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基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-1648 | |||||||||
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タイトル | Assembly and Allosteric Mechanism of Molluscan Hemocyanin Revealed by Cryo-EM Structure and Pseudo-atomic Model | |||||||||
![]() | The whole structure of Haliotis diversicolor Hemocyanin isoform 1 (HdH1) is a hollow cylindrical dodecamer. Each of its 20 subunits is composed of 8 functional units (FUs). | |||||||||
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![]() | Oxygen binding / allosteric mechanism | |||||||||
機能・相同性 | metabolic process / Di-copper centre-containing domain superfamily![]() | |||||||||
生物種 | ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 7.8 Å | |||||||||
![]() | Xinghong D / Junjie Z / Jiangyong W / Kunpeng L / Donghua C / Qinfen Z / Wah C | |||||||||
![]() | ![]() タイトル: Cryo-EM structure of a molluscan hemocyanin suggests its allosteric mechanism. 著者: Qinfen Zhang / Xinghong Dai / Yao Cong / Junjie Zhang / Dong-Hua Chen / Matthew T Dougherty / Jiangyong Wang / Steven J Ludtke / Michael F Schmid / Wah Chiu / ![]() 要旨: Hemocyanins are responsible for transporting O2 in the arthropod and molluscan hemolymph. Haliotis diversicolor molluscan hemocyanin isoform 1 (HdH1) is an 8 MDa oligomer. Each subunit is made up of ...Hemocyanins are responsible for transporting O2 in the arthropod and molluscan hemolymph. Haliotis diversicolor molluscan hemocyanin isoform 1 (HdH1) is an 8 MDa oligomer. Each subunit is made up of eight functional units (FUs). Each FU contains two Cu ions, which can reversibly bind an oxygen molecule. Here, we report a 4.5 A° cryo-EM structure of HdH1. The structure clearly shows ten asymmetric units arranged with D5 symmetry. Each asymmetric unit contains two structurally distinct but chemically identical subunits. The map is sufficiently resolved to trace the entire subunit Ca backbone and to visualize densities corresponding to some large side chains, Cu ion pairs, and interaction networks of adjacent subunits. A FU topology path intertwining between the two subunits of the asymmetric unit is unambiguously determined. Our observations suggest a structural mechanism for the stability of the entire hemocyanin didecamer and 20 ‘‘communication clusters’’ across asymmetric units responsible for its allosteric property upon oxygen binding. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: ![]() ![]() ![]() |
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 277.7 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 10.1 KB 10.1 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 762.3 KB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
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注釈 | The whole structure of Haliotis diversicolor Hemocyanin isoform 1 (HdH1) is a hollow cylindrical dodecamer. Each of its 20 subunits is composed of 8 functional units (FUs). | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.06 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
-全体 : Haliotis diversicolor (Gastropod, Mollusca) Hemocyanin isoform 1 ...
全体 | 名称: Haliotis diversicolor (Gastropod, Mollusca) Hemocyanin isoform 1 (HdH1) |
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要素 |
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-超分子 #1000: Haliotis diversicolor (Gastropod, Mollusca) Hemocyanin isoform 1 ...
超分子 | 名称: Haliotis diversicolor (Gastropod, Mollusca) Hemocyanin isoform 1 (HdH1) タイプ: sample / ID: 1000 / 集合状態: Dodecamer / Number unique components: 1 |
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分子量 | 実験値: 8 MDa / 理論値: 8 MDa / 手法: SDS-PAGE |
-分子 #1: Hemocyanin
分子 | 名称: Hemocyanin / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / Name.synonym: Hemocyanin / コピー数: 20 / 集合状態: Dodecamer / 組換発現: No |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 実験値: 8 MDa / 理論値: 8 MDa |
配列 | GO: metabolic process / InterPro: Di-copper centre-containing domain superfamily |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
緩衝液 | pH: 7.5 詳細: 0.2M NaCl , 50mM Tris-HCl, 5mM CaCl2, 5mM MgCl2, pH7.5 |
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グリッド | 詳細: 1.2/1.3 copper Quantifoil grids |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 101 K / 装置: OTHER / 詳細: Vitrification instrument: Vitrobot / 手法: Blot for 2 seconds before plunging |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | JEOL 3200FSC |
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温度 | 平均: 101 K |
アライメント法 | Legacy - 非点収差: Objective lens astigmatism was corrected at 400,000 times magnification |
特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: JEOL in-column |
詳細 | MDS |
撮影 | カテゴリ: FILM / フィルム・検出器のモデル: KODAK SO-163 FILM デジタル化 - スキャナー: NIKON SUPER COOLSCAN 9000 デジタル化 - サンプリング間隔: 6.35 µm / 実像数: 820 / 平均電子線量: 18 e/Å2 / ビット/ピクセル: 16 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 4.1 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm / 倍率(公称値): 60000 |
試料ステージ | 試料ホルダー: Eucentric / 試料ホルダーモデル: JEOL 3200FSC CRYOHOLDER |
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画像解析
詳細 | Particles were automatically boxed out from micrographs by e2boxer.py from EMAN2 single particle analysis software package, and CTF correction was carried out with EMAN program CTFIT. All the 3D reconstruction was done with EMAN1.8. |
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CTF補正 | 詳細: Each micrograph |
最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: D5 (2回x5回 2面回転対称) 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 7.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: EMAN / 使用した粒子像数: 41650 |