / eukaryotic 43S preinitiation complex / eukaryotic 48S preinitiation complex / negative regulation of glucose mediated signaling pathway / negative regulation of translational frameshifting / Negative regulators of DDX58/IFIH1 signaling / RMTs methylate histone arginines / positive regulation of translational fidelity / Protein methylation / mTORC1-mediated signalling / Protein hydroxylation / ribosome-associated ubiquitin-dependent protein catabolic process / GDP-dissociation inhibitor activity / nonfunctional rRNA decay / positive regulation of nuclear-transcribed mRNA catabolic process, deadenylation-dependent decay / Formation of the ternary complex, and subsequently, the 43S complex / Translation initiation complex formation / preribosome, small subunit precursor / Ribosomal scanning and start codon recognition / Major pathway of rRNA processing in the nucleolus and cytosol / mRNA destabilization / SRP-dependent cotranslational protein targeting to membrane / GTP hydrolysis and joining of the 60S ribosomal subunit / Nonsense Mediated Decay (NMD) independent of the Exon Junction Complex (EJC) / Nonsense Mediated Decay (NMD) enhanced by the Exon Junction Complex (EJC) / Formation of a pool of free 40S subunits / regulation of amino acid metabolic process / L13a-mediated translational silencing of Ceruloplasmin expression / ribosomal large subunit export from nucleus / protein deubiquitination / 90S preribosome / G-protein alpha-subunit binding / positive regulation of protein kinase activity / endonucleolytic cleavage to generate mature 3'-end of SSU-rRNA from (SSU-rRNA, 5.8S rRNA, LSU-rRNA) / regulation of translational fidelity / Ub-specific processing proteases / ribosomal subunit export from nucleus / ribosomal small subunit export from nucleus / translation regulator activity / endonucleolytic cleavage in ITS1 to separate SSU-rRNA from 5.8S rRNA and LSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, 5.8S rRNA, LSU-rRNA) / DNA-(apurinic or apyrimidinic site) endonuclease activity / translation initiation factor binding / translation initiation factor activity / cellular response to amino acid starvation / maturation of LSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, 5.8S rRNA, LSU-rRNA) / rescue of stalled ribosome / ribosome assembly / maturation of SSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, 5.8S rRNA, LSU-rRNA) / maturation of SSU-rRNA / small-subunit processome / translational initiation / protein kinase C binding / maintenance of translational fidelity / modification-dependent protein catabolic process / cytoplasmic stress granule / protein tag activity / rRNA processing / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / ribosome biogenesis / ribosome binding / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / cytosolic small ribosomal subunit / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / cysteine-type deubiquitinase activity / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / protein ubiquitination / structural constituent of ribosome / positive regulation of protein phosphorylation / G protein-coupled receptor signaling pathway / translation / negative regulation of gene expression / mRNA binding / ubiquitin protein ligase binding / nucleolus / ATP hydrolysis activity / mitochondrion / RNA binding / zinc ion binding / nucleoplasm / ATP binding / nucleus / metal ion binding / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) | ||||||||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3 Å | ||||||||||||||||||
データ登録者 | Ikeuchi, K. / Buschauer, R. / Cheng, J. / Berninghausen, O. / Becker, T. / Beckmann, R. | ||||||||||||||||||
資金援助 | ドイツ, 日本, 5件
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引用 | ジャーナル: Nat Commun / 年: 2023 タイトル: Molecular basis for recognition and deubiquitination of 40S ribosomes by Otu2. 著者: Ken Ikeuchi / Nives Ivic / Robert Buschauer / Jingdong Cheng / Thomas Fröhlich / Yoshitaka Matsuo / Otto Berninghausen / Toshifumi Inada / Thomas Becker / Roland Beckmann / 要旨: In actively translating 80S ribosomes the ribosomal protein eS7 of the 40S subunit is monoubiquitinated by the E3 ligase Not4 and deubiquitinated by Otu2 upon ribosomal subunit recycling. Despite its ...In actively translating 80S ribosomes the ribosomal protein eS7 of the 40S subunit is monoubiquitinated by the E3 ligase Not4 and deubiquitinated by Otu2 upon ribosomal subunit recycling. Despite its importance for translation efficiency the exact role and structural basis for this translational reset is poorly understood. Here, structural