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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 5we4 | |||||||||
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タイトル | 70S ribosome-EF-Tu wt complex with GppNHp | |||||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME / translation / GTPase | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 guanyl-nucleotide exchange factor complex / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / guanosine tetraphosphate binding / stringent response / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / translational elongation ...guanyl-nucleotide exchange factor complex / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / guanosine tetraphosphate binding / stringent response / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / translational elongation / transcriptional attenuation / endoribonuclease inhibitor activity / RNA-binding transcription regulator activity / positive regulation of ribosome biogenesis / negative regulation of cytoplasmic translation / translation elongation factor activity / four-way junction DNA binding / translational termination / DnaA-L2 complex / translation repressor activity / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / negative regulation of translational initiation / regulation of mRNA stability / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / ribosome assembly / assembly of large subunit precursor of preribosome / positive regulation of RNA splicing / transcription elongation factor complex / cytosolic ribosome assembly / regulation of DNA-templated transcription elongation / DNA endonuclease activity / response to reactive oxygen species / transcription antitermination / regulation of cell growth / translational initiation / DNA-templated transcription termination / maintenance of translational fidelity / response to radiation / mRNA 5'-UTR binding / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / large ribosomal subunit / ribosome biogenesis / ribosome binding / regulation of translation / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / 5S rRNA binding / large ribosomal subunit rRNA binding / transferase activity / cytosolic small ribosomal subunit / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / molecular adaptor activity / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / translation / response to antibiotic / negative regulation of DNA-templated transcription / GTPase activity / mRNA binding / GTP binding / DNA binding / RNA binding / zinc ion binding / membrane / plasma membrane / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) | |||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.1 Å | |||||||||
データ登録者 | Fislage, M. / Brown, Z. / Frank, J. | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2018 タイトル: Cryo-EM shows stages of initial codon selection on the ribosome by aa-tRNA in ternary complex with GTP and the GTPase-deficient EF-TuH84A. 著者: Marcus Fislage / Jingji Zhang / Zuben Patrick Brown / Chandra Sekhar Mandava / Suparna Sanyal / Måns Ehrenberg / Joachim Frank / 要旨: The GTPase EF-Tu in ternary complex with GTP and aminoacyl-tRNA (aa-tRNA) promotes rapid and accurate delivery of cognate aa-tRNAs to the ribosomal A site. Here we used cryo-EM to study the molecular ...The GTPase EF-Tu in ternary complex with GTP and aminoacyl-tRNA (aa-tRNA) promotes rapid and accurate delivery of cognate aa-tRNAs to the ribosomal A site. Here we used cryo-EM to study the molecular origins of the accuracy of ribosome-aided recognition of a cognate ternary complex and the accuracy-amplifying role of the monitoring bases A1492, A1493 and G530 of the 16S rRNA. We used the GTPase-deficient EF-Tu variant H84A with native GTP, rather than non-cleavable GTP analogues, to trap a near-cognate ternary complex in high-resolution ribosomal complexes of varying codon-recognition accuracy. We found that ribosome complexes trapped by GTPase-deficicent ternary complex due to the presence of EF-TuH84A or non-cleavable GTP analogues have very similar structures. We further discuss speed and accuracy of initial aa-tRNA selection in terms of conformational changes of aa-tRNA and stepwise activation of the monitoring bases at the decoding center of the ribosome. | |||||||||
履歴 |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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PDBx/mmCIF形式 | 5we4.cif.gz | 3.9 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb5we4.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 5we4.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
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-検証レポート
文書・要旨 | 5we4_validation.pdf.gz | 1.8 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 5we4_full_validation.pdf.gz | 1.9 MB | 表示 | |
