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- EMDB-44472: Alkalihalobacillus halodurans (Aha) trp RNA binding attenuation p... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-44472
タイトルAlkalihalobacillus halodurans (Aha) trp RNA binding attenuation protein (TRAP) mutant dTRAP without Trp
マップデータ
試料
  • 複合体: Hexamer dTRAP protein complex without Trp
    • タンパク質・ペプチド: Transcription attenuation protein MtrB
キーワードHexamer of dTRAP apo / RNA BINDING PROTEIN
機能・相同性Transcription attenuation protein MtrB / Tryptophan RNA-binding attenuator protein domain / Tryptophan RNA-binding attenuator protein / Tryptophan RNA-binding attenuator protein-like domain superfamily / DNA-templated transcription termination / regulation of DNA-templated transcription / RNA binding / Transcription attenuation protein MtrB
機能・相同性情報
生物種Halalkalibacterium halodurans (バクテリア)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.24 Å
データ登録者Yang H / Stachowski K / Foster M
資金援助 米国, 4件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM077234 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM062750 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM120923 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM128577 米国
引用ジャーナル: Proc Natl Acad Sci U S A / 年: 2025
タイトル: Structural basis of nearest-neighbor cooperativity in the ring-shaped gene regulatory protein TRAP from protein engineering and cryo-EM.
著者: Weicheng Li / Haoyun Yang / Kye Stachowski / Andrew S Norris / Katie Lichtenthal / Skyler Kelly / Paul Gollnick / Vicki H Wysocki / Mark P Foster /
要旨: The homo-dodecameric ring-shaped RNA binding attenuation protein (TRAP) from binds up to twelve tryptophan ligands (Trp) and becomes activated to bind a specific sequence in the 5' leader region of ...The homo-dodecameric ring-shaped RNA binding attenuation protein (TRAP) from binds up to twelve tryptophan ligands (Trp) and becomes activated to bind a specific sequence in the 5' leader region of the operon mRNA, thereby downregulating biosynthesis of Trp. Thermodynamic measurements of Trp binding have revealed a range of cooperative behavior for different TRAP variants, even if the averaged apparent affinities for Trp have been found to be similar. Proximity between the ligand binding sites, and the ligand-coupled disorder-to-order transition has implicated nearest-neighbor interactions in cooperativity. To establish a solid basis for describing nearest-neighbor cooperativity in TRAP, we engineered variants constructed with two subunits connected by a flexible linker (dTRAP). We mutated the binding sites of alternating protomers such that only every other site was competent for Trp binding (WT-Mut dTRAP). Ligand binding monitored by NMR, calorimetry, and native mass spectrometry revealed strong cooperativity in dTRAP containing adjacent binding-competent sites, but a severe binding defect when the wild-type sites were separated by mutated sites. Cryo-EM experiments of dTRAP in its ligand-free apo state, and both dTRAP and WT-Mut dTRAP in the presence of Trp, revealed progressive stabilization of loops that gate the Trp binding site and participate in RNA binding. These studies provide important insights into the thermodynamic and structural basis for the observed ligand binding cooperativity in TRAP. Such insights can be useful for understanding allosteric control networks and for the development of those with defined ligand sensitivity and regulatory control.
履歴
登録2024年4月15日-
ヘッダ(付随情報) 公開2025年1月22日-
マップ公開2025年1月22日-
更新2025年1月22日-
現状2025年1月22日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_44472.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_44472.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
0.86 Å/pix.
x 256 pix.
= 219.648 Å		0.86 Å/pix.
x 256 pix.
= 219.648 Å		0.86 Å/pix.
x 256 pix.
= 219.648 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.858 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.135
最小 - 最大-0.3665253 - 0.5110273
平均 (標準偏差)0.0007831318 (±0.016348941)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ256256256
Spacing256256256
セルA=B=C: 219.648 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_44472_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_44472_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : Hexamer dTRAP protein complex without Trp

全体名称: Hexamer dTRAP protein complex without Trp
要素
  • 複合体: Hexamer dTRAP protein complex without Trp
    • タンパク質・ペプチド: Transcription attenuation protein MtrB

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超分子 #1: Hexamer dTRAP protein complex without Trp

超分子名称: Hexamer dTRAP protein complex without Trp / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all
由来(天然)生物種: Halalkalibacterium halodurans (バクテリア)

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分子 #1: Transcription attenuation protein MtrB

分子名称: Transcription attenuation protein MtrB / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 6 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Halalkalibacterium halodurans (バクテリア)
分子量理論値: 18.418471 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
配列文字列:
MNVGDNSNFF VIKAKENGVN VFGMTRGTDT RFHHSEKLDK GEVMIAQFTE HTSAVKIRGK AIIQTSYGTL DTEKDEGGGG SGGGGSMNV GDNSNFFVIK AKENGVNVFG MTRGTDTRFH HSEKLDKGEV MIAQFTEHTS AVKIRGKAII QTSYGTLDTE K DEENLYFQ

UniProtKB: Transcription attenuation protein MtrB

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度6 mg/mL
緩衝液pH: 8
構成要素:
濃度式名称
20.0 mMC8H18N2O4SHEPES
200.0 mMNaClSodium Chloride

詳細: 20 mM HEPES, 200 mM NaCl, pH 8
グリッドモデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 300 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec.
詳細: 20 mA, 30 sec hold, 1 min glow discharge using a PELCO easiGlow Discharge System
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV
詳細: lotted with a blot force of 1 for 4 seconds at 277.15K and 100% relative humidity before being plunged frozen into liquid ethane.
詳細An aliquot of 10 mg/mL of apo dTRAP was diluted with cryo-EM buffer (20 mM HEPES, 200 mM NaCl, pH 8) supplemented with a 0.6% stock of Triton X-100 to obtain a final sample of 6 mg/mL protein and 0.05% Triton X-100.

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電子顕微鏡法

顕微鏡TFS KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOCONTINUUM (6k x 4k)
平均電子線量: 60.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.5 µm
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.24 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 91038
初期 角度割当タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION
最終 角度割当タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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