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基本情報
| 登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-20394 | |||||||||
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| タイトル | Sigm28-transcription initiation complex with specific promoter at the state 1 | |||||||||
マップデータ | sigma28-TIC on specific promoter at state 1 with de novo RNA transcript | |||||||||
試料 |
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キーワード | sigma28 / transcription initiation complex / RpoF / ZNR domain / TRANSCRIPTION | |||||||||
| 機能・相同性 | 機能・相同性情報RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / regulation of DNA-templated transcription initiation / sigma factor activity / bacterial-type flagellum assembly / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation ...RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / regulation of DNA-templated transcription initiation / sigma factor activity / bacterial-type flagellum assembly / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription elongation / transcription elongation factor complex / transcription antitermination / cell motility / DNA-templated transcription initiation / ribonucleoside binding / DNA-directed RNA polymerase / DNA-directed RNA polymerase activity / response to heat / protein-containing complex assembly / intracellular iron ion homeostasis / protein dimerization activity / DNA-templated transcription / regulation of DNA-templated transcription / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / membrane / cytoplasm / cytosol 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
| 生物種 | ![]() ![]() ![]() ![]() | |||||||||
| 手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.86 Å | |||||||||
データ登録者 | Liu B / Shi W | |||||||||
引用 | ジャーナル: EMBO J / 年: 2020タイトル: Structural basis of bacterial σ -mediated transcription reveals roles of the RNA polymerase zinc-binding domain. 著者: Wei Shi / Wei Zhou / Baoyue Zhang / Shaojia Huang / Yanan Jiang / Abigail Schammel / Yangbo Hu / Bin Liu / ![]() 要旨: In bacteria, σ is the flagella-specific sigma factor that targets RNA polymerase (RNAP) to control the expression of flagella-related genes involving bacterial motility and chemotaxis. However, the ...In bacteria, σ is the flagella-specific sigma factor that targets RNA polymerase (RNAP) to control the expression of flagella-related genes involving bacterial motility and chemotaxis. However, the structural mechanism of σ -dependent promoter recognition remains uncharacterized. Here, we report cryo-EM structures of E. coli σ -dependent transcribing complexes on a complete flagella-specific promoter. These structures reveal how σ -RNAP recognizes promoter DNA through strong interactions with the -10 element, but weak contacts with the -35 element, to initiate transcription. In addition, we observed a distinct architecture in which the β' zinc-binding domain (ZBD) of RNAP stretches out from its canonical position to interact with the upstream non-template strand. Further in vitro and in vivo assays demonstrate that this interaction has the overall effect of facilitating closed-to-open isomerization of the RNAP-promoter complex by compensating for the weak interaction between σ4 and -35 element. This suggests that ZBD relocation may be a general mechanism employed by σ family factors to enhance transcription from promoters with weak σ4/-35 element interactions. | |||||||||
| 履歴 |
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構造の表示
| ムービー |
ムービービューア |
|---|---|
| 構造ビューア | EMマップ: SurfView Molmil Jmol/JSmol |
| 添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
| マップデータ | emd_20394.map.gz | 117.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
|---|---|---|---|---|
| ヘッダ (付随情報) | emd-20394-v30.xml emd-20394.xml | 24 KB 24 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
| 画像 | emd_20394.png | 83.4 KB | ||
| Filedesc metadata | emd-20394.cif.gz | 8.6 KB | ||
| アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-20394 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-20394 | HTTPS FTP |
-検証レポート
| 文書・要旨 | emd_20394_validation.pdf.gz | 555.5 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
|---|---|---|---|---|
| 文書・詳細版 | emd_20394_full_validation.pdf.gz | 555 KB | 表示 | |
| XML形式データ | emd_20394_validation.xml.gz | 6.9 KB | 表示 | |
| CIF形式データ | emd_20394_validation.cif.gz | 7.9 KB | 表示 | |
| アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-20394 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-20394 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-
リンク
| EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
|---|---|
| 「今月の分子」の関連する項目 |
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マップ
| ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_20394.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 129.7 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 注釈 | sigma28-TIC on specific promoter at state 1 with de novo RNA transcript | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.9 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 密度 |
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| 対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
+全体 : sigm28-transcription initiation complex with specific promoter at...
+超分子 #1: sigm28-transcription initiation complex with specific promoter at...
+分子 #1: DNA-directed RNA polymerase subunit alpha
+分子 #2: DNA-directed RNA polymerase subunit beta
+分子 #3: DNA-directed RNA polymerase subunit beta'
+分子 #4: DNA-directed RNA polymerase subunit omega
+分子 #5: RNA polymerase sigma factor FliA
+分子 #6: SYNTHETIC NONTEMPLATE STRAND DNA (54-MER)
+分子 #7: SYNTHETIC TEMPLATE STRAND DNA (54-MER)
+分子 #8: Nascent RNA
+分子 #9: ZINC ION
+分子 #10: MAGNESIUM ION
-実験情報
-構造解析
| 手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
|---|---|
解析 | 単粒子再構成法 |
| 試料の集合状態 | particle |
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試料調製
| 濃度 | 0.45 mg/mL | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 緩衝液 | pH: 7.5 構成要素:
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| グリッド | モデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 200 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 120 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 詳細: 15mA | ||||||||||||
| 凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: blot for 3 seconds before plunging. |
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電子顕微鏡法
| 顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
|---|---|
| 温度 | 最低: 77.0 K / 最高: 77.0 K |
| 詳細 | Direct alignments: Beam tilt pivot points, Beam shift, Comma Free. C2 aperture centering, C2 lens astigmatism correction. Objective aperture centering and objective lens astigmatism correction. |
| 撮影 | フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 4215 / 平均露光時間: 30.0 sec. / 平均電子線量: 30.0 e/Å2 |
| 電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
| 電子光学系 | C2レンズ絞り径: 100.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.6 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.6 µm / 倍率(公称値): 96000 |
| 試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
| 実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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