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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-0543 | ||||||||||||
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タイトル | Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Oligomeric Assembly 2a (OA-2a) | ||||||||||||
マップデータ | Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Oligomeric Assembly 2a (OA-2a) | ||||||||||||
試料 |
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キーワード | Helicobacter pylori / vacuolating cytotoxin A / pore-forming toxin / TOXIN | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 cell outer membrane / toxin activity / periplasmic space / cell surface / extracellular region 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Helicobacter pylori (ピロリ菌) | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.9 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Zhang K / Zhang H | ||||||||||||
資金援助 | 米国, 3件
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引用 | ジャーナル: Proc Natl Acad Sci U S A / 年: 2019 タイトル: Cryo-EM structures of vacuolating cytotoxin A oligomeric assemblies at near-atomic resolution. 著者: Kaiming Zhang / Huawei Zhang / Shanshan Li / Grigore D Pintilie / Tung-Chung Mou / Yuanzhu Gao / Qinfen Zhang / Henry van den Bedem / Michael F Schmid / Shannon Wing Ngor Au / Wah Chiu / 要旨: Human gastric pathogen () is the primary risk factor for gastric cancer and is one of the most prevalent carcinogenic infectious agents. Vacuolating cytotoxin A (VacA) is a key virulence factor ...Human gastric pathogen () is the primary risk factor for gastric cancer and is one of the most prevalent carcinogenic infectious agents. Vacuolating cytotoxin A (VacA) is a key virulence factor secreted by and induces multiple cellular responses. Although structural and functional studies of VacA have been extensively performed, the high-resolution structure of a full-length VacA protomer and the molecular basis of its oligomerization are still unknown. Here, we use cryoelectron microscopy to resolve 10 structures of VacA assemblies, including monolayer (hexamer and heptamer) and bilayer (dodecamer, tridecamer, and tetradecamer) oligomers. The models of the 88-kDa full-length VacA protomer derived from the near-atomic resolution maps are highly conserved among different oligomers and show a continuous right-handed β-helix made up of two domains with extensive domain-domain interactions. The specific interactions between adjacent protomers in the same layer stabilizing the oligomers are well resolved. For double-layer oligomers, we found short- and/or long-range hydrophobic interactions between protomers across the two layers. Our structures and other previous observations lead to a mechanistic model wherein VacA hexamer would correspond to the prepore-forming state, and the N-terminal region of VacA responsible for the membrane insertion would undergo a large conformational change to bring the hydrophobic transmembrane region to the center of the oligomer for the membrane channel formation. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_0543.map.gz | 204.1 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-0543-v30.xml emd-0543.xml | 15.9 KB 15.9 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_0543.png | 69.7 KB | ||
Filedesc metadata | emd-0543.cif.gz | 6 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-0543 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-0543 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_0543_validation.pdf.gz | 538 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_0543_full_validation.pdf.gz | 537.6 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_0543_validation.xml.gz | 7.2 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_0543_validation.cif.gz | 8.4 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-0543 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-0543 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 6nygMC 0542C 0544C 0545C 0546C 0547C 0548C 0549C 0550C 0551C 6nyfC 6nyjC 6nylC 6nymC 6nynC C: 同じ文献を引用 (文献) M: このマップから作成された原子モデル |
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類似構造データ | |
電子顕微鏡画像生データ | EMPIAR-10607 (タイトル: Cryo-EM structures of Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin A (VacA) oligomeric assemblies Data size: 3.9 TB Data #1: Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin A [micrographs - multiframe]) |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_0543.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 216 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Oligomeric Assembly 2a (OA-2a) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.06 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
-全体 : Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Oligomeric Assembly 2...
全体 | 名称: Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Oligomeric Assembly 2a (OA-2a) |
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要素 |
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-超分子 #1: Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Oligomeric Assembly 2...
超分子 | 名称: Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Oligomeric Assembly 2a (OA-2a) タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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由来(天然) | 生物種: Helicobacter pylori (ピロリ菌) / 株: 60190 |
分子量 | 理論値: 88 KDa |
-分子 #1: Vacuolating cytotoxin autotransporter
分子 | 名称: Vacuolating cytotoxin autotransporter / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 12 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Helicobacter pylori (ピロリ菌) |
分子量 | 理論値: 88.463211 KDa |
配列 | 文字列: AFFTTVIIPA IVGGIATGTA VGTVSGLLGW GLKQAEEANK TPDKPDKVWR IQAGKGFNEF PNKEYDLYKS LLSSKIDGGW DWGNAATHY WIKGGQWNKL EVDMKDAVGT YKLSGLRNFT GGDLDVNMQK ATLRLGQFNG NSFTSYKDSA DRTTRVDFNA K NILIDNFL ...文字列: AFFTTVIIPA IVGGIATGTA VGTVSGLLGW GLKQAEEANK TPDKPDKVWR IQAGKGFNEF PNKEYDLYKS LLSSKIDGGW DWGNAATHY WIKGGQWNKL EVDMKDAVGT YKLSGLRNFT GGDLDVNMQK ATLRLGQFNG NSFTSYKDSA DRTTRVDFNA K NILIDNFL EINNRVGSGA GRKASSTVLT LQASEGITSS KNAEISLYDG ATLNLASNSV KLNGNVWMGR LQYVGAYLAP SY STINTSK VTGEVNFNHL TVGDHNAAQA GIIASNKTHI GTLDLWQSAG LNIIAPPEGG YKDKPNNTPS QSGAKNDKQE SSQ NNSNTQ VINPPNSTQK TEVQPTQVID GPFAGGKDTV VNIDRINTKA DGTIKVGGFK ASLTTNAAHL NIGKGGVNLS NQAS GRTLL VENLTGNITV DGPLRVNNQV GGYALAGSSA NFEFKAGVDT KNGTATFNND ISLGRFVNLK VDAHTANFKG IDTGN GGFN TLDFSGVTNK VNINKLITAS TNVAVKNFNI NELIVKTNGV SVGEYTHFSE DIGSQSRINT VRLETGTRSI FSGGVK FKS GEKLVIDEFY YSPWNYFDAR NIKNVEITRK FASSTPENPW GTSKLMFNNL TLGQNAVMDY SQFSNLTIQG DFINNQG TI NYLVRGGKVA TLNVGNAAAM MFNNDIDSAT GFYKPLIKIN SAQDLIKNTE HVLLKAKIIG YGNVSTGTNG ISNVNLEE Q FKERLALYNN NNRMDTCVVR NTDDIKACGM AIGNQSMVNN PDNYKYLIGK AWKNIGISKT ANGSKISVYY LGNSTPTEN GGNTTNLPTN TTNNARFASY A UniProtKB: Vacuolating cytotoxin autotransporter |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.2 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.4 |
グリッド | 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: CONTINUOUS / 詳細: unspecified |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
詳細 | VacA OA-2a |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: GIF Quantum LS / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 1-30 / 撮影したグリッド数: 3 / 実像数: 13708 / 平均露光時間: 6.0 sec. / 平均電子線量: 7.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 70.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.3 µm / 倍率(公称値): 130000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
精密化 | プロトコル: BACKBONE TRACE |
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得られたモデル | PDB-6nyg: |