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万見
- PDB-7k2t: Mg2+/ATP-bound structure of the full-length WzmWzt O antigen ABC ... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 7k2t
タイトルMg2+/ATP-bound structure of the full-length WzmWzt O antigen ABC transporter in lipid nanodiscs
要素
  • ABC transporter
  • Transport permease protein
キーワードTRANSPORT PROTEIN / O antigen transporter / integral membrane protein / lipopolysaccharide LPS biosynthesis
機能・相同性
機能・相同性情報


lipopolysaccharide transport / ABC-type transporter activity / ATP hydrolysis activity / ATP binding / membrane / plasma membrane
類似検索 - 分子機能
Wzt, C-terminal / Wzt C-terminal domain / : / ABC transporter integral membrane type-2 domain profile. / : / ABC transporter, teichoic acids export TagH-like / ABC-2 type transporter / ABC-2 type transporter / ABC transporter-like, conserved site / ABC transporters family signature. ...Wzt, C-terminal / Wzt C-terminal domain / : / ABC transporter integral membrane type-2 domain profile. / : / ABC transporter, teichoic acids export TagH-like / ABC-2 type transporter / ABC-2 type transporter / ABC transporter-like, conserved site / ABC transporters family signature. / ABC transporter / ABC transporter-like, ATP-binding domain / ATP-binding cassette, ABC transporter-type domain profile. / ATPases associated with a variety of cellular activities / AAA+ ATPase domain / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
ADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / ABC transporter / Transport permease protein
類似検索 - 構成要素
生物種Aquifex aeolicus (バクテリア)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.6 Å
データ登録者Caffalette, C.A. / Zimmer, J.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS) 米国
引用ジャーナル: Proc Natl Acad Sci U S A / 年: 2021
タイトル: Cryo-EM structure of the full-length WzmWzt ABC transporter required for lipid-linked O antigen transport.
著者: Christopher A Caffalette / Jochen Zimmer /
要旨: O antigens are important cell surface polysaccharides in gram-negative bacteria where they extend core lipopolysaccharides in the extracellular leaflet of the outer membrane. O antigen structures are ...O antigens are important cell surface polysaccharides in gram-negative bacteria where they extend core lipopolysaccharides in the extracellular leaflet of the outer membrane. O antigen structures are serotype specific and form extended cell surface barriers endowing many pathogens with survival benefits. In the ABC transporter-dependent biosynthesis pathway, O antigens are assembled on the cytosolic side of the inner membrane on a lipid anchor and reoriented to the periplasmic leaflet by the channel-forming WzmWzt ABC transporter for ligation to the core lipopolysaccharides. In many cases, this process depends on the chemical modification of the O antigen's nonreducing terminus, sensed by WzmWzt via a carbohydrate-binding domain (CBD) that extends its nucleotide-binding domain (NBD). Here, we provide the cryo-electron microscopy structure of the full-length WzmWzt transporter from bound to adenosine triphosphate (ATP) and in a lipid environment, revealing a highly asymmetric transporter organization. The CBDs dimerize and associate with only one NBD. Conserved loops at the CBD dimer interface straddle a conserved peripheral NBD helix. The CBD dimer is oriented perpendicularly to the NBDs and its putative ligand-binding sites face the transporter to likely modulate ATPase activity upon O antigen binding. Further, our structure reveals a closed WzmWzt conformation in which an aromatic belt near the periplasmic channel exit seals the transporter in a resting, ATP-bound state. The sealed transmembrane channel is asymmetric, with one open and one closed cytosolic and periplasmic portal. The structure provides important insights into O antigen recruitment to and translocation by WzmWzt and related ABC transporters.
履歴
登録2020年9月9日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02021年1月13日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12021年1月27日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author
Item: _citation.journal_volume / _citation.pdbx_database_id_PubMed ..._citation.journal_volume / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation_author.identifier_ORCID
改定 1.22024年3月6日Group: Data collection / Database references / Refinement description
カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond ...chem_comp_atom / chem_comp_bond / database_2 / em_3d_fitting_list / pdbx_initial_refinement_model
Item: _database_2.pdbx_DOI / _database_2.pdbx_database_accession ..._database_2.pdbx_DOI / _database_2.pdbx_database_accession / _em_3d_fitting_list.accession_code / _em_3d_fitting_list.initial_refinement_model_id / _em_3d_fitting_list.source_name / _em_3d_fitting_list.type

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構造の表示

ムービー
  • 登録構造単位
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
  • EMマップとの重ね合わせ
  • マップデータ: EMDB-22644
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: ABC transporter
B: Transport permease protein
C: ABC transporter
D: Transport permease protein
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)153,6868
ポリマ－152,6234
非ポリマー1,0634
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: gel filtration, SDS-PAGE, Gel filtration, UV/Vis absorbance-based concentration, crystallography- and cryo-EM-based structure determination support the assembly.
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551
Buried area17790 Å2
ΔGint-132 kcal/mol
Surface area53020 Å2

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要素

#1: タンパク質 ABC transporter


分子量: 46283.426 Da / 分子数: 2 / 変異: E167Q / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Aquifex aeolicus (strain VF5) (バクテリア)
株: VF5 / 遺伝子: abcT4, aq_1094 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: O67181
#2: タンパク質 Transport permease protein


分子量: 30027.871 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Aquifex aeolicus (strain VF5) (バクテリア)
株: VF5 / 遺伝子: abcT3, aq_1095 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: O67182
#3: 化合物 ChemComp-ATP / ADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / ATP


分子量: 507.181 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: C10H16N5O13P3 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION / コメント: ATP, エネルギー貯蔵分子*YM
#4: 化合物 ChemComp-MG / MAGNESIUM ION / マグネシウムジカチオン


分子量: 24.305 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: Mg / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Full-length WzmWzt O antigen ABC transporter / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#2 / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 0.152385 MDa / 実験値: NO
由来(天然)生物種: Aquifex aeolicus VF5 (バクテリア)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
緩衝液pH: 7.5
試料濃度: 1.1 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: 2.5 mM ATP and 2.5 mM MgCl2
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: OTHER
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 81000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2200 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1200 nm / Cs: 2.7 mm
撮影平均露光時間: 2.4767 sec. / 電子線照射量: 45.0252 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 5938

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1RELION3.0.8粒子像選択
2SerialEM画像取得
4CTFFIND4.1.13CTF補正
7UCSF Chimera1.14モデルフィッティング
8Coot0.8.9.2モデルフィッティング
10RELION3.0.8初期オイラー角割当
11RELION3.0.8最終オイラー角割当
12RELION3.0.8分類
13RELION3.0.8３次元再構成
14PHENIX1.17.1モデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 3.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 48174 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: AB INITIO MODEL / 空間: REAL
原子モデル構築
IDPDB-ID 3D fitting-IDAccession codeInitial refinement model-IDSource nameタイプ
16M96

6m96

16M961PDBexperimental model
26O14

6o14

16O142PDBexperimental model

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlc1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

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  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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