+データを開く
-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-20353 | ||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
タイトル | High resolution cryo-EM structure of E.coli 50S | ||||||||||||
マップデータ | |||||||||||||
試料 |
| ||||||||||||
キーワード | RIBOSOME | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 large ribosomal subunit / 5S rRNA binding / transferase activity / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome ...large ribosomal subunit / 5S rRNA binding / transferase activity / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) / Escherichia coli | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.2 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Stojkovic V / Myasnikov A | ||||||||||||
資金援助 | 米国, 3件
| ||||||||||||
引用 | ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2020 タイトル: Assessment of the nucleotide modifications in the high-resolution cryo-electron microscopy structure of the Escherichia coli 50S subunit. 著者: Vanja Stojković / Alexander G Myasnikov / Iris D Young / Adam Frost / James S Fraser / Danica Galonić Fujimori / 要旨: Post-transcriptional ribosomal RNA (rRNA) modifications are present in all organisms, but their exact functional roles and positions are yet to be fully characterized. Modified nucleotides have been ...Post-transcriptional ribosomal RNA (rRNA) modifications are present in all organisms, but their exact functional roles and positions are yet to be fully characterized. Modified nucleotides have been implicated in the stabilization of RNA structure and regulation of ribosome biogenesis and protein synthesis. In some instances, rRNA modifications can confer antibiotic resistance. High-resolution ribosome structures are thus necessary for precise determination of modified nucleotides' positions, a task that has previously been accomplished by X-ray crystallography. Here, we present a cryo-electron microscopy (cryo-EM) structure of the Escherichia coli 50S subunit at an average resolution of 2.2 Å as an additional approach for mapping modification sites. Our structure confirms known modifications present in 23S rRNA and additionally allows for localization of Mg2+ ions and their coordinated water molecules. Using our cryo-EM structure as a testbed, we developed a program for assessment of cryo-EM map quality. This program can be easily used on any RNA-containing cryo-EM structure, and an associated Coot plugin allows for visualization of validated modifications, making it highly accessible. | ||||||||||||
履歴 |
|
-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
---|---|
構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_20353.map.gz | 475.8 MB | EMDBマップデータ形式 | |
---|---|---|---|---|
ヘッダ (付随情報) | emd-20353-v30.xml emd-20353.xml | 46.1 KB 46.1 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_20353.png emd_20353_wrong.png | 398.3 KB 35.4 KB | ||
Filedesc metadata | emd-20353.cif.gz | 10.9 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-20353 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-20353 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_20353_validation.pdf.gz | 729.3 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
---|---|---|---|---|
文書・詳細版 | emd_20353_full_validation.pdf.gz | 728.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_20353_validation.xml.gz | 8.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_20353_validation.cif.gz | 9.6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-20353 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-20353 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
---|---|
「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_20353.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 512 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.822 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
|
-添付データ
-試料の構成要素
+全体 : Escherichia coli 50S subunit
+超分子 #1: Escherichia coli 50S subunit
+分子 #1: 23S rRNA
+分子 #2: 5S rRNA
+分子 #3: 50S ribosomal protein L2
+分子 #4: 50S ribosomal protein L3
+分子 #5: 50S ribosomal protein L4
+分子 #6: 50S ribosomal protein L5
+分子 #7: 50S ribosomal protein L6
+分子 #8: 50S ribosomal protein L9
+分子 #9: 50S ribosomal protein L11
+分子 #10: 50S ribosomal protein L13
+分子 #11: 50S ribosomal protein L14
+分子 #12: 50S ribosomal protein L15
+分子 #13: 50S ribosomal protein L16
+分子 #14: 50S ribosomal protein L17
+分子 #15: 50S ribosomal protein L18
+分子 #16: 50S ribosomal protein L19
+分子 #17: 50S ribosomal protein L20
+分子 #18: 50S ribosomal protein L21
+分子 #19: 50S ribosomal protein L22
+分子 #20: 50S ribosomal protein L23
+分子 #21: 50S ribosomal protein L24
+分子 #22: 50S ribosomal protein L25
+分子 #23: 50S ribosomal protein L27
+分子 #24: 50S ribosomal protein L28
+分子 #25: 50S ribosomal protein L29
+分子 #26: 50S ribosomal protein L30
+分子 #27: 50S ribosomal protein L32
+分子 #28: 50S ribosomal protein L33
+分子 #29: 50S ribosomal protein L34
+分子 #30: 50S ribosomal protein L35
+分子 #31: 50S ribosomal protein L36
+分子 #32: MAGNESIUM ION
+分子 #33: SODIUM ION
+分子 #34: ZINC ION
+分子 #35: water
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
---|---|
解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1 mg/mL |
---|---|
緩衝液 | pH: 7.5 / 構成要素 - 濃度: 10.0 mM / 構成要素 - 式: TRIS / 構成要素 - 名称: TRIS / 詳細: Buffer A |
グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 2 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 詳細: easyGlow settings |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 10 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV 詳細: Blot Force 5 Blot Time 10sec Hum 95% Temperature 10C Waiting time 1 min. |
詳細 | 50S ribosomal subunit was purified from E. coli MRE600 using modified version of previously published protocol (Mehta et al. 2012) |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
---|---|
温度 | 最低: 86.0 K / 最高: 130.0 K |
アライメント法 | Coma free - Residual tilt: 10.0 mrad |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: SUPER-RESOLUTION / デジタル化 - サイズ - 横: 3838 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 3710 pixel / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 0-80 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1889 / 平均露光時間: 8.0 sec. / 平均電子線量: 80.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 70.0 µm / 最大 デフォーカス(補正後): 1.5 µm / 最小 デフォーカス(補正後): 0.5 µm / 倍率(補正後): 60827 / 照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 1.2 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.3 µm / 倍率(公称値): 59000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |