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- PDB-7ux8: Crystal structure of MfnG, an L- and D-tyrosine O-methyltransfera... -
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Open data
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Basic information
Entry | Database: PDB / ID: 7ux8 | ||||||||||||||||||||||||||||||
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Title | Crystal structure of MfnG, an L- and D-tyrosine O-methyltransferase from the marformycin biosynthesis pathway of Streptomyces drozdowiczii, with SAH and L-Tyrosine bound at 1.4 A resolution (P212121 - form II) | ||||||||||||||||||||||||||||||
![]() | MfnG | ||||||||||||||||||||||||||||||
![]() | TRANSFERASE / O-methyltransferase / O-methyl-tyrosine / Marformycin synthesis / SAM-dependent methyltransferase | ||||||||||||||||||||||||||||||
Function / homology | ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||
Biological species | ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||
Method | ![]() ![]() ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||
![]() | Miller, M.D. / Wu, K.-L. / Xu, W. / Xiao, H. / Philips Jr., G.N. | ||||||||||||||||||||||||||||||
Funding support | ![]()
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![]() | ![]() Title: Expanding the eukaryotic genetic code with a biosynthesized 21st amino acid. Authors: Wu, K.L. / Moore, J.A. / Miller, M.D. / Chen, Y. / Lee, C. / Xu, W. / Peng, Z. / Duan, Q. / Phillips Jr., G.N. / Uribe, R.A. / Xiao, H. | ||||||||||||||||||||||||||||||
History |
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Structure visualization
Structure viewer | Molecule: ![]() ![]() |
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Downloads & links
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PDBx/mmCIF format | ![]() | 470.1 KB | Display | ![]() |
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PDB format | ![]() | 394.2 KB | Display | ![]() |
PDBx/mmJSON format | ![]() | Tree view | ![]() | |
Others | ![]() |
-Validation report
Summary document | ![]() | 972.4 KB | Display | ![]() |
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Full document | ![]() | 979.1 KB | Display | |
Data in XML | ![]() | 36.1 KB | Display | |
Data in CIF | ![]() | 55.9 KB | Display | |
Arichive directory | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-Related structure data
Related structure data | ![]() 7ux6C ![]() 7ux7SC C: citing same article ( S: Starting model for refinement |
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Similar structure data | Similarity search - Function & homology ![]() |
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Links
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Assembly
Deposited unit | ![]()
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1 |
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Unit cell |
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Components
#1: Protein | Mass: 42042.246 Da / Num. of mol.: 2 Source method: isolated from a genetically manipulated source Source: (gene. exp.) ![]() ![]() ![]() #2: Chemical | #3: Chemical | #4: Chemical | Num. of mol.: 2 / Source method: obtained synthetically #5: Water | ChemComp-HOH / | Has ligand of interest | Y | Sequence details | The construct was cloned into the EcoRI and HindIII sites of pET22b with an N-terminal Met (0) ...The construct was cloned into the EcoRI and HindIII sites of pET22b with an N-terminal Met (0) added and the native GUG-start codon being expressed as V. A C-terminal expression and 6-His tag ASENLYFQ/GGGHHHHHHG | |
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-Experimental details
-Experiment
Experiment | Method: ![]() |
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Sample preparation
Crystal | Density Matthews: 2.13 Å3/Da / Density % sol: 42.17 % |
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Crystal grow | Temperature: 298 K / Method: vapor diffusion, sitting drop / pH: 8 Details: 0.1 M Tris pH 8, 30% Polyethylene glycol monomethyl ether (PEG MME) 2000, Additive: 0.002 M S-Adenosyl methionine (SAM/AdoMet), Soaking: added crystaline L-Tyrosine to the drop after MfnG crystals were formed |
-Data collection
