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万見
- EMDB-18137: HK68 cryo-EM structure achieved via rapid-spray and vitrification... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-18137
タイトルHK68 cryo-EM structure achieved via rapid-spray and vitrification for grid preparation
マップデータ
試料
  • 複合体: CryoEM reconstruction of Influenza A virus (HK68) hemagglutinin bound to an Affimer reagent
  • タンパク質・ペプチド: HK68
キーワードInhibitor / Antiviral / Influenza A Virus / Complex / ANTIVIRAL PROTEIN
生物種Influenza A virus (A型インフルエンザウイルス) / H3N2 subtype (ウイルス)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.3 Å
データ登録者Debski-Antoniak O / Flynn A / Klebl PD / Tiede C / Muench S / Tomlinson D / Fontana J
資金援助1件
OrganizationGrant number国
Other private
引用ジャーナル: mBio / 年: 2024
タイトル: Exploiting the Affimer platform against influenza A virus.
著者: Oliver Debski-Antoniak / Alex Flynn / David P Klebl / Moisés H Rojas Rechy / Christian Tiede / Ian A Wilson / Stephen P Muench / Darren Tomlinson / Juan Fontana /
要旨: Influenza A virus (IAV) is well known for its pandemic potential. While current surveillance and vaccination strategies are highly effective, therapeutic approaches are often short-lived due to the ...Influenza A virus (IAV) is well known for its pandemic potential. While current surveillance and vaccination strategies are highly effective, therapeutic approaches are often short-lived due to the high mutation rates of IAV. Recently, monoclonal antibodies (mAbs) have emerged as a promising therapeutic approach, both against current strains and future IAV pandemics. In addition to mAbs, several antibody-like alternatives exist, which aim to improve upon mAbs. Among these, Affimers stand out for their short development time, high expression levels in , and animal-free production. In this study, we utilized the Affimer platform to isolate and produce specific and potent inhibitors of IAV. Using a monomeric version of the IAV trimeric hemagglutinin (HA) fusion protein, we isolated 12 Affimers that inhibit IAV infection . Two of these Affimers were characterized in detail and exhibited nanomolar-binding affinities to the target H3 HA protein, specifically binding to the HA1 head domain. Cryo-electron microscopy (cryo-EM), employing a novel spray approach to prepare cryo-grids, allowed us to image HA-Affimer complexes. Combined with functional assays, we determined that these Affimers inhibit IAV by blocking the interaction of HA with the host-cell receptor, sialic acid. Furthermore, these Affimers inhibited IAV strains closely related to the one used for their isolation. Overall, our results support the use of Affimers as a viable alternative to existing targeted therapies for IAV and highlight their potential as diagnostic reagents.
IMPORTANCE: Influenza A virus is one of the few viruses that can cause devastating pandemics. Due to the high mutation rates of this virus, annual vaccination is required, and antivirals are short- ...IMPORTANCE: Influenza A virus is one of the few viruses that can cause devastating pandemics. Due to the high mutation rates of this virus, annual vaccination is required, and antivirals are short-lived. Monoclonal antibodies present a promising approach to tackle influenza virus infections but are associated with some limitations. To improve on this strategy, we explored the Affimer platform, which are antibody-like proteins made in bacteria. By performing phage-display against a monomeric version of influenza virus fusion protein, an established viral target, we were able to isolate Affimers that inhibit influenza virus infection . We characterized the mechanism of inhibition of the Affimers by using assays targeting different stages of the viral replication cycle. We additionally characterized HA-Affimer complex structure, using a novel approach to prepare samples for cryo-electron microscopy. Overall, these results show that Affimers are a promising tool against influenza virus infection.
履歴
登録2023年8月5日-
ヘッダ(付随情報) 公開2024年8月14日-
マップ公開2024年8月14日-
更新2024年8月28日-
現状2024年8月28日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_18137.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_18137.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 103 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.07 Å/pix.
x 300 pix.
= 321. Å		1.07 Å/pix.
x 300 pix.
= 321. Å		1.07 Å/pix.
x 300 pix.
= 321. Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.07 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.0142
最小 - 最大-0.040159293 - 0.06751043
平均 (標準偏差)-0.0000089299165 (±0.0017481442)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ300300300
Spacing300300300
セルA=B=C: 321.00003 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_18137_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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追加マップ: #1

ファイルemd_18137_additional_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_18137_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : CryoEM reconstruction of Influenza A virus (HK68) hemagglutinin b...

全体名称: CryoEM reconstruction of Influenza A virus (HK68) hemagglutinin bound to an Affimer reagent
要素
  • 複合体: CryoEM reconstruction of Influenza A virus (HK68) hemagglutinin bound to an Affimer reagent
  • タンパク質・ペプチド: HK68

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超分子 #1: CryoEM reconstruction of Influenza A virus (HK68) hemagglutinin b...

超分子名称: CryoEM reconstruction of Influenza A virus (HK68) hemagglutinin bound to an Affimer reagent
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0
由来(天然)生物種: Influenza A virus (A型インフルエンザウイルス)

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分子 #1: HK68

分子名称: HK68 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: DEXTRO
由来(天然)生物種: H3N2 subtype (ウイルス)
組換発現生物種: Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector pPpGUT1 (その他)
配列文字列: ADPGATLCLG HHAVPNGTLV KTITDDQIEV TNATELVQSS STGKICNNPH RILDGIDCTL IDALLGDPHC DVFQNETWDL FVERSKAFSN CYPYDVPDYA SLRSLVASSG TLEFITEGFT WTGVTQNGGS NACKRGPGSG FFSRLNWLTK SGSTYPVLNV TMPNNDNFDK ...文字列:
ADPGATLCLG HHAVPNGTLV KTITDDQIEV TNATELVQSS STGKICNNPH RILDGIDCTL IDALLGDPHC DVFQNETWDL FVERSKAFSN CYPYDVPDYA SLRSLVASSG TLEFITEGFT WTGVTQNGGS NACKRGPGSG FFSRLNWLTK SGSTYPVLNV TMPNNDNFDK LYIWGVHHPS TNQEQTSLYV QASGRVTVST RRSQQTIIPN IGSRPWVRGL SSRISIYWTI VKPGDVLVIN SNGNLIAPRG YFKMRTGKSS IMRSDAPIDT CISECITPNG SIPNDKPFQN VNKITYGACP KYVKQNTLKL ATGMRNVPEK QTRGLFGAIA GFIENGWEGM IDGWYGFRHQ NSEGTGQAAD LKSTQAAIDQ INGKLNRVIE KTNEKFHQIE KEFSEVEGRI QDLEKYVEDT KIDLWSYNAE LLVALENQHT IDLTDSEMNK LFEKTGRQLR ENAEDMGNGC FKIYHKCDNA CIESIRNGTY DHDVYRDEAL NNRFQIK

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 7.4
凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k)
平均電子線量: 56.2 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: OTHER / 最大 デフォーカス（公称値）: 4.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 129501
初期 角度割当タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION
最終 角度割当タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION
FSC曲線 (解像度の算出)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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