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基本情報
| 登録情報 | ![]() | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| タイトル | Exploiting Activation and Inactivation Mechanisms in Type I-C CRISPR-Cas3 for Genome Editing Applications | |||||||||
マップデータ | ||||||||||
試料 |
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キーワード | CRISPR / type I-C / Cascade / Anti-CRISPR / DNA BINDING PROTEIN | |||||||||
| 機能・相同性 | 機能・相同性情報maintenance of CRISPR repeat elements / endonuclease activity / defense response to virus / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / hydrolase activity / RNA binding 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
| 生物種 | Neisseria lactamica (バクテリア) | |||||||||
| 手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.0 Å | |||||||||
データ登録者 | Hu C / Nam KH / Ke A | |||||||||
| 資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: Mol Cell / 年: 2024タイトル: Exploiting activation and inactivation mechanisms in type I-C CRISPR-Cas3 for genome-editing applications. 著者: Chunyi Hu / Mason T Myers / Xufei Zhou / Zhonggang Hou / Macy L Lozen / Ki Hyun Nam / Yan Zhang / Ailong Ke / ![]() 要旨: Type I CRISPR-Cas systems utilize the RNA-guided Cascade complex to identify matching DNA targets and the nuclease-helicase Cas3 to degrade them. Among the seven subtypes, type I-C is compact in size ...Type I CRISPR-Cas systems utilize the RNA-guided Cascade complex to identify matching DNA targets and the nuclease-helicase Cas3 to degrade them. Among the seven subtypes, type I-C is compact in size and highly active in creating large-sized genome deletions in human cells. Here, we use four cryoelectron microscopy snapshots to define its RNA-guided DNA binding and cleavage mechanisms in high resolution. The non-target DNA strand (NTS) is accommodated by I-C Cascade in a continuous binding groove along the juxtaposed Cas11 subunits. Binding of Cas3 further traps a flexible bulge in NTS, enabling NTS nicking. We identified two anti-CRISPR proteins AcrIC8 and AcrIC9 that strongly inhibit Neisseria lactamica I-C function. Structural analysis showed that AcrIC8 inhibits PAM recognition through allosteric inhibition, whereas AcrIC9 achieves so through direct competition. Both Acrs potently inhibit I-C-mediated genome editing and transcriptional modulation in human cells, providing the first off-switches for type I CRISPR eukaryotic genome engineering. | |||||||||
| 履歴 |
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構造の表示
| 添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
| マップデータ | emd_29879.map.gz | 52.2 MB | EMDBマップデータ形式 | |
|---|---|---|---|---|
| ヘッダ (付随情報) | emd-29879-v30.xml emd-29879.xml | 33.7 KB 33.7 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
| 画像 | emd_29879.png | 135.4 KB | ||
| Filedesc metadata | emd-29879.cif.gz | 8.3 KB | ||
| その他 | emd_29879_additional_1.map.gz emd_29879_additional_2.map.gz emd_29879_half_map_1.map.gz emd_29879_half_map_2.map.gz | 97.2 MB 97.2 MB 52.2 MB 52.2 MB | ||
| アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-29879 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-29879 | HTTPS FTP |
-検証レポート
| 文書・要旨 | emd_29879_validation.pdf.gz | 748.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
|---|---|---|---|---|
| 文書・詳細版 | emd_29879_full_validation.pdf.gz | 748.4 KB | 表示 | |
| XML形式データ | emd_29879_validation.xml.gz | 12 KB | 表示 | |
| CIF形式データ | emd_29879_validation.cif.gz | 15.6 KB | 表示 | |
| アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-29879 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-29879 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-
リンク
| EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
|---|---|
| 「今月の分子」の関連する項目 |
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マップ
| ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_29879.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 103 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.271 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 密度 |
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| 対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-追加マップ: #2
| ファイル | emd_29879_additional_1.map | ||||||||||||
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| 投影像・断面図 |
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| 密度ヒストグラム |
-追加マップ: #1
| ファイル | emd_29879_additional_2.map | ||||||||||||
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| 投影像・断面図 |
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| 密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #2
| ファイル | emd_29879_half_map_1.map | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 投影像・断面図 |
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| 密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
| ファイル | emd_29879_half_map_2.map | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 投影像・断面図 |
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| 密度ヒストグラム |
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試料の構成要素
+全体 : Ternary complex of Cas3 with dsDNA bound type I-C Cascade at R-lo...
+超分子 #1: Ternary complex of Cas3 with dsDNA bound type I-C Cascade at R-lo...
+分子 #1: Cas3
+分子 #2: CRISPR-associated protein, Csd2 family
+分子 #3: Phage associated protein
+分子 #4: CRISPR-associated protein, Csd1 family
+分子 #7: pre-crRNA processing endonuclease
+分子 #5: crRNA (43-MER)
+分子 #6: Traget strand DNA (53-MER)
+分子 #8: proximal nontarget strand DNA (5'-D(P*AP*TP*GP*AP*AP*CP*TP*TP*CP*...
+分子 #9: Distal nontarget DNA (5'-D(P*TP*TP*AP*TP*AP*TP*TP*AP*AP*TP*AP*TP*...
+分子 #10: MAGNESIUM ION
+分子 #11: PHOSPHATE ION
-実験情報
-構造解析
| 手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
|---|---|
解析 | 単粒子再構成法 |
| 試料の集合状態 | particle |
-
試料調製
| 濃度 | 1 mg/mL |
|---|---|
| 緩衝液 | pH: 7.5 / 構成要素 - 濃度: 150.0 mM / 構成要素 - 式: NaCl / 構成要素 - 名称: sodium chloride / 詳細: 25mM Tris pH 7.5, 150mM NaCl |
| グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 400 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY |
| 凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 278 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
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電子顕微鏡法
| 顕微鏡 | FEI TALOS ARCTICA |
|---|---|
| 温度 | 最低: 70.0 K / 最高: 100.0 K |
| 特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum |
| 撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 1798 / 実像数: 1798 / 平均露光時間: 2.5 sec. / 平均電子線量: 50.0 e/Å2 |
| 電子線 | 加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
| 電子光学系 | C2レンズ絞り径: 100.0 µm / 最大 デフォーカス(補正後): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(補正後): 1.5 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: DIFFRACTION / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 2.5 µm / 倍率(公称値): 67000 |
| 試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
| 実験機器 | ![]() モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
-原子モデル構築 1
| 精密化 | プロトコル: RIGID BODY FIT |
|---|---|
| 得られたモデル | ![]() PDB-8g9u: |
ムービー
コントローラー
万見について




キーワード
Neisseria lactamica (バクテリア)
データ登録者
米国, 1件
引用













Z (Sec.)
Y (Row.)
X (Col.)





















































FIELD EMISSION GUN