Diffraction | Mean temperature: 100 K Crystal treatment: crystaline L-Tyrosine was added to the drop after the MfnG crystals were formed. After 46 hours, the MfnG crystals were harvested and flash cooled by immersion in liquid nitrogen Serial crystal experiment: N | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Diffraction source | Source: ![]() ![]() ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Detector | Type: DECTRIS EIGER X 9M / Detector: PIXEL / Date: Mar 5, 2021 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Radiation | Monochromator: Si(111) / Protocol: SINGLE WAVELENGTH / Monochromatic (M) / Laue (L): M / Scattering type: x-ray | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Radiation wavelength | Wavelength: 0.9762 Å / Relative weight: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Reflection | Resolution: 1.4→31.3 Å / Num. obs: 141301 / % possible obs: 99.7 % / Redundancy: 13.109 % / Biso Wilson estimate: 18 Å2 / CC1/2: 0.999 / Rmerge(I) obs: 0.11 / Rrim(I) all: 0.114 / Χ2: 0.828 / Net I/σ(I): 15.37 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Reflection shell | Diffraction-ID: 1
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Processing
Software |
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Refinement | Method to determine structure: ![]() Starting model: 7UX7 Resolution: 1.4→31.3 Å / SU ML: 0.19 / Cross valid method: THROUGHOUT / σ(F): 1.35 / Phase error: 17.1 / Stereochemistry target values: ML Details: 1. HYDROGENS HAVE BEEN INCLUDED AT THEIR RIDING POSITIONS USING THE ELECTRON CLOUD DISTANCES. 2. THE STRUCTURE WAS REFINED USING REFERENCE MODEL RESTRAINTS FROM THE HIGH RESOLUTION STRUCTURE ...Details: 1. HYDROGENS HAVE BEEN INCLUDED AT THEIR RIDING POSITIONS USING THE ELECTRON CLOUD DISTANCES. 2. THE STRUCTURE WAS REFINED USING REFERENCE MODEL RESTRAINTS FROM THE HIGH RESOLUTION STRUCTURE FROM THE SAME CRYSTAL FORM CONTAINING THE COPURIFIED METABOLITE (7UX7). 3. THERE WAS CLEAR DIFFERENCE DENSITY FOR L-TYROSINE IN THE ACTIVE SITE IN THE OMIT MAP. HOWEVER, AFTER REFINEMENT, THERE WAS RESIDUAL DIFFERENCE DENSITY SUGGESTING THAT THE SOAKED L-TYROSINE HAD NOT COMPLETELY DISPLACED THE UNKNOWN LIGAND (UNL) THAT HAD CO-PURIFIED WITH THE PROTEIN. TRYING DIFFERENT OCCUPANCY RATIOS, 70:30 WAS THE BEST FIT. 4. THE STRUCTURE CONTAINS AND UNKNOWN LIGAND UNL BOUND IN THE ACTIVE SITE. THE COMPOUND IS A METABOLITE THAT CO-PURIFIED WITH THE PROTEIN. THE STRUCTURE LOOKS SIMILAR TO NIACIN, NICOTINAMIDE, BENZOATE, NITORBENZENE ETC. SINCE THE PRECISE SPECIES IS NOT KNOWN, IT WAS MODELED AS AN UNL. 5. EVEN THOUGH THE CRYSTALLIZATION DROPS WERE SETUP WITH S-ADENOSYLMETHIONINE (SAM/ADOMET), ELECTRON DENSITY CLEARLY SHOWS THAT THE COFACTOR HAS BROKEN DOWN TO S-ADENOSYL-L-HOMOCYSTEINE (SAH/ADOHCY). 6. THE C-TERMINUS OF CHAIN A PACKS AGAINST CHAIN B FROM A SYMMETRY MATE IN THE UNIT CELL. THIS SHIFTS THE POSITION OF SEVERAL RESIDUES IN CHAIN B TO ACCOMMODATE THE C-TERMINAL TAG REGION. HOWEVER, THE INTERACTION IS NOT COMPLETE. AFTER MODELING THIS MAJOR SHIFTED PORTION, THERE IS RESIDUAL DIFFERENCE DENSITY FOR A CONFORMATION THAT IS SIMILAR TO THE WHAT IS SEEN IN CHAIN A AND OTHER CRYSTAL FORMS. OCCUPANCY REFINEMENT SUGGESTED ABOUT 60: 40 SPLIT. SINCE ONLY THE MAJOR PORTION OF THE CHAIN A C-TERMINUS (367-383)COULD BE MODELED, THIS WAS FIXED AT 0.6 OCCUPANCY TO MATCH THE CHAIN B PORTION THAT IT INTERACTS WITH, WHILE THE OTHER 0.4 OCCUPANCY PORTION COULD NOT BE MODELED DUE TO DISORDER.
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Solvent computation | Shrinkage radii: 0.9 Å / VDW probe radii: 1.11 Å / Solvent model: FLAT BULK SOLVENT MODEL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Displacement parameters | Biso mean: 26.08 Å2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Refinement step | Cycle: LAST / Resolution: 1.4→31.3 Å
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Refine LS restraints |
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LS refinement shell |
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Refinement TLS params. | Method: refined / Refine-ID: X-RAY DIFFRACTION
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Refinement TLS group |
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