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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 3j2f | ||||||
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タイトル | Dissecting the in vivo assembly of the 30S ribosomal subunit reveals the role of RimM | ||||||
要素 | 16S rRNA | ||||||
キーワード | RIBOSOME / Ribosome biogenesis / 30S subunit assembly / RimM | ||||||
機能・相同性 | : / RNA / RNA (> 10) / RNA (> 100) / RNA (> 1000) 機能・相同性情報 | ||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 17.6 Å | ||||||
データ登録者 | Guo, Q. / Goto, S. / Chen, Y. / Muto, A. / Himeno, H. / Deng, H. / Lei, J. / Gao, N. | ||||||
引用 | ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2013 タイトル: Dissecting the in vivo assembly of the 30S ribosomal subunit reveals the role of RimM and general features of the assembly process. 著者: Qiang Guo / Simon Goto / Yuling Chen / Boya Feng / Yanji Xu / Akira Muto / Hyouta Himeno / Haiteng Deng / Jianlin Lei / Ning Gao / 要旨: Ribosome biogenesis is a tightly regulated, multi-stepped process. The assembly of ribosomal subunits is a central step of the complex biogenesis process, involving nearly 30 protein factors in vivo ...Ribosome biogenesis is a tightly regulated, multi-stepped process. The assembly of ribosomal subunits is a central step of the complex biogenesis process, involving nearly 30 protein factors in vivo in bacteria. Although the assembly process has been extensively studied in vitro for over 40 years, very limited information is known for the in vivo process and specific roles of assembly factors. Such an example is ribosome maturation factor M (RimM), a factor involved in the late-stage assembly of the 30S subunit. Here, we combined quantitative mass spectrometry and cryo-electron microscopy to characterize the in vivo 30S assembly intermediates isolated from mutant Escherichia coli strains with genes for assembly factors deleted. Our compositional and structural data show that the assembly of the 3'-domain of the 30S subunit is severely delayed in these intermediates, featured with highly underrepresented 3'-domain proteins and large conformational difference compared with the mature 30S subunit. Further analysis indicates that RimM functions not only to promote the assembly of a few 3'-domain proteins but also to stabilize the rRNA tertiary structure. More importantly, this study reveals intriguing similarities and dissimilarities between the in vitro and the in vivo assembly pathways, suggesting that they are in general similar but with subtle differences. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 3j2f.cif.gz | 1.2 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb3j2f.ent.gz | 807.1 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 3j2f.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 3j2f_validation.pdf.gz | 787.5 KB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 3j2f_full_validation.pdf.gz | 2.2 MB | 表示 | |
XML形式データ | 3j2f_validation.xml.gz | 189.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 3j2f_validation.cif.gz | 252.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j2/3j2f ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j2/3j2f | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 5508MC 5500C 5501C 5502C 5503C 5504C 5506C 5507C 5509C 5510C 3j28C 3j29C 3j2aC 3j2bC 3j2cC 3j2dC 3j2eC 3j2gC 3j2hC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
#1: RNA鎖 | 分子量: 496892.375 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) / 参照: GenBank: 170787319 |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: immature ribosomal small subunit from rimm gene deleted E.coli strain treated with RimM in vitro タイプ: RIBOSOME |
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分子量 | 値: 0.8 MDa / 実験値: NO |
緩衝液 | pH: 7.5 / 詳細: 150mM NH4Cl, 10mM Tris-HCL, 10mM MgCl2 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: 150mM NH4Cl, 10mM Tris-HCL, 10mM MgCl2 |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 手法: Blot for 1 seconds before plunging |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS / 日付: 2012年1月1日 |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 59000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3800 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1500 nm / カメラ長: 0 mm |
試料ホルダ | 試料ホルダーモデル: GATAN LIQUID NITROGEN / 傾斜角・最大: 0 ° / 傾斜角・最小: 0 ° |
撮影 | 電子線照射量: 20 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: FEI EAGLE (4k x 4k) |
放射 | プロトコル: SINGLE WAVELENGTH / 単色(M)・ラウエ(L): M / 散乱光タイプ: x-ray |
放射波長 | 相対比: 1 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | 詳細: Weiner filter | ||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||
3次元再構成 | 手法: Reference Projections / 解像度: 17.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / 粒子像の数: 9609 詳細: Details about the particle: This is a classification volume (No. 3) using ML3D methods. 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL / Target criteria: Cross-correlation 詳細: REFINEMENT PROTOCOL--Initial local fitting was done using Chimera and then MDFF was used for flexible fitting DETAILS--ref- Trabuco, L.G., Villa, E., Mitra, K., Frank, J. and Schulten, K. ...詳細: REFINEMENT PROTOCOL--Initial local fitting was done using Chimera and then MDFF was used for flexible fitting DETAILS--ref- Trabuco, L.G., Villa, E., Mitra, K., Frank, J. and Schulten, K. (2008) Flexible fitting of atomic structures into electron microscopy maps using molecular dynamics. Structure, 16, 673-683 | ||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 3OFA 3ofa PDB chain-ID: A / Accession code: 3OFA / Source name: PDB / タイプ: experimental model | ||||||||||||
精密化ステップ | サイクル: LAST
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