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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-4410 | |||||||||
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タイトル | Yeast RPA bound to ssDNA | |||||||||
マップデータ | 4.7 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA Trimerisation Core (Tri-C) bound by ssDNA. | |||||||||
試料 |
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キーワード | Complex / heterotrimer / DNA binding / OB-fold / DNA BINDING PROTEIN | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 heteroduplex formation / sporulation / DNA replication factor A complex / Gap-filling DNA repair synthesis and ligation in GG-NER / telomere maintenance via telomere lengthening / Removal of the Flap Intermediate / mitotic recombination / Activation of the pre-replicative complex / Translesion Synthesis by POLH / telomere maintenance via recombination ...heteroduplex formation / sporulation / DNA replication factor A complex / Gap-filling DNA repair synthesis and ligation in GG-NER / telomere maintenance via telomere lengthening / Removal of the Flap Intermediate / mitotic recombination / Activation of the pre-replicative complex / Translesion Synthesis by POLH / telomere maintenance via recombination / Translesion synthesis by REV1 / Translesion synthesis by POLK / Translesion synthesis by POLI / Activation of ATR in response to replication stress / Termination of translesion DNA synthesis / reciprocal meiotic recombination / telomeric DNA binding / DNA unwinding involved in DNA replication / Gap-filling DNA repair synthesis and ligation in TC-NER / DNA topological change / telomere maintenance via telomerase / Dual incision in TC-NER / telomere maintenance / condensed nuclear chromosome / nucleotide-excision repair / double-strand break repair via homologous recombination / establishment of protein localization / site of double-strand break / single-stranded DNA binding / double-stranded DNA binding / sequence-specific DNA binding / DNA replication / chromosome, telomeric region / protein ubiquitination / DNA repair / mRNA binding / nucleus / metal ion binding / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母) / synthetic construct (人工物) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.7 Å | |||||||||
データ登録者 | Yates LA / Aramayo RJ | |||||||||
資金援助 | 英国, 1件
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引用 | ジャーナル: Nat Commun / 年: 2018 タイトル: A structural and dynamic model for the assembly of Replication Protein A on single-stranded DNA. 著者: Luke A Yates / Ricardo J Aramayo / Nilisha Pokhrel / Colleen C Caldwell / Joshua A Kaplan / Rajika L Perera / Maria Spies / Edwin Antony / Xiaodong Zhang / 要旨: Replication Protein A (RPA), the major eukaryotic single stranded DNA-binding protein, binds to exposed ssDNA to protect it from nucleases, participates in a myriad of nucleic acid transactions and ...Replication Protein A (RPA), the major eukaryotic single stranded DNA-binding protein, binds to exposed ssDNA to protect it from nucleases, participates in a myriad of nucleic acid transactions and coordinates the recruitment of other important players. RPA is a heterotrimer and coats long stretches of single-stranded DNA (ssDNA). The precise molecular architecture of the RPA subunits and its DNA binding domains (DBDs) during assembly is poorly understood. Using cryo electron microscopy we obtained a 3D reconstruction of the RPA trimerisation core bound with ssDNA (∼55 kDa) at ∼4.7 Å resolution and a dimeric RPA assembly on ssDNA. FRET-based solution studies reveal dynamic rearrangements of DBDs during coordinated RPA binding and this activity is regulated by phosphorylation at S178 in RPA70. We present a structural model on how dynamic DBDs promote the cooperative assembly of multiple RPAs on long ssDNA. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_4410.map.gz | 6.2 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-4410-v30.xml emd-4410.xml | 25.7 KB 25.7 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_4410_fsc_1.xml emd_4410_fsc_2.xml emd_4410_fsc_3.xml emd_4410_fsc_4.xml emd_4410_fsc_5.xml | 10 KB 3 KB 3 KB 3 KB 4.4 KB | 表示 表示 表示 表示 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_4410.png | 95.6 KB | ||
Filedesc metadata | emd-4410.cif.gz | 6.8 KB | ||
その他 | emd_4410_additional_1.map.gz emd_4410_additional_2.map.gz emd_4410_additional_3.map.gz emd_4410_additional_4.map.gz | 49.4 MB 1.8 MB 1.8 MB 1.8 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-4410 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-4410 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_4410_validation.pdf.gz | 489.5 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_4410_full_validation.pdf.gz | 489.1 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_4410_validation.xml.gz | 5.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_4410_validation.cif.gz | 5.7 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-4410 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-4410 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_4410.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 6.6 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | 4.7 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA Trimerisation Core (Tri-C) bound by ssDNA. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.06 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-追加マップ: 7.5 Angstrom map (unsharpened) corresponding to yeast RPA dimer
ファイル | emd_4410_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | 7.5 Angstrom map (unsharpened) corresponding to yeast RPA dimer | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: 7.7 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA...
