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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-11417 | |||||||||
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タイトル | Tomogram of endogenous a-synuclein inclusion in primary mouse neurons seeded with PFFs | |||||||||
マップデータ | Tomogram of endogenous a-synuclein aggregate in primary mouse neurons seeded with PFFs | |||||||||
試料 |
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生物種 | Mus musculus (ハツカネズミ) | |||||||||
手法 | 電子線トモグラフィー法 / クライオ電子顕微鏡法 | |||||||||
データ登録者 | Trinkaus VA / Hartl FU / Fernandez-Busnadiego R | |||||||||
資金援助 | ドイツ, 2件
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引用 | ジャーナル: Nat Commun / 年: 2021 タイトル: In situ architecture of neuronal α-Synuclein inclusions. 著者: Victoria A Trinkaus / Irene Riera-Tur / Antonio Martínez-Sánchez / Felix J B Bäuerlein / Qiang Guo / Thomas Arzberger / Wolfgang Baumeister / Irina Dudanova / Mark S Hipp / F Ulrich Hartl ...著者: Victoria A Trinkaus / Irene Riera-Tur / Antonio Martínez-Sánchez / Felix J B Bäuerlein / Qiang Guo / Thomas Arzberger / Wolfgang Baumeister / Irina Dudanova / Mark S Hipp / F Ulrich Hartl / Rubén Fernández-Busnadiego / 要旨: The molecular architecture of α-Synuclein (α-Syn) inclusions, pathognomonic of various neurodegenerative disorders, remains unclear. α-Syn inclusions were long thought to consist mainly of α-Syn ...The molecular architecture of α-Synuclein (α-Syn) inclusions, pathognomonic of various neurodegenerative disorders, remains unclear. α-Syn inclusions were long thought to consist mainly of α-Syn fibrils, but recent reports pointed to intracellular membranes as the major inclusion component. Here, we use cryo-electron tomography (cryo-ET) to image neuronal α-Syn inclusions in situ at molecular resolution. We show that inclusions seeded by α-Syn aggregates produced recombinantly or purified from patient brain consist of α-Syn fibrils crisscrossing a variety of cellular organelles. Using gold-labeled seeds, we find that aggregate seeding is predominantly mediated by small α-Syn fibrils, from which cytoplasmic fibrils grow unidirectionally. Detailed analysis of membrane interactions revealed that α-Syn fibrils do not contact membranes directly, and that α-Syn does not drive membrane clustering. Altogether, we conclusively demonstrate that neuronal α-Syn inclusions consist of α-Syn fibrils intermixed with membranous organelles, and illuminate the mechanism of aggregate seeding and cellular interaction. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
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添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_11417.map.gz | 694.4 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-11417-v30.xml emd-11417.xml | 11.7 KB 11.7 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_11417.png | 416.2 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-11417 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-11417 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_11417_validation.pdf.gz | 183.7 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_11417_full_validation.pdf.gz | 182.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_11417_validation.xml.gz | 4.7 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_11417_validation.cif.gz | 5.1 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-11417 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-11417 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_11417.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 752.3 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Tomogram of endogenous a-synuclein aggregate in primary mouse neurons seeded with PFFs | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 これらの図は立方格子座標系で作成されたものです | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 14.08 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
-全体 : Endogenous alpha-synuclein inclusion in primary mouse neuron seed...
全体 | 名称: Endogenous alpha-synuclein inclusion in primary mouse neuron seeded with PFFs |
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要素 |
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-超分子 #1: Endogenous alpha-synuclein inclusion in primary mouse neuron seed...
超分子 | 名称: Endogenous alpha-synuclein inclusion in primary mouse neuron seeded with PFFs タイプ: cell / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1 |
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由来(天然) | 生物種: Mus musculus (ハツカネズミ) |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 電子線トモグラフィー法 |
試料の集合状態 | cell |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7.4 |
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グリッド | モデル: Quantifoil R2/4 / 材質: GOLD / メッシュ: 200 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING |
凍結 | 凍結剤: ETHANE-PROPANE / チャンバー内湿度: 80 % / チャンバー内温度: 310 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
Cryo protectant | 10 % Glycerol |
切片作成 | 集束イオンビーム - 装置: OTHER / 集束イオンビーム - イオン: OTHER / 集束イオンビーム - 電圧: 30 kV / 集束イオンビーム - 電流: 0.1 nA / 集束イオンビーム - 時間: 2400 sec. / 集束イオンビーム - 温度: 77 K / 集束イオンビーム - Initial thickness: 1000 nm / 集束イオンビーム - 最終 厚さ: 150 nm 集束イオンビーム - 詳細: The value given for _emd_sectioning_focused_ion_beam.instrument is FEI Quanta FIB. This is not in a list of allowed values {'DB235', 'OTHER'} so OTHER is written into the XML file. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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温度 | 最低: 70.0 K / 最高: 75.0 K |
特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / デジタル化 - サイズ - 横: 3838 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 3710 pixel / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 17-24 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 55 / 平均露光時間: 2.55 sec. / 平均電子線量: 2.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 7.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 6.0 µm / 倍率(公称値): 34000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
最終 再構成 | アルゴリズム: BACK PROJECTION / ソフトウェア - 名称: IMOD (ver. 4.9.0) / 使用した粒子像数: 56 |
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