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- PDB-7wah: Structure of Cas7-11 in complex with guide RNA and target RNA -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 7wah
タイトルStructure of Cas7-11 in complex with guide RNA and target RNA
要素
  • CRISPR-associated RAMP family protein
  • crRNA (39-MER)
  • tgRNA (5'-R(P*UP*AP*CP*CP*CP*AP*UP*GP*UP*CP*GP*AP*AP*GP*AP*CP*AP*AP*CP*AP*AP*AP*G)-3')
キーワードRNA BINDING PROTEIN/RNA / CRISPR / RNase / RNA BINDING PROTEIN-RNA COMPLEX
機能・相同性: / CRISPR type III-associated protein / RAMP superfamily / defense response to virus / RNA / RNA (> 10) / CRISPR-associated RAMP family protein
機能・相同性情報
生物種Escherichia coli (大腸菌)
Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.45 Å
データ登録者Kato, K. / Okazaki, S. / Isayama, Y. / Nishizawa, T. / Nishimasu, H.
資金援助 日本, 1件
組織認可番号国
Japan Agency for Medical Research and Development (AMED) 日本
引用ジャーナル: Cell / 年: 2022
タイトル: Structure and engineering of the type III-E CRISPR-Cas7-11 effector complex.
著者: Kazuki Kato / Wenyuan Zhou / Sae Okazaki / Yukari Isayama / Tomohiro Nishizawa / Jonathan S Gootenberg / Omar O Abudayyeh / Hiroshi Nishimasu /
要旨: The type III-E CRISPR-Cas effector Cas7-11, with dual RNase activities for precursor CRISPR RNA (pre-crRNA) processing and crRNA-guided target RNA cleavage, is a new platform for bacterial and ...The type III-E CRISPR-Cas effector Cas7-11, with dual RNase activities for precursor CRISPR RNA (pre-crRNA) processing and crRNA-guided target RNA cleavage, is a new platform for bacterial and mammalian RNA targeting. We report the 2.5-Å resolution cryoelectron microscopy structure of Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNA. Cas7-11 adopts a modular architecture comprising seven domains (Cas7.1-Cas7.4, Cas11, INS, and CTE) and four interdomain linkers. The crRNA 5' tag is recognized and processed by Cas7.1, whereas the crRNA spacer hybridizes with the target RNA. Consistent with our biochemical data, the catalytic residues for programmable cleavage in Cas7.2 and Cas7.3 neighbor the scissile phosphates before the flipped-out fourth and tenth nucleotides in the target RNA, respectively. Using structural insights, we rationally engineered a compact Cas7-11 variant (Cas7-11S) for single-vector AAV packaging for transcript knockdown in human cells, enabling in vivo Cas7-11 applications.
履歴
登録2021年12月14日登録サイト: PDBJ / 処理サイト: PDBJ
改定 1.02022年6月15日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年6月15日Data content type: EM metadata / Data content type: EM metadata / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年6月15日Data content type: Image / Data content type: Image / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年6月15日Data content type: Primary map / Data content type: Primary map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年6月15日Data content type: Image / Data content type: Image / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年6月15日Data content type: Primary map / Data content type: Primary map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年6月15日Data content type: Image / Data content type: Image / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.02022年6月15日Data content type: Primary map / Data content type: Primary map / Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12022年7月6日Group: Database references / カテゴリ: citation
Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last
改定 1.22024年6月26日Group: Data collection / カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond / em_admin / Item: _em_admin.last_update
改定 1.32025年6月18日Group: Data collection / Structure summary / カテゴリ: em_admin / em_software / pdbx_entry_details
Item: _em_admin.last_update / _em_software.name / _pdbx_entry_details.has_protein_modification
改定 1.12025年6月18日Data content type: EM metadata / Data content type: EM metadata / EM metadata / Group: Data processing / Experimental summary / Data content type: EM metadata / EM metadata / カテゴリ: em_admin / em_software / Data content type: EM metadata / EM metadata / Item: _em_admin.last_update / _em_software.name

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
R: crRNA (39-MER)
D: tgRNA (5'-R(P*UP*AP*CP*CP*CP*AP*UP*GP*UP*CP*GP*AP*AP*GP*AP*CP*AP*AP*CP*AP*AP*AP*G)-3')
A: CRISPR-associated RAMP family protein
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)205,7517
ポリマ－205,4903
非ポリマー2624
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: gel filtration
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

#1: RNA鎖 crRNA (39-MER)


分子量: 12502.379 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#2: RNA鎖 tgRNA (5'-R(P*UP*AP*CP*CP*CP*AP*UP*GP*UP*CP*GP*AP*AP*GP*AP*CP*AP*AP*CP*AP*AP*AP*G)-3')


分子量: 7377.513 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#3: タンパク質 CRISPR-associated RAMP family protein


分子量: 185609.875 Da / 分子数: 1 / Mutation: D429A, D654A, D753A / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Desulfonema ishimotonii (バクテリア)
遺伝子: DENIS_1082 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: A0A401FT36
#4: 化合物
ChemComp-ZN / ZINC ION


分子量: 65.409 Da / 分子数: 4 / 由来タイプ: 合成 / 式: Zn / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
研究の焦点であるリガンドがあるかY
Has protein modificationN

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素
ID名称タイプEntity IDParent-ID由来
1Cas7-11 in complex with a crRNA and its target RNACOMPLEX#1-#30MULTIPLE SOURCES
2crRNA and target RNACOMPLEX#1-#21RECOMBINANT
3Cas7-11COMPLEX#31RECOMBINANT
由来(天然)
IDEntity assembly-ID生物種Ncbi tax-ID
11Escherichia coli (大腸菌)562
22Desulfonema ishimotonii (バクテリア)45657
由来(組換発現)
IDEntity assembly-ID生物種Ncbi tax-ID
11Escherichia coli (大腸菌)562
22Escherichia coli (大腸菌)562
緩衝液pH: 7
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: GOLD
急速凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 1500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 600 nm
撮影電子線照射量: 76.5 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k)

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.20_4459: / 分類: 精密化
EMソフトウェア名称: PHENIX / カテゴリ: モデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
3次元再構成解像度: 2.45 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 127452 / 対称性のタイプ: POINT
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00213651
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.47818696
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d11.565377
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0392010
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0042203

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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