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万見
- EMDB-21368: Cryo-EM structure of the wild-type human serotonin transporter co... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-21368
タイトルCryo-EM structure of the wild-type human serotonin transporter complexed with paroxetine and 8B6 Fab
マップデータsharpened map
試料
  • 複合体: serotonin transporter 8B6 Fab complex
    • 複合体: serotonin transporter
      • タンパク質・ペプチド: Sodium-dependent serotonin transporter
    • 複合体: 8B6 antibody
      • タンパク質・ペプチド: 8B6 antibody, light chain
      • タンパク質・ペプチド: 8B6 antibody, heavy chain
  • リガンド: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose
  • リガンド: Paroxetine
  • リガンド: CHLORIDE ION
  • リガンド: DODECYL-BETA-D-MALTOSIDE
機能・相同性
機能・相同性情報


negative regulation of cerebellar granule cell precursor proliferation / regulation of thalamus size / Serotonin clearance from the synaptic cleft / serotonergic synapse / positive regulation of serotonin secretion / cocaine binding / serotonin:sodium:chloride symporter activity / negative regulation of synaptic transmission, dopaminergic / sperm ejaculation / enteric nervous system development ...negative regulation of cerebellar granule cell precursor proliferation / regulation of thalamus size / Serotonin clearance from the synaptic cleft / serotonergic synapse / positive regulation of serotonin secretion / cocaine binding / serotonin:sodium:chloride symporter activity / negative regulation of synaptic transmission, dopaminergic / sperm ejaculation / enteric nervous system development / neurotransmitter transmembrane transporter activity / serotonin uptake / cellular response to cGMP / negative regulation of organ growth / sodium ion binding / monoamine transmembrane transporter activity / monoamine transport / conditioned place preference / serotonin binding / vasoconstriction / brain morphogenesis / neurotransmitter transport / antiporter activity / syntaxin-1 binding / amino acid transport / nitric-oxide synthase binding / membrane depolarization / social behavior / behavioral response to cocaine / negative regulation of neuron differentiation / sodium ion transmembrane transport / endomembrane system / monoatomic cation channel activity / positive regulation of cell cycle / cellular response to retinoic acid / response to nutrient / response to toxic substance / memory / platelet aggregation / circadian rhythm / actin filament binding / integrin binding / response to estradiol / presynaptic membrane / postsynaptic membrane / endosome membrane / response to hypoxia / response to xenobiotic stimulus / neuron projection / immune response / membrane raft / focal adhesion / synapse / positive regulation of gene expression / extracellular space / identical protein binding / plasma membrane
類似検索 - 分子機能
Sodium:neurotransmitter symporter, serotonin, N-terminal / Serotonin (5-HT) neurotransmitter transporter, N-terminus / Sodium:neurotransmitter symporter family signature 2. / Sodium:neurotransmitter symporter family signature 1. / Sodium:neurotransmitter symporter / Sodium:neurotransmitter symporter superfamily / Sodium:neurotransmitter symporter family / Sodium:neurotransmitter symporter family profile. / Immunoglobulin V-Type / Immunoglobulin V-set domain ...Sodium:neurotransmitter symporter, serotonin, N-terminal / Serotonin (5-HT) neurotransmitter transporter, N-terminus / Sodium:neurotransmitter symporter family signature 2. / Sodium:neurotransmitter symporter family signature 1. / Sodium:neurotransmitter symporter / Sodium:neurotransmitter symporter superfamily / Sodium:neurotransmitter symporter family / Sodium:neurotransmitter symporter family profile. / Immunoglobulin V-Type / Immunoglobulin V-set domain / Immunoglobulin V-set domain / Immunoglobulin subtype / Immunoglobulin / Immunoglobulin/major histocompatibility complex, conserved site / Immunoglobulins and major histocompatibility complex proteins signature. / Immunoglobulin C-Type / Immunoglobulin C1-set / Immunoglobulin C1-set domain / Ig-like domain profile. / Immunoglobulin-like domain / Immunoglobulin-like domain superfamily / Immunoglobulin-like fold
類似検索 - ドメイン・相同性
MAb 6H10 light chain / Sodium-dependent serotonin transporter
類似検索 - 構成要素
生物種Homo sapiens (ヒト) / Mus musculus (ハツカネズミ)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.3 Å
データ登録者Coleman JA / Navratna V / Yang D
資金援助 米国, 2件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of Mental Health (NIH/NIMH)5R37MH070039 米国
Howard Hughes Medical Institute (HHMI) 米国
引用ジャーナル: Elife / 年: 2020
タイトル: Chemical and structural investigation of the paroxetine-human serotonin transporter complex.
著者: Jonathan A Coleman / Vikas Navratna / Daniele Antermite / Dongxue Yang / James A Bull / Eric Gouaux /
要旨: Antidepressants target the serotonin transporter (SERT) by inhibiting serotonin reuptake. Structural and biochemical studies aiming to understand binding of small-molecules to conformationally ...Antidepressants target the serotonin transporter (SERT) by inhibiting serotonin reuptake. Structural and biochemical studies aiming to understand binding of small-molecules to conformationally dynamic transporters like SERT often require thermostabilizing mutations and antibodies to stabilize a specific conformation, leading to questions about relationships of these structures to the bonafide conformation and inhibitor binding poses of wild-type transporter. To address these concerns, we determined the structures of ∆N72/∆C13 and ts2-inactive SERT bound to paroxetine analogues using single-particle cryo-EM and x-ray crystallography, respectively. We synthesized enantiopure analogues of paroxetine containing either bromine or iodine instead of fluorine. We exploited the anomalous scattering of bromine and iodine to define the pose of these inhibitors and investigated inhibitor binding to Asn177 mutants of ts2-active SERT. These studies provide mutually consistent insights into how paroxetine and its analogues bind to the central substrate-binding site of SERT, stabilize the outward-open conformation, and inhibit serotonin transport.
履歴
登録2020年2月7日-
ヘッダ(付随情報) 公開2020年3月4日-
マップ公開2020年3月11日-
更新2020年11月25日-
現状2020年11月25日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 9.5
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（高さに従い着色）
  • 表面レベル: 9.5
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-6vrh
  • 表面レベル: 9.5
  • UCSF Chimeraによる作画
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ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_21368.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_21368.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 244.1 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈sharpened map
ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.648 Å
密度
表面レベル登録者による: 9.5 / ムービー #1: 9.5
最小 - 最大-37.094265 - 47.929146
平均 (標準偏差)-0.0007370758 (±0.94584185)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderZYX
Origin000
サイズ400400400
Spacing400400400
セルA=B=C: 259.2 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z0.6480.6480.648
M x/y/z400400400
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z259.200259.200259.200
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ000
NX/NY/NZ400400400
MAP C/R/S321
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS400400400
D min/max/mean-37.09447.929-0.001

