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基本情報
登録情報 | ![]() | |||||||||
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タイトル | 5'-lobe of the substrate-bound U11 snRNP | |||||||||
![]() | main map | |||||||||
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![]() | minor spliceosome / U11 snRNP / RNA-protein complex / SPLICING | |||||||||
機能・相同性 | ![]() snRNA binding / U12-type spliceosomal complex / mRNA Splicing - Minor Pathway / intercellular bridge / RNA splicing / mRNA splicing, via spliceosome / mRNA binding / nucleolus / nucleoplasm / nucleus / cytosol 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.4 Å | |||||||||
![]() | Zhao J / Galej WP | |||||||||
資金援助 | European Union, 1件
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![]() | ![]() タイトル: Structural basis of 5' splice site recognition by the minor spliceosome. 著者: Jiangfeng Zhao / Daniel Peter / Irina Brandina / Xiangyang Liu / Wojciech P Galej / ![]() 要旨: The minor spliceosome catalyzes excision of U12-dependent introns from precursors of eukaryotic messenger RNAs (pre-mRNAs). This process is critical for many cellular functions, but the underlying ...The minor spliceosome catalyzes excision of U12-dependent introns from precursors of eukaryotic messenger RNAs (pre-mRNAs). This process is critical for many cellular functions, but the underlying molecular mechanisms remain elusive. Here, we report a cryoelectron microscopy (cryo-EM) reconstruction of the 13-subunit human U11 small nuclear ribonucleoprotein particle (snRNP) complex in apo and substrate-bound forms, revealing the architecture of the U11 small nuclear RNA (snRNA), five minor spliceosome-specific factors, and the mechanism of the U12-type 5' splice site (5'SS) recognition. SNRNP25 and SNRNP35 specifically recognize U11 snRNA, while PDCD7 bridges SNRNP25 and SNRNP48, located at the distal ends of the particle. SNRNP48 and ZMAT5 are positioned near the 5' end of U11 snRNA and stabilize binding of the incoming 5'SS. Recognition of the U12-type 5'SS is achieved through base-pairing to the 5' end of the U11 snRNA and unexpected, non-canonical base-triple interactions with the U11 snRNA stem-loop 3. Our structures provide mechanistic insights into U12-dependent intron recognition and the evolution of the splicing machinery. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 162.1 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 23.7 KB 23.7 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 51.9 KB | ||
Filedesc metadata | ![]() | 6.9 KB | ||
その他 | ![]() ![]() ![]() | 306.7 MB 301.5 MB 301.5 MB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
ファイル | ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | main map | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.73 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-追加マップ: sharp map
ファイル | emd_51225_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | sharp map | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half A
ファイル | emd_51225_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | half A | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half B
ファイル | emd_51225_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | half B | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
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試料の構成要素
-全体 : 5'-lobe of the substrate-bound U11 snRNP
全体 | 名称: 5'-lobe of the substrate-bound U11 snRNP |
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要素 |
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-超分子 #1: 5'-lobe of the substrate-bound U11 snRNP
超分子 | 名称: 5'-lobe of the substrate-bound U11 snRNP / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 100 KDa |
-分子 #1: U11/U12 small nuclear ribonucleoprotein 25 kDa protein
分子 | 名称: U11/U12 small nuclear ribonucleoprotein 25 kDa protein タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 15.290729 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() |
配列 | 文字列: MDVFQEGLAM VVQDPLLCDL PIQVTLEEVN SQIALEYGQA MTVRVCKMDG EVMPVVVVQS ATVLDLKKAI QRYVQLKQER EGGIQHISW SYVWRTYHLT SAGEKLTEDR KKLRDYGIRN RDEVSFIKKL RQK UniProtKB: U11/U12 small nuclear ribonucleoprotein 25 kDa protein |
-分子 #2: U11/U12 small nuclear ribonucleoprotein 35 kDa protein
分子 | 名称: U11/U12 small nuclear ribonucleoprotein 35 kDa protein タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 29.514471 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() |
配列 | 文字列: MNDWMPIAKE YDPLKAGSID GTDEDPHDRA VWRAMLARYV PNKGVIGDPL LTLFVARLNL QTKEDKLKEV FSRYGDIRRL RLVRDLVTG FSKGYAFIEY KEERAVIKAY RDADGLVIDQ HEIFVDYELE RTLKGWIPRR LGGGLGGKKE SGQLRFGGRD R PFRKPINL ...文字列: MNDWMPIAKE YDPLKAGSID GTDEDPHDRA VWRAMLARYV PNKGVIGDPL LTLFVARLNL QTKEDKLKEV FSRYGDIRRL RLVRDLVTG FSKGYAFIEY KEERAVIKAY RDADGLVIDQ HEIFVDYELE RTLKGWIPRR LGGGLGGKKE SGQLRFGGRD R PFRKPINL PVVKNDLYRE GKRERRERSR SRERHWDSRT RDRDHDRGRE KRWQEREPTR VWPDNDWERE RDFRDDRIKG RE KKERGK UniProtKB: U11/U12 small nuclear ribonucleoprotein 35 kDa protein |
-分子 #3: P120-5'SS
分子 | 名称: P120-5'SS / タイプ: rna / ID: 3 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 3.366978 KDa |
配列 | 文字列: AUAUCCUUUU U |
-分子 #4: U11 snRNA
分子 | 名称: U11 snRNA / タイプ: rna / ID: 4 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 43.505629 KDa |
配列 | 文字列: AAAAAGGGCU UCUGUCGUGA GUGGCACACG UAGGGCAACU CGAUUGCUCU GCGUGCGGAA UCGACAUCAA GAGAUUUCGG AAGCAUAAU UUUUUGGUAU UUGGGCAGCU GGUGAUCGUU GGUCCCGGCG CCCUUU GENBANK: GENBANK: NR_004407.1 |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
濃度 | 0.2 mg/mL | |||||||||
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緩衝液 | pH: 7.9 構成要素:
詳細: 20 mM HEPES-KOH, pH 7.9 200 mM KCl 2 mM MgCl2 | |||||||||
グリッド | モデル: UltrAuFoil R2/2 / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING / 前処理 - 時間: 90 sec. / 前処理 - 雰囲気: OTHER | |||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV | |||||||||
詳細 | This sample was monodisperse |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: TFS Selectris X / エネルギーフィルター - スリット幅: 10 eV |
詳細 | Preliminary grid screening was performed on Glacios. |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 20000 / 平均電子線量: 41.73 e/Å2 / 詳細: Images were colleted in EER format |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 1.5 µm 最小 デフォーカス(公称値): 0.7000000000000001 µm 倍率(公称値): 165000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
-原子モデル構築 1
初期モデル |
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詳細 | refinement is done in Phenix | ||||||
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT / 温度因子: 73.3 当てはまり具合の基準: Cross-correction coefficient | ||||||
得られたモデル | ![]() PDB-9gbz: |