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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 6qcw | |||||||||
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タイトル | Crystal structure of influenza B polymerase initiation state with capped 14-mer RNA primer | |||||||||
要素 |
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キーワード | VIRAL PROTEIN / RNA dependent RNA polymerase | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 cap snatching / viral transcription / symbiont-mediated suppression of host mRNA transcription via inhibition of RNA polymerase II activity / host cell mitochondrion / 7-methylguanosine mRNA capping / virion component / endonuclease activity / host cell cytoplasm / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / RNA-directed RNA polymerase ...cap snatching / viral transcription / symbiont-mediated suppression of host mRNA transcription via inhibition of RNA polymerase II activity / host cell mitochondrion / 7-methylguanosine mRNA capping / virion component / endonuclease activity / host cell cytoplasm / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / RNA-directed RNA polymerase / viral RNA genome replication / RNA-dependent RNA polymerase activity / nucleotide binding / DNA-templated transcription / host cell nucleus / RNA binding / metal ion binding 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Influenza B virus (B型インフルエンザウイルス) synthetic construct (人工物) | |||||||||
手法 | X線回折 / シンクロトロン / 分子置換 / 解像度: 2.88 Å | |||||||||
データ登録者 | Cusack, S. / Drncova, P. | |||||||||
資金援助 | European Union, フランス, 2件
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引用 | ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2019 タイトル: Structural snapshots of actively transcribing influenza polymerase. 著者: Tomas Kouba / Petra Drncová / Stephen Cusack / 要旨: Influenza virus RNA-dependent RNA polymerase uses unique mechanisms to transcribe its single-stranded genomic viral RNA (vRNA) into messenger RNA. The polymerase is initially bound to a promoter ...Influenza virus RNA-dependent RNA polymerase uses unique mechanisms to transcribe its single-stranded genomic viral RNA (vRNA) into messenger RNA. The polymerase is initially bound to a promoter comprising the partially base-paired 3' and 5' extremities of the RNA. A short, capped primer, 'cap-snatched' from a nascent host polymerase II transcript, is directed towards the polymerase active site to initiate RNA synthesis. Here we present structural snapshots, as determined by X-ray crystallography and cryo-electron microscopy, of actively initiating influenza polymerase as it transitions towards processive elongation. Unexpected conformational changes unblock the active site cavity to allow establishment of a nine-base-pair template-product RNA duplex before the strands separate into distinct exit channels. Concomitantly, as the template translocates, the promoter base pairs are broken and the template entry region is remodeled. These structures reveal details of the influenza polymerase active site that will help optimize nucleoside analogs or other compounds that directly inhibit viral RNA synthesis. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 6qcw.cif.gz | 951.2 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb6qcw.ent.gz | 788.3 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 6qcw.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 6qcw_validation.pdf.gz | 505.6 KB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 6qcw_full_validation.pdf.gz | 528.6 KB | 表示 | |
XML形式データ | 6qcw_validation.xml.gz | 70.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 6qcw_validation.cif.gz | 97.8 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/qc/6qcw ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/qc/6qcw | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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単位格子 |
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-要素
-タンパク質 , 3種, 3分子 ABC
#1: タンパク質 | 分子量: 85822.781 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: N-terminal His-tag C-terminal linker and TEV site 由来: (組換発現) Influenza B virus (B型インフルエンザウイルス) 遺伝子: PA / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) 参照: UniProt: Q5V8Z9, 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 |
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#2: タンパク質 | 分子量: 86207.016 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: N-terminal linker C-terminal linker and TEV site 由来: (組換発現) Influenza B virus (B型インフルエンザウイルス) 遺伝子: PB1 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q5V8Y6, RNA-directed RNA polymerase |
#3: タンパク質 | 分子量: 90844.109 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: N-terminal linker C-terminal STREP-tag and TEV site 由来: (組換発現) Influenza B virus (B型インフルエンザウイルス) 遺伝子: PB2 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q5V8X3 |
-RNA鎖 , 3種, 3分子 MRV
#4: RNA鎖 | 分子量: 4936.968 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: Capped RNA 14-mer / 由来: (合成) synthetic construct (人工物) |
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#5: RNA鎖 | 分子量: 6525.820 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: 3' end of vRNA promoter (extended) / 由来: (合成) synthetic construct (人工物) |
#6: RNA鎖 | 分子量: 4557.820 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: 5' end of vRNA promoter / 由来: (合成) synthetic construct (人工物) |
-非ポリマー , 1種, 3分子
#7: 化合物 |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: X線回折 / 使用した結晶の数: 1 |
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-試料調製
結晶 | マシュー密度: 5.33 Å3/Da / 溶媒含有率: 76.91 % / 解説: Marquise shaped |
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結晶化 | 温度: 277 K / 手法: 蒸気拡散法, ハンギングドロップ法 / pH: 4.4 詳細: Influenza B polymerase at 9 mg per ml in was mixed with 40 microM vRNA 5 prime end 14-mer, 40 microM vRNA 3 prime end 21-mer and 80 microM 14-mer capped RNA. The mother liquor contained 200 ...詳細: Influenza B polymerase at 9 mg per ml in was mixed with 40 microM vRNA 5 prime end 14-mer, 40 microM vRNA 3 prime end 21-mer and 80 microM 14-mer capped RNA. The mother liquor contained 200 mM di-ammonium phosphate and 100 mM sodium acetate between pH 4.0 and 4.4. PH範囲: 4.0-4.4 |
-データ収集
回折 | 平均測定温度: 100 K / Serial crystal experiment: N |
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放射光源 | 由来: シンクロトロン / サイト: ESRF / ビームライン: ID29 / 波長: 0.977 Å |
検出器 | タイプ: DECTRIS PILATUS 6M-F / 検出器: PIXEL / 日付: 2018年8月24日 |
放射 | プロトコル: SINGLE WAVELENGTH / 単色(M)・ラウエ(L): M / 散乱光タイプ: x-ray |
放射波長 | 波長: 0.977 Å / 相対比: 1 |
反射 | 解像度: 2.88→50 Å / Num. obs: 81417 / % possible obs: 60.7 % / 冗長度: 8.2 % / CC1/2: 0.995 / Rrim(I) all: 0.185 / Rsym value: 0.177 / Net I/σ(I): 8.2 |
反射 シェル | 解像度: 2.88→3.12 Å / 冗長度: 10 % / Mean I/σ(I) obs: 1.8 / CC1/2: 0.677 / Rrim(I) all: 1.5 / Rsym value: 1.42 / % possible all: 60.9 |
-解析
ソフトウェア |
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精密化 | 構造決定の手法: 分子置換 開始モデル: 5MSG 解像度: 2.88→50 Å / Cor.coef. Fo:Fc: 0.861 / Cor.coef. Fo:Fc free: 0.915 / SU B: 38.785 / SU ML: 0.305 / 交差検証法: THROUGHOUT / ESU R: 1.756 / ESU R Free: 0.396 / 詳細: HYDROGENS HAVE BEEN ADDED IN THE RIDING POSITIONS
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溶媒の処理 | イオンプローブ半径: 0.8 Å / 減衰半径: 0.8 Å / VDWプローブ半径: 1.2 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子変位パラメータ | Biso mean: 105.835 Å2
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精密化ステップ | サイクル: 1 / 解像度: 2.88→50 Å
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拘束条件 |
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