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添付データ

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追加マップ: unsharpened map

ファイルemd_21368_additional.map
注釈unsharpened map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

-
ハーフマップ: halfmap1

ファイルemd_21368_half_map_1.map
注釈halfmap1
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

-
ハーフマップ: halfmap2

ファイルemd_21368_half_map_2.map
注釈halfmap2
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : serotonin transporter 8B6 Fab complex

全体名称: serotonin transporter 8B6 Fab complex
要素
  • 複合体: serotonin transporter 8B6 Fab complex
    • 複合体: serotonin transporter
      • タンパク質・ペプチド: Sodium-dependent serotonin transporter
    • 複合体: 8B6 antibody
      • タンパク質・ペプチド: 8B6 antibody, light chain
      • タンパク質・ペプチド: 8B6 antibody, heavy chain
  • リガンド: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose
  • リガンド: Paroxetine
  • リガンド: CHLORIDE ION
  • リガンド: DODECYL-BETA-D-MALTOSIDE

+
超分子 #1: serotonin transporter 8B6 Fab complex

超分子名称: serotonin transporter 8B6 Fab complex / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3
分子量理論値: 105 KDa

+
超分子 #2: serotonin transporter

超分子名称: serotonin transporter / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
組換発現生物種: Homo sapiens (ヒト)

+
超分子 #3: 8B6 antibody

超分子名称: 8B6 antibody / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #2-#3
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
組換発現生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)

+
分子 #1: Sodium-dependent serotonin transporter

分子名称: Sodium-dependent serotonin transporter / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
分子量理論値: 70.371305 KDa
組換発現生物種: Homo sapiens (ヒト)
配列文字列: METTPLNSQK QLSACEDGED CQENGVLQKV VPTPGDKVES GQISNGYSAV PSPGAGDDTR HSIPATTTTL VAELHQGERE TWGKKVDFL LSVIGYAVDL GNVWRFPYIC YQNGGGAFLL PYTIMAIFGG IPLFYMELAL GQYHRNGCIS IWRKICPIFK G IGYAICII ...文字列:
METTPLNSQK QLSACEDGED CQENGVLQKV VPTPGDKVES GQISNGYSAV PSPGAGDDTR HSIPATTTTL VAELHQGERE TWGKKVDFL LSVIGYAVDL GNVWRFPYIC YQNGGGAFLL PYTIMAIFGG IPLFYMELAL GQYHRNGCIS IWRKICPIFK G IGYAICII AFYIASYYNT IMAWALYYLI SSFTDQLPWT SCKNSWNTGN CTNYFSEDNI TWTLHSTSPA EEFYTRHVLQ IH RSKGLQD LGGISWQLAL CIMLIFTVIY FSIWKGVKTS GKVVWVTATF PYIILSVLLV RGATLPGAWR GVLFYLKPNW QKL LETGVW IDAAAQIFFS LGPGFGVLLA FASYNKFNNN CYQDALVTSV VNCMTSFVSG FVIFTVLGYM AEMRNEDVSE VAKD AGPSL LFITYAEAIA NMPASTFFAI IFFLMLITLG LDSTFAGLEG VITAVLDEFP HVWAKRRERF VLAVVITCFF GSLVT LTFG GAYVVKLLEE YATGPAVLTV ALIEAVAVSW FYGITQFCRD VKEMLGFSPG WFWRICWVAI SPLFLLFIIC SFLMSP PQL RLFQYNYPYW SIILGYCIGT SSFICIPTYI AYRLIITPGT FKERIIKSIT PETPTEIPCG DIRLNAV