ファイル | emd_4410_additional_2.map | ||||||||||||
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注釈 | 7.7 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA Trimerisation Core (Tri-C) bound by ssDNA with additional DNA-binding domain (DBD-B) | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: 8.5 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA...
ファイル | emd_4410_additional_3.map | ||||||||||||
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注釈 | 8.5 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA Trimerisation Core (Tri-C) bound by ssDNA with additional DNA-binding domain (DBD-B) | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: 10 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA...
ファイル | emd_4410_additional_4.map | ||||||||||||
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注釈 | 10 Angstrom map (sharpened) corresponding to Yeast RPA Trimerisation Core (Tri-C) bound by ssDNA with additional DNA-binding domain (DBD-B) | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA
全体 | 名称: Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA |
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要素 |
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-超分子 #1: Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA
超分子 | 名称: Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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分子量 | 理論値: 120 KDa |
-超分子 #2: Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA
超分子 | 名称: Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1-#3 |
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由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母) 細胞中の位置: nucleus |
-超分子 #3: Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA
超分子 | 名称: Replication Protein A heterotrimeric complex with ssDNA タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #4 |
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由来(天然) | 生物種: synthetic construct (人工物) |
-分子 #1: Replication factor A protein 3
分子 | 名称: Replication factor A protein 3 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母) |
分子量 | 理論値: 13.827723 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) |
配列 | 文字列: MASETPRVDP TEISNVNAPV FRIIAQIKSQ PTESQLILQS PTISSKNGSE VEMITLNNIR VSMNKTFEID SWYEFVCRNN DDGELGFLI LDAVLCKFKE NEDLSLNGVV ALQRLCKKYP EIY UniProtKB: Replication factor A protein 3 |
-分子 #2: Replication factor A protein 2
分子 | 名称: Replication factor A protein 2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母) |
分子量 | 理論値: 14.80987 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) |
配列 | 文字列: TNTRVNTLTP VTIKQILESK QDIQDGPFVS HNQELHHVCF VGVVRNITDH TANIFLTIED GTGQIEVRKW SEDAAQQFEI GGYVKVFGA LKEFGGKKNI QYAVIKPIDS FNEVLTHHLE VIKCHSIASG MMK UniProtKB: Replication factor A protein 2 |
-分子 #3: Replication factor A protein 1
分子 | 名称: Replication factor A protein 1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母) |
分子量 | 理論値: 20.643072 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) |
配列 | 文字列: KFIAQRITIA RAQAENLGRS EKGDFFSVKA AISFLKVDNF AYPACSNENC NKKVLEQPDG TWRCEKCDTN NARPNWRYIL TISIIDETN QLWLTLFDDQ AKQLLGVDAN TLMSLKEEDP NEFTKITQSI QMNEYDFRIR AREDTYNDQS RIRYTVANLH S LNYRAEAD YLADELSKAL UniProtKB: Replication factor A protein 1 |
-分子 #4: DNA (5'-D(P*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP...
分子 | 名称: DNA (5'-D(P*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*TP*T)-3') タイプ: dna / ID: 4 / コピー数: 1 / 分類: DNA |
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由来(天然) | 生物種: synthetic construct (人工物) |
分子量 | 理論値: 6.038899 KDa |
配列 | 文字列: (DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT) (DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT)(DT) |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.5 mg/mL | ||||||||||||
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緩衝液 | pH: 7.4 構成要素:
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グリッド | モデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR | ||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV 詳細: glow-discharged grid, wait time 30 seconds, blotting time 1 second. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / 平均電子線量: 2.1 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: FLEXIBLE FIT |
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得られたモデル | PDB-6i52: |