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基本情報
登録情報 | ![]() | |||||||||
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タイトル | Cryo-EM map of the human CTF18-RFC alone in the apo state (State 1) | |||||||||
![]() | Primary sharpen EM map | |||||||||
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![]() | DNA clamp loader complex / REPLICATION | |||||||||
機能・相同性 | ![]() response to organophosphorus / Ctf18 RFC-like complex / DNA replication factor C complex / Elg1 RFC-like complex / DNA clamp loader activity / positive regulation of DNA-directed DNA polymerase activity / Polymerase switching / Polymerase switching on the C-strand of the telomere / DNA duplex unwinding / HDR through Single Strand Annealing (SSA) ...response to organophosphorus / Ctf18 RFC-like complex / DNA replication factor C complex / Elg1 RFC-like complex / DNA clamp loader activity / positive regulation of DNA-directed DNA polymerase activity / Polymerase switching / Polymerase switching on the C-strand of the telomere / DNA duplex unwinding / HDR through Single Strand Annealing (SSA) / Impaired BRCA2 binding to RAD51 / DNA strand elongation involved in DNA replication / DNA synthesis involved in DNA repair / Presynaptic phase of homologous DNA pairing and strand exchange / PCNA-Dependent Long Patch Base Excision Repair / ATP-dependent activity, acting on DNA / Activation of ATR in response to replication stress / Translesion synthesis by REV1 / Translesion synthesis by POLK / Translesion synthesis by POLI / Gap-filling DNA repair synthesis and ligation in GG-NER / Recognition of DNA damage by PCNA-containing replication complex / Termination of translesion DNA synthesis / Translesion Synthesis by POLH / HDR through Homologous Recombination (HRR) / G2/M DNA damage checkpoint / Dual Incision in GG-NER / DNA-templated DNA replication / Dual incision in TC-NER / Gap-filling DNA repair synthesis and ligation in TC-NER / Processing of DNA double-strand break ends / DNA replication / Regulation of TP53 Activity through Phosphorylation / DNA repair / enzyme binding / ATP hydrolysis activity / DNA binding / nucleoplasm / ATP binding / membrane / nucleus / cytosol 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.35 Å | |||||||||
![]() | Wang F / He Q / Li H | |||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Cryo-EM reveals a nearly complete PCNA loading process and unique features of the human alternative clamp loader CTF18-RFC. 著者: Qing He / Feng Wang / Michael E O'Donnell / Huilin Li / ![]() 要旨: The DNA sliding clamp PCNA is a multipurpose platform for DNA polymerases and many other proteins involved in DNA metabolism. The topologically closed PCNA ring needs to be cracked open and loaded ...The DNA sliding clamp PCNA is a multipurpose platform for DNA polymerases and many other proteins involved in DNA metabolism. The topologically closed PCNA ring needs to be cracked open and loaded onto DNA by a clamp loader, e.g., the well-studied pentameric ATPase complex RFC (RFC1-5). The CTF18-RFC complex is an alternative clamp loader found recently to bind the leading strand DNA polymerase ε and load PCNA onto leading strand DNA, but its structure and the loading mechanism have been unknown. By cryo-EM analysis of in vitro assembled human CTF18-RFC-DNA-PCNA complex, we have captured seven loading intermediates, revealing a detailed PCNA loading mechanism onto a 3'-ss/dsDNA junction by CTF18-RFC. Interestingly, the alternative loader has evolved a highly mobile CTF18 AAA+ module likely to lower the loading activity, perhaps to avoid competition with the RFC and to limit its role to leading strand clamp loading. To compensate for the lost stability due to the mobile AAA+ module, CTF18 has evolved a unique β-hairpin motif that reaches across RFC2 to interact with RFC5, thereby stabilizing the pentameric complex. Further, we found that CTF18 also contains a separation pin to locally melt DNA from the 3'-end of the primer; this ensures its ability to load PCNA to any 3'-ss/dsDNA junction, facilitated by the binding energy of the E-plug to the major groove. Our study reveals unique structural features of the human CTF18-RFC and contributes to a broader understanding of PCNA loading by the alternative clamp loaders. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 117.9 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 25.9 KB 25.9 KB | 表示 表示 | ![]() |
FSC (解像度算出) | ![]() | 10.6 KB | 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 59.7 KB | ||
Filedesc metadata | ![]() | 7.4 KB | ||
その他 | ![]() ![]() ![]() ![]() | 62.2 MB 111.1 MB 116.1 MB 116.2 MB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 882.6 KB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 882.2 KB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 19.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 24.7 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | ![]() 8unjMC ![]() 8umtC ![]() 8umuC ![]() 8umvC ![]() 8umwC ![]() 8umyC ![]() 8un0C M: このマップから作成された原子モデル C: 同じ文献を引用 ( |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性 ![]() |
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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「今月の分子」の関連する項目 |
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マップ
ファイル | ![]() | ||||||||||||||||||||
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注釈 | Primary sharpen EM map | ||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.828 Å | ||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-追加マップ: Original unsharpen EM map
ファイル | emd_42406_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Original unsharpen EM map | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: Sharpen EM map by DeepEMhancer
ファイル | emd_42406_additional_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Sharpen EM map by DeepEMhancer | ||||||||||||
投影像・断面図 |
| ||||||||||||
密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: EM half map A
ファイル | emd_42406_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | EM half map A | ||||||||||||
投影像・断面図 |
| ||||||||||||
密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: EM half map B
ファイル | emd_42406_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | EM half map B | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
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試料の構成要素
-全体 : the human clamp loader CTF18_RFC
全体 | 名称: the human clamp loader CTF18_RFC |
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要素 |
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-超分子 #1: the human clamp loader CTF18_RFC
超分子 | 名称: the human clamp loader CTF18_RFC / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#5 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 300 KDa |
-分子 #1: Chromosome transmission fidelity protein 18 homolog
分子 | 名称: Chromosome transmission fidelity protein 18 homolog / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 107.523984 KDa |
組換発現 | 生物種: Insect cell expression vector pTIE1 (その他) |
配列 | 文字列: MEDYEQELCG VEDