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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8e3i | ||||||
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タイトル | CRYO-EM STRUCTURE OF the human MPSF IN COMPLEX WITH THE AUUAAA poly(A) signal | ||||||
要素 |
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キーワード | RNA BINDING PROTEIN / mRNA / 3'processing / polyadenylation / CPSF | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 co-transcriptional RNA 3'-end processing, cleavage and polyadenylation pathway / Inhibition of Host mRNA Processing and RNA Silencing / Processing of Intronless Pre-mRNAs / mRNA cleavage and polyadenylation specificity factor complex / collagen trimer / mRNA 3'-UTR AU-rich region binding / Transport of Mature mRNA Derived from an Intronless Transcript / mRNA 3'-end processing / mRNA 3'-end processing / tRNA processing in the nucleus ...co-transcriptional RNA 3'-end processing, cleavage and polyadenylation pathway / Inhibition of Host mRNA Processing and RNA Silencing / Processing of Intronless Pre-mRNAs / mRNA cleavage and polyadenylation specificity factor complex / collagen trimer / mRNA 3'-UTR AU-rich region binding / Transport of Mature mRNA Derived from an Intronless Transcript / mRNA 3'-end processing / mRNA 3'-end processing / tRNA processing in the nucleus / postreplication repair / RNA Polymerase II Transcription Termination / Processing of Capped Intron-Containing Pre-mRNA / fibrillar center / mRNA processing / sequence-specific double-stranded DNA binding / spermatogenesis / intracellular membrane-bounded organelle / enzyme binding / RNA binding / zinc ion binding / nucleoplasm / nucleus 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.53 Å | ||||||
データ登録者 | Gutierrez, P.A. / Wei, J. / Sun, Y. / Tong, L. | ||||||
資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: RNA / 年: 2022 タイトル: Molecular basis for the recognition of the AUUAAA polyadenylation signal by mPSF. 著者: Pedro A Gutierrez / Jia Wei / Yadong Sun / Liang Tong / 要旨: The polyadenylation signal (PAS) is a key sequence element for 3'-end cleavage and polyadenylation of messenger RNA precursors (pre-mRNAs). This hexanucleotide motif is recognized by the mammalian ...The polyadenylation signal (PAS) is a key sequence element for 3'-end cleavage and polyadenylation of messenger RNA precursors (pre-mRNAs). This hexanucleotide motif is recognized by the mammalian polyadenylation specificity factor (mPSF), consisting of CPSF160, WDR33, CPSF30, and Fip1 subunits. Recent studies have revealed how the AAUAAA PAS, the most frequently observed PAS, is recognized by mPSF. We report here the structure of human mPSF in complex with the AUUAAA PAS, the second most frequently identified PAS. Conformational differences are observed for the A1 and U2 nucleotides in AUUAAA compared to the A1 and A2 nucleotides in AAUAAA, while the binding modes of the remaining 4 nt are essentially identical. The 5' phosphate of U2 moves by 2.6 Å and the U2 base is placed near the six-membered ring of A2 in AAUAAA, where it makes two hydrogen bonds with zinc finger 2 (ZF2) of CPSF30, which undergoes conformational changes as well. We also attempted to determine the binding modes of two rare PAS hexamers, AAGAAA and GAUAAA, but did not observe the RNA in the cryo-electron microscopy density. The residues in CPSF30 (ZF2 and ZF3) and WDR33 that recognize PAS are disordered in these two structures. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8e3i.cif.gz | 324.5 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8e3i.ent.gz | 245.9 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 8e3i.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8e3i_validation.pdf.gz | 1.2 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8e3i_full_validation.pdf.gz | 1.2 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8e3i_validation.xml.gz | 52.9 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8e3i_validation.cif.gz | 80.2 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/e3/8e3i ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/e3/8e3i | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 27866MC 8e3qC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 161074.234 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CPSF1, CPSF160 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q10570 | ||
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#2: タンパク質 | 分子量: 27646.055 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CPSF4, CPSF30, NAR, NEB1 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: O95639 | ||
#3: RNA鎖 | 分子量: 3458.154 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Homo sapiens (ヒト) | ||
#4: タンパク質 | 分子量: 65912.039 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: WDR33, WDC146 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9C0J8 | ||
#5: 化合物 | 研究の焦点であるリガンドがあるか | Y | |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: human mPSF-AUUAAA RNA complex / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#4 / 由来: RECOMBINANT |
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分子量 | 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
由来(組換発現) | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
緩衝液 | pH: 8 / 詳細: 25 mM Tris (pH 8.0), 150 mM NaCl, and 5 mM DTT |
試料 | 濃度: 0.2 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: TFS KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): -2000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): -1000 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 100 µm |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 58 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 4607 |
-解析
ソフトウェア | 名称: PHENIX / バージョン: 1.19.2_4158: / 分類: 精密化 | ||||||||||||||||||||||||
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EMソフトウェア | 名称: PHENIX / カテゴリ: モデル精密化 | ||||||||||||||||||||||||
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 4332000 | ||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 2.53 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 858038 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 6DNH Accession code: 6DNH / Source name: PDB / タイプ: experimental model | ||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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