XML形式データ | 5we4_validation.xml.gz | 242.7 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 5we4_validation.cif.gz | 423.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/we/5we4 ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/we/5we4 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 8814MC 8813C 8815C 8826C 8828C 8829C 5wdtC 5we6C 5wf0C 5wfkC 5wfsC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-RNA鎖 , 6種, 7分子 ABavwxy
#1: RNA鎖 | 分子量: 941548.438 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: GenBank: 731469900 | ||||
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#2: RNA鎖 | 分子量: 38813.133 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: GenBank: 1174070234 | ||||
#34: RNA鎖 | 分子量: 499239.000 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: GenBank: 1114169151 | ||||
#55: RNA鎖 | 分子量: 24818.893 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: GenBank: 731469900 #56: RNA鎖 | | 分子量: 3773.280 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 詳細: in vitro transcription vector pT7-TP(deltai) / 由来: (合成) Escherichia coli #57: RNA鎖 | | 分子量: 24649.912 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 |
+50S ribosomal protein ... , 31種, 31分子 CDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ0123456
-30S ribosomal protein ... , 20種, 20分子 bcdefghijklmnopqrstu
#35: タンパク質 | 分子量: 24253.943 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7V0 |
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#36: タンパク質 | 分子量: 23078.785 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7V3 |
#37: タンパク質 | 分子量: 23383.002 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7V8 |
#38: タンパク質 | 分子量: 16532.088 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7W1 |
#39: タンパク質 | 分子量: 11669.371 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P02358 |
#40: タンパク質 | 分子量: 16861.523 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P02359 |
#41: タンパク質 | 分子量: 14015.361 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7W7 |
#42: タンパク質 | 分子量: 14554.882 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7X3 |
#43: タンパク質 | 分子量: 11196.988 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7R5 |
#44: タンパク質 | 分子量: 12388.068 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7R9 |
#45: タンパク質 | 分子量: 13436.703 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7S3 |
#46: タンパク質 | 分子量: 12738.911 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7S9 |
#47: タンパク質 | 分子量: 11546.442 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0AG59 |
#48: タンパク質 | 分子量: 10159.621 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0ADZ4 |
#49: タンパク質 | 分子量: 9207.572 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7T3 |
#50: タンパク質 | 分子量: 9263.946 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0AG63 |
#51: タンパク質 | 分子量: 7606.768 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7T7 |
#52: タンパク質 | 分子量: 9057.626 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7U3 |
#53: タンパク質 | 分子量: 9506.190 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P0A7U7 |
#54: タンパク質 | 分子量: 7763.073 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 参照: UniProt: P68679 |
-タンパク質 , 1種, 1分子 z
#58: タンパク質 | 分子量: 43238.312 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE 600 / 遺伝子: tufB, b3980, JW3943 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0CE48 |
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-非ポリマー , 6種, 2618分子
#59: 化合物 | ChemComp-MG / #60: 化合物 | ChemComp-K / | #61: 化合物 | ChemComp-FME / | #62: 化合物 | ChemComp-PHE / | #63: 化合物 | ChemComp-GNP / | #64: 水 | ChemComp-HOH / | |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: 70S ribosome-EF-Tu (H84A) in complex with GppNHp / タイプ: RIBOSOME / Entity ID: #1-#58 / 由来: MULTIPLE SOURCES | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
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由来(天然) | 生物種: Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7.5 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: 300 nM 70S ribosome in final mixture | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
試料支持 | 詳細: grids were manually coated with gold and the carbon support was removed by glow discharge. gas mixture: 20% hydrogen/80% oxygen power: 15 W グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 293 K / 詳細: 5 second blot time, no wait time |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI POLARA 300 |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 39000 X / 倍率(補正後): 51020 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1500 nm / Calibrated defocus min: 500 nm / 最大 デフォーカス(補正後): 4000 nm / Cs: 2.26 mm / C2レンズ絞り径: 30 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN / 試料ホルダーモデル: OTHER |
撮影 | 平均露光時間: 0.2 sec. / 電子線照射量: 67 e/Å2 / 検出モード: SUPER-RESOLUTION フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 2844 |
画像スキャン | サンプリングサイズ: 5 µm / 横: 3838 / 縦: 3710 / 動画フレーム数/画像: 40 / 利用したフレーム数/画像: 1-40 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 168315 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.1 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 56963 / アルゴリズム: BACK PROJECTION / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | B value: 84 / プロトコル: OTHER / 空間: RECIPROCAL |