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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 5gap | ||||||
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タイトル | Body region of the U4/U6.U5 tri-snRNP | ||||||
要素 |
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キーワード | TRANSCRIPTION / snRNP / spliceosome / RNA-protein complex / U4/U6.U5 snRNP | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 spliceosomal conformational changes to generate catalytic conformation / snoRNA splicing / snoRNA guided rRNA 2'-O-methylation / box C/D sno(s)RNA 3'-end processing / box C/D methylation guide snoRNP complex / U4/U6 snRNP / spliceosome conformational change to release U4 (or U4atac) and U1 (or U11) / U4 snRNA binding / spliceosomal tri-snRNP complex / U3 snoRNA binding ...spliceosomal conformational changes to generate catalytic conformation / snoRNA splicing / snoRNA guided rRNA 2'-O-methylation / box C/D sno(s)RNA 3'-end processing / box C/D methylation guide snoRNP complex / U4/U6 snRNP / spliceosome conformational change to release U4 (or U4atac) and U1 (or U11) / U4 snRNA binding / spliceosomal tri-snRNP complex / U3 snoRNA binding / U4 snRNP / precatalytic spliceosome / Major pathway of rRNA processing in the nucleolus and cytosol / generation of catalytic spliceosome for second transesterification step / spliceosomal complex assembly / mRNA 5'-splice site recognition / mRNA 3'-splice site recognition / spliceosomal tri-snRNP complex assembly / U5 snRNA binding / U5 snRNP / U2 snRNA binding / U6 snRNA binding / spliceosomal snRNP assembly / pre-mRNA intronic binding / U1 snRNA binding / U4/U6 x U5 tri-snRNP complex / catalytic step 2 spliceosome / maturation of SSU-rRNA from tricistronic rRNA transcript (SSU-rRNA, 5.8S rRNA, LSU-rRNA) / maturation of SSU-rRNA / small-subunit processome / spliceosomal complex / mRNA splicing, via spliceosome / metallopeptidase activity / nucleic acid binding / RNA helicase activity / RNA helicase / mRNA binding / nucleolus / ATP hydrolysis activity / mitochondrion / RNA binding / nucleoplasm / ATP binding / identical protein binding / nucleus / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.6 Å | ||||||
データ登録者 | Nguyen, T.H.D. / Galej, W.P. / Oubridge, C. / Bai, X.C. / Newman, A. / Scheres, S. / Nagai, K. | ||||||
資金援助 | 英国, 1件
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引用 | ジャーナル: Nature / 年: 2016 タイトル: Cryo-EM structure of the yeast U4/U6.U5 tri-snRNP at 3.7 Å resolution. 著者: Thi Hoang Duong Nguyen / Wojciech P Galej / Xiao-Chen Bai / Chris Oubridge / Andrew J Newman / Sjors H W Scheres / Kiyoshi Nagai / 要旨: U4/U6.U5 tri-snRNP represents a substantial part of the spliceosome before activation. A cryo-electron microscopy structure of Saccharomyces cerevisiae U4/U6.U5 tri-snRNP at 3.7 Å resolution led ...U4/U6.U5 tri-snRNP represents a substantial part of the spliceosome before activation. A cryo-electron microscopy structure of Saccharomyces cerevisiae U4/U6.U5 tri-snRNP at 3.7 Å resolution led to an essentially complete atomic model comprising 30 proteins plus U4/U6 and U5 small nuclear RNAs (snRNAs). The structure reveals striking interweaving interactions of the protein and RNA components, including extended polypeptides penetrating into subunit interfaces. The invariant ACAGAGA sequence of U6 snRNA, which base-pairs with the 5'-splice site during catalytic activation, forms a hairpin stabilized by Dib1 and Prp8 while the adjacent nucleotides interact with the exon binding loop 1 of U5 snRNA. Snu114 harbours GTP, but its putative catalytic histidine is held away from the γ-phosphate by hydrogen bonding to a tyrosine in the amino-terminal domain of Prp8. Mutation of this histidine to alanine has no detectable effect on yeast growth. The structure provides important new insights into the spliceosome activation process leading to the formation of the catalytic centre. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 5gap.cif.gz | 878.7 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb5gap.ent.gz | 657.9 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 5gap.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 5gap_validation.pdf.gz | 509.7 KB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 5gap_full_validation.pdf.gz | 558.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | 5gap_validation.xml.gz | 67.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 5gap_validation.cif.gz | 109.4 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ga/5gap ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ga/5gap | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 8014MC 8006C 8007C 8008C 8009C 8010C 8011C 8012C 8013C 5gamC 5ganC 5gaoC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-RNA鎖 , 3種, 3分子 VWU
#1: RNA鎖 | 分子量: 21528.688 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: U4 snRNA 5' region, nucleotides 1-67. / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: GenBank: 807071957 |
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#2: RNA鎖 | 分子量: 35883.176 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: GenBank: 807071964 |
#3: RNA鎖 | 分子量: 68643.344 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: GenBank: 807071959 |
-タンパク質 , 5種, 5分子 xDFKB
#4: タンパク質 | 分子量: 6996.616 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 詳細: Clear helical regions were built as poly(Ala) but could not be assigned to a specific protein. 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) |
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#8: タンパク質 | 分子量: 16798.387 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: Q06819 |
#9: タンパク質 | 分子量: 56382.516 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P49704 |
#11: タンパク質 | 分子量: 13582.855 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P39990 |
#12: タンパク質 | 分子量: 246470.266 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P32639, RNA helicase |
-Pre-mRNA-splicing factor ... , 2種, 2分子 AJ
#5: タンパク質 | 分子量: 279867.469 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P33334 |
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#7: タンパク質 | 分子量: 104370.133 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P19735 |
-U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein ... , 2種, 2分子 HG
#6: タンパク質 | 分子量: 52506.984 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: P20053 |
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#10: タンパク質 | 分子量: 55974.320 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 参照: UniProt: Q03338 |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Body region of the U4/U6.U5 tri-snRNP complex / タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: NATURAL |
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分子量 | 値: 0.5 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) |
緩衝液 | pH: 7.9 |
緩衝液成分 | 濃度: 1 mM / 名称: DTT |
試料 | 濃度: 0.2 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: 3.5 microlitre of sample was applied to grid. |
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3 |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK III / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K 詳細: Grids were blotted at 4 deg C for 2 seconds before plunging. |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 81000 X / 倍率(補正後): 35714 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 500 nm / Cs: 2 mm |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 16 sec. / 電子線照射量: 38 e/Å2 / 検出モード: SUPER-RESOLUTION フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 実像数: 2477 |
電子光学装置 | エネルギーフィルター名称: GIF Quantum |
画像スキャン | 動画フレーム数/画像: 20 / 利用したフレーム数/画像: 1-20 |
-解析
ソフトウェア | 名称: REFMAC / バージョン: 5.8.0124 / 分類: 精密化 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING ONLY | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 473827 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 140155 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: AB INITIO MODEL / 空間: RECIPROCAL | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
精密化 | 解像度: 3.6→180.18 Å / Cor.coef. Fo:Fc: 0.975 / SU B: 24.876 / SU ML: 0.368 / ESU R: 0.688 立体化学のターゲット値: MAXIMUM LIKELIHOOD WITH PHASES 詳細: HYDROGENS HAVE BEEN ADDED IN THE RIDING POSITIONS
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溶媒の処理 | 溶媒モデル: PARAMETERS FOR MASK CACLULATION | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子変位パラメータ | Biso mean: 316.59 Å2
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精密化ステップ | サイクル: 1 / 合計: 31573 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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