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分子 #2: 8B6 antibody, light chain

分子名称: 8B6 antibody, light chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
分子量理論値: 23.718217 KDa
組換発現生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
配列文字列: DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVS TAVAWYQQKP GQSPKLLIYS ASYRYTGVPD RFTGSGSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQ QHYSIPRTFG GGTKLEIKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG ASVVCFLNNF YPKDINVKWK IDGSERQNGV L NSWTDQDS ...文字列:
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVS TAVAWYQQKP GQSPKLLIYS ASYRYTGVPD RFTGSGSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQ QHYSIPRTFG GGTKLEIKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG ASVVCFLNNF YPKDINVKWK IDGSERQNGV L NSWTDQDS KDSTYSMSST LTLTKDEYER HNSYTCEATH KTSTSPIVKS FNRNEC

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分子 #3: 8B6 antibody, heavy chain

分子名称: 8B6 antibody, heavy chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Mus musculus (ハツカネズミ)
分子量理論値: 23.688365 KDa
組換発現生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
配列文字列: EVQLQQSGPE LVKPGASVKI SCKASGYTFT DYYMNWVKQS HGKSLEWIGN INPNNGGTSY NQKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSE DSAVYYCTRS PVRPYYFDYW GQGTTLTVSS AKTTPPSVYP LAPGCGDTTG SSVTLGCLVK GYFPESVTVT W NSGSLSSS ...文字列:
EVQLQQSGPE LVKPGASVKI SCKASGYTFT DYYMNWVKQS HGKSLEWIGN INPNNGGTSY NQKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSE DSAVYYCTRS PVRPYYFDYW GQGTTLTVSS AKTTPPSVYP LAPGCGDTTG SSVTLGCLVK GYFPESVTVT W NSGSLSSS VHTFPALLQS GLYTMSSSVT VPSSTWPSQT VTCSVAHPAS STTVDKKLEP SGP

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分子 #4: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose

分子名称: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 2 / 式: NAG
分子量理論値: 221.208 Da
Chemical component information

ChemComp-NAG:
2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose / N-アセチル-β-D-グルコサミン

+
分子 #5: Paroxetine

分子名称: Paroxetine / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 1 / 式: 8PR
分子量理論値: 329.365 Da
Chemical component information

ChemComp-8PR:
Paroxetine / パロキセチン / 抗うつ薬, 阻害剤*YM

+
分子 #6: CHLORIDE ION

分子名称: CHLORIDE ION / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 1 / 式: CL
分子量理論値: 35.453 Da

+
分子 #7: DODECYL-BETA-D-MALTOSIDE

分子名称: DODECYL-BETA-D-MALTOSIDE / タイプ: ligand / ID: 7 / コピー数: 1 / 式: LMT
分子量理論値: 510.615 Da
Chemical component information

ChemComp-LMT:
DODECYL-BETA-D-MALTOSIDE / ドデシルβ-D-マルトシド / 可溶化剤*YM

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度4 mg/mL
緩衝液pH: 8
構成要素:
濃度名称
20.0 mMTris
100.0 mMsodium chloride
1.0 mMDodecyl maltopyranoside
0.2 mMCholesteryl hemisuccinate
グリッドモデル: Quantifoil R2/2 / 材質: GOLD / メッシュ: 200 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE
凍結凍結剤: ETHANE
詳細monodisperse

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
平均電子線量: 57.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

CTF補正ソフトウェア - 名称: CTFFIND
初期モデルモデルのタイプ: OTHER / 詳細: ab initio
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 420373
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cisTEM
最終 3次元分類ソフトウェア - 名称: RELION
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

初期モデルPDB ID:

6awn

精密化プロトコル: RIGID BODY FIT
得られたモデル

PDB-6vrh:
Cryo-EM structure of the wild-type human serotonin transporter complexed with paroxetine and 8B6 Fab

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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