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- EMDB-25757: Structure of VcINDY-Na+ -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-25757
タイトルStructure of VcINDY-Na+
マップデータPhenix Autosharpened map
試料
  • 細胞器官・細胞要素: VcINDY in the Ci-Na+ state
    • タンパク質・ペプチド: DASS family sodium-coupled anion symporter
  • リガンド: SODIUM ION
  • リガンド: water
キーワードTRANSPORTER / MEMBRANE PROTEIN
機能・相同性Citrate transporter-like domain / Citrate transporter / Sodium/sulphate symporter, conserved site / Sodium:sulfate symporter family signature. / Solute carrier family 13 / transmembrane transporter activity / membrane / Transporter, NadC family
機能・相同性情報
生物種Vibrio cholerae (コレラ菌)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.83 Å
データ登録者Sauer DB / Marden JJ
資金援助 米国, 5件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NIH/NINDS)R01NS108151 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R01GM121994 米国
National Institutes of Health/National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Disease (NIH/NIDDK)R01DK099023 米国
American Cancer Society129844-PF-17-135-01-TBE 米国
Department of Defense (DOD, United States)W81XWH-16-1-0153 米国
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2022
タイトル: Structural basis of ion - substrate coupling in the Na-dependent dicarboxylate transporter VcINDY.
著者: David B Sauer / Jennifer J Marden / Joseph C Sudar / Jinmei Song / Christopher Mulligan / Da-Neng Wang /
要旨: The Na-dependent dicarboxylate transporter from Vibrio cholerae (VcINDY) is a prototype for the divalent anion sodium symporter (DASS) family. While the utilization of an electrochemical Na gradient ...The Na-dependent dicarboxylate transporter from Vibrio cholerae (VcINDY) is a prototype for the divalent anion sodium symporter (DASS) family. While the utilization of an electrochemical Na gradient to power substrate transport is well established for VcINDY, the structural basis of this coupling between sodium and substrate binding is not currently understood. Here, using a combination of cryo-EM structure determination, succinate binding and site-directed cysteine alkylation assays, we demonstrate that the VcINDY protein couples sodium- and substrate-binding via a previously unseen cooperative mechanism by conformational selection. In the absence of sodium, substrate binding is abolished, with the succinate binding regions exhibiting increased flexibility, including HPb, TM10b and the substrate clamshell motifs. Upon sodium binding, these regions become structurally ordered and create a proper binding site for the substrate. Taken together, these results provide strong evidence that VcINDY's conformational selection mechanism is a result of the sodium-dependent formation of the substrate binding site.
履歴
登録2021年12月19日-
ヘッダ(付随情報) 公開2022年5月25日-
マップ公開2022年5月25日-
更新2024年2月28日-
現状2024年2月28日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_25757.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_25757.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Phenix Autosharpened map
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
0.83 Å/pix.
x 256 pix.
= 212.48 Å		0.83 Å/pix.
x 256 pix.
= 212.48 Å		0.83 Å/pix.
x 256 pix.
= 212.48 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.83 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 5.12
最小 - 最大-10.959965 - 23.743835000000001
平均 (標準偏差)0.000000000005404 (±1.0)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ256256256
Spacing256256256
セルA=B=C: 212.48 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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追加マップ: Unsharpened map

ファイルemd_25757_additional_1.map
注釈Unsharpened map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: Halfmap B

ファイルemd_25757_half_map_1.map
注釈Halfmap B
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: Halfmap A

ファイルemd_25757_half_map_2.map
注釈Halfmap A
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : VcINDY in the Ci-Na+ state

全体名称: VcINDY in the Ci-Na+ state
要素
  • 細胞器官・細胞要素: VcINDY in the Ci-Na+ state
    • タンパク質・ペプチド: DASS family sodium-coupled anion symporter
  • リガンド: SODIUM ION
  • リガンド: water

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超分子 #1: VcINDY in the Ci-Na+ state

超分子名称: VcINDY in the Ci-Na+ state / タイプ: organelle_or_cellular_component / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1
由来(天然)生物種: Vibrio cholerae (コレラ菌)

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分子 #1: DASS family sodium-coupled anion symporter

分子名称: DASS family sodium-coupled anion symporter / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Vibrio cholerae (コレラ菌)
分子量理論値: 48.157359 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: REWFLHRNSL IVLADVALFL ALYHFLPFEH NVVLGISMLA FIAVLWLTEA LHVTVTAILV PVMAVFFGIF ETQAALNNFA NSIIFLFLG GFALAAAMHH QGLDKVIADK VLAMAQGKMS VAVFMLFGVT ALLSMWISNT ATAAMMLPLV LGVLSKVDAD K QRSTYVFV ...文字列:
REWFLHRNSL IVLADVALFL ALYHFLPFEH NVVLGISMLA FIAVLWLTEA LHVTVTAILV PVMAVFFGIF ETQAALNNFA NSIIFLFLG GFALAAAMHH QGLDKVIADK VLAMAQGKMS VAVFMLFGVT ALLSMWISNT ATAAMMLPLV LGVLSKVDAD K QRSTYVFV LLGVAYSASI GGIATLVGSP PNAIAAAEVG LSFTDWMKFG LPTAMMMLPM AIAILYFLLK PTLNGMFELD RA PVNWDKG KVVTLGIFGL TVFLWIFSSP INAALGGFKS FDTLVALGAI LMLSFARVVH WKEIQKTADW GVLLLFGGGL CLS NVLKQT GTSVFLANAL SDMVSHMGIF VVILVVATFV VFLTEFASNT ASAALLIPVF ATVAEAFGMS PVLLSVLIAV AASC AFMLP VATPPNAIVF ASGHIKQSEM MRVGLYLNIA CIGLLTAIAM LFWQ

UniProtKB: Transporter, NadC family

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分子 #2: SODIUM ION

分子名称: SODIUM ION / タイプ: ligand / ID: 2 / コピー数: 4
分子量理論値: 22.99 Da

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分子 #3: water

分子名称: water / タイプ: ligand / ID: 3 / コピー数: 5 / 式: HOH
分子量理論値: 18.015 Da
Chemical component information

ChemComp-HOH:
WATER

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度1.3 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
グリッドモデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 4253 / 平均露光時間: 2.34 sec. / 平均電子線量: 65.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 0.5 µm / 倍率（公称値）: 105000
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 1520631
初期モデルモデルのタイプ: OTHER
最終 再構成想定した対称性 - 点群: C2 (2回回転対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 2.83 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC / 使用した粒子像数: 144865
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
最終 3次元分類ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

初期モデルPDB ID:

5ul9


Chain - Source name: PDB / Chain - Initial model type: experimental model
精密化空間: REAL / プロトコル: FLEXIBLE FIT
得られたモデル

PDB-7t9g:
Structure of VcINDY-Na+

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

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  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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