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万見
- EMDB-50682: E. coli 70S ribosome in situ structure for xenon damage layer det... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-50682
タイトルE. coli 70S ribosome in situ structure for xenon damage layer determination: 30 - 35 nm
マップデータ
試料
  • 細胞: E. coli 70S ribosome
キーワード70S E. coli ribosome / RIBOSOME
生物種Escherichia coli (大腸菌)
手法サブトモグラム平均法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 7.0 Å
データ登録者Watson H / Berger C / Grange M
資金援助 英国, 3件
OrganizationGrant number国
UK Research and Innovation (UKRI) 英国
Wellcome Trust220526/Z/20/Z 英国
Wellcome Trust225902/Z/22/Z 英国
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2025
タイトル: Xenon plasma focused ion beam lamella fabrication on high-pressure frozen specimens for structural cell biology.
著者: Casper Berger / Helena Watson / James H Naismith / Maud Dumoux / Michael Grange /
要旨: Cryo focused ion beam lamella preparation is a potent tool for in situ structural biology, enabling the study of macromolecules in their native cellular environments. However, throughput is currently ...Cryo focused ion beam lamella preparation is a potent tool for in situ structural biology, enabling the study of macromolecules in their native cellular environments. However, throughput is currently limited, especially for thicker, more biologically complex samples. We describe how xenon plasma focused ion beam milling can be used for routine bulk milling of thicker, high-pressure frozen samples. We demonstrate lamellae preparation with a high success rate on these samples and determine a 4.0 Å structure of the Escherichia coli ribosome on these lamellae using sub volume averaging. We determine the effects on sample integrity of increased ion currents up to 60 nA during bulk milling of thicker planar samples, showing no measurable damage to macromolecules beyond an amorphous layer on the backside of the lamellae. The use of xenon results in substantial structural damage to particles up to approximately 30 nm in depth from the milled surfaces, and the effects of damage become negligibly small by 45 nm. Our results outline how the use of high currents using xenon plasma focused ion beam milling may be integrated into FIB milling regimes for preparing thin lamellae for high-resolution in situ structural biology.
履歴
登録2024年6月18日-
ヘッダ(付随情報) 公開2025年3月19日-
マップ公開2025年3月19日-
更新2025年3月19日-
現状2025年3月19日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_50682.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_50682.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 42.9 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.9 Å/pix.
x 224 pix.
= 425.6 Å		1.9 Å/pix.
x 224 pix.
= 425.6 Å		1.9 Å/pix.
x 224 pix.
= 425.6 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.9 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.539
最小 - 最大-1.013288 - 2.1545053
平均 (標準偏差)0.011705637 (±0.18690625)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ224224224
Spacing224224224
セルA=B=C: 425.6 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_50682_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

-
ハーフマップ: #1

ファイルemd_50682_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_50682_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : E. coli 70S ribosome

全体名称: E. coli 70S ribosome
要素
  • 細胞: E. coli 70S ribosome

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超分子 #1: E. coli 70S ribosome

超分子名称: E. coli 70S ribosome / タイプ: cell / ID: 1 / 親要素: 0
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: C43 (DE3)

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析サブトモグラム平均法
試料の集合状態cell

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試料調製

緩衝液pH: 7
凍結凍結剤: NITROGEN / 詳細: Leica EM ICE HPF.
詳細High-pressure frozen E. coli milled with xenon plasma ion source

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: TFS Selectris X / エネルギーフィルター - スリット幅: 10 eV
撮影フィルム・検出器のモデル: TFS FALCON 4i (4k x 4k)
デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / 実像数: 1 / 平均電子線量: 5.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 5.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 3.0 µm / 倍率（公称値）: 64000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

最終 再構成想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 7.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 4.0) / 使用したサブトモグラム数: 5119
抽出トモグラム数: 167 / 使用した粒子像数: 224823 / 手法: crYOLO
ソフトウェア: (名称: Warp (ver. 1.0.9), crYOLO (ver. 1.8))
最終 角度割当タイプ: OTHER / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 4.0)
FSC曲線 (解像度の算出)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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