analysis by cryo-electron microscopy of native and reconstituted Otu2-bound ribosomal complexes reveals that Otu2 engages 40S subunits mainly between ribosome recycling and initiation stages. Otu2 binds to several sites on the intersubunit surface of the 40S that are not occupied by any other 40S-binding factors. This binding mode explains the discrimination against 80S ribosomes via the largely helical N-terminal domain of Otu2 as well as the specificity for mono-ubiquitinated eS7 on 40S. Collectively, this study reveals mechanistic insights into the Otu2-driven deubiquitination steps for translational reset during ribosome recycling/(re)initiation. | ||||||||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8cah.cif.gz | 2.2 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8cah.ent.gz | 1.7 MB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 8cah.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8cah_validation.pdf.gz | 1.7 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8cah_full_validation.pdf.gz | 1.8 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8cah_validation.xml.gz | 212.8 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8cah_validation.cif.gz | 374.8 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ca/8cah ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ca/8cah | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit ... , 6種, 7分子 lropqzy
#1: タンパク質 | 分子量: 38803.375 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A6A5PTA5 |
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#2: タンパク質 | 分子量: 30547.525 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A8H8UNW9 |
#3: タンパク質 | 分子量: 110517.641 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: P38249 |
#4: タンパク質 | 分子量: 88241.766 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A8H4F8W9 |
#5: タンパク質 | 分子量: 93310.172 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A8H4BZ29 |
#42: タンパク質 | 分子量: 29611.225 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A6A5PQW9 |
-タンパク質 , 8種, 8分子 imjEMOxG
#6: タンパク質 | 分子量: 17462.168 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A6A5PU90 |
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#7: タンパク質 | 分子量: 12330.147 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A6A5Q4K5 |
#8: タンパク質 | 分子量: 6571.091 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) |
#27: タンパク質 | 分子量: 16031.907 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: Q01855 |
#38: タンパク質 | 分子量: 6675.723 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: P41057 |
#40: タンパク質 | 分子量: 34841.219 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: P38011 |
#43: タンパク質 | 分子量: 68433.242 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: A0A6A5Q259 |
#46: タンパク質 | 分子量: 36157.016 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 遺伝子: OTU2, YHL013C / Variant: C178S / プラスミド: pKI1034 / 詳細 (発現宿主): p415GPDp-otu2-C178S-3xFLAG-CYC1t / 発現宿主: Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) / Variant (発現宿主): otu2 delta / 参照: UniProt: P38747 |
-RNA鎖 , 1種, 1分子 2
#9: RNA鎖 | 分子量: 579761.938 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) |
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+40S ribosomal protein ... , 30種, 30分子 PQRSTVWXYZabcdefgABCDFHIJKLNhU
-60S ribosomal protein ... , 2種, 2分子 kn
#44: タンパク質 | 分子量: 8576.831 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: P0CH08 |
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#45: タンパク質・ペプチド | 分子量: 3354.243 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae W303 (パン酵母) 参照: UniProt: P0CX86 |
-非ポリマー , 4種, 85分子
#48: 化合物 | ChemComp-MG / #49: 化合物 | #50: 化合物 | #51: 化合物 | ChemComp-ADP / | |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | N |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Yeast native 43S pre-initiation complex with deubiquitinating enzyme Otu2 bound to ubiquitinated eS7 タイプ: RIBOSOME / Entity ID: #1-#47 / 由来: NATURAL |
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分子量 | 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 株: W303 |
緩衝液 | pH: 7.5 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 3000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 500 nm |
撮影 | 電子線照射量: 46.4 e/Å2 / 検出モード: COUNTING フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) |
-解析
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||
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3次元再構成 | 解像度: 3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 18826 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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