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万見
- PDB-8w1p: Structure of Selenomonas sp. Cascade (SsCascade) -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8w1p
タイトルStructure of Selenomonas sp. Cascade (SsCascade)
要素
  • Cas5
  • Cas6
  • Cas7
  • Cas8
  • Non-target strand DNA
  • Target strand DNA
  • crRNA
キーワードIMMUNE SYSTEM / CRISPR-Cas / Genome engineering / RNA-guided DNA endonuclease / Non-coding RNA / HNH nuclease
機能・相同性DNA / DNA (> 10) / RNA / RNA (> 10)
機能・相同性情報
生物種Selenomonas sp. (バクテリア)
synthetic construct (人工物)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.5 Å
データ登録者Hirano, S. / Zhang, F.
資金援助 米国, 1件
組織認可番号国
National Institutes of Health/National Human Genome Research Institute (NIH/NHGRI)5R01HG009761-07 米国
引用ジャーナル: Mol Cell / 年: 2024
タイトル: Structural determinants of DNA cleavage by a CRISPR HNH-Cascade system.
著者: Seiichi Hirano / Han Altae-Tran / Soumya Kannan / Rhiannon K Macrae / Feng Zhang /
要旨: Canonical prokaryotic type I CRISPR-Cas adaptive immune systems contain a multicomponent effector complex called Cascade, which degrades large stretches of DNA via Cas3 helicase-nuclease activity. ...Canonical prokaryotic type I CRISPR-Cas adaptive immune systems contain a multicomponent effector complex called Cascade, which degrades large stretches of DNA via Cas3 helicase-nuclease activity. Recently, a highly precise subtype I-F1 CRISPR-Cas system (HNH-Cascade) was found that lacks Cas3, the absence of which is compensated for by the insertion of an HNH endonuclease domain in the Cas8 Cascade component. Here, we describe the cryo-EM structure of Selenomonas sp. HNH-Cascade (SsCascade) in complex with target DNA and characterize its mechanism of action. The Cascade scaffold is complemented by the HNH domain, creating a ring-like structure in which the unwound target DNA is precisely cleaved. This structure visualizes a unique hybrid of two extensible biological systems-Cascade, an evolutionary platform for programmable DNA effectors, and an HNH nuclease, an adaptive domain with a spectrum of enzymatic activity.
履歴
登録2024年2月16日登録サイト: RCSB / 処理サイト: RCSB
改定 1.02024年8月7日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年8月28日Group: Data collection / Database references / カテゴリ: citation / em_admin
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_ASTM / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation.year / _em_admin.last_update
改定 1.22024年9月4日Group: Data collection / Database references / カテゴリ: citation / em_admin
Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first ..._citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last / _em_admin.last_update
改定 1.32024年9月11日Group: Data collection / Database references / カテゴリ: citation / em_admin / Item: _citation.page_last / _em_admin.last_update

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Cas7
B: Cas7
C: Cas7
D: Cas7
E: Cas7
F: Cas7
G: Cas8
H: Cas5
I: Cas6
N: Non-target strand DNA
R: crRNA
T: Target strand DNA


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)385,78012
ポリマ－385,78012
非ポリマー00
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

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タンパク質 , 4種, 9分子 ABCDEFGHI

#1: タンパク質
Cas7


分子量: 38700.172 Da / 分子数: 6 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Selenomonas sp. (バクテリア) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#2: タンパク質 Cas8


分子量: 43706.289 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
詳細: This protein is histidine tagged at N-terminal region from residues 1 to 41. Residues 42 to 385 are derived from natural Cas8 protein sequences.
由来: (組換発現) Selenomonas sp. (バクテリア) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#3: タンパク質 Cas5


分子量: 28703.135 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Selenomonas sp. (バクテリア) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#4: タンパク質 Cas6


分子量: 20735.873 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Selenomonas sp. (バクテリア) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)

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DNA鎖 , 2種, 2分子 NT

#5: DNA鎖 Non-target strand DNA


分子量: 20484.176 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) synthetic construct (人工物)
#7: DNA鎖 Target strand DNA


分子量: 20202.930 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) synthetic construct (人工物)

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RNA鎖 , 1種, 1分子 R

#6: RNA鎖 crRNA


分子量: 19746.777 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) synthetic construct (人工物)

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Target DNA-bound SsCascade / タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT
由来(天然)生物種: Selenomonas sp. (バクテリア)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
緩衝液pH: 8
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
急速凍結凍結剤: ETHANE

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 2500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 800 nm
撮影電子線照射量: 1.05 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k)

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解析

CTF補正タイプ: NONE
3次元再構成解像度: 3.5 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 80908 / 対称性のタイプ: POINT
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00624499
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.93333562
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d15.6789499
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0533726
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0093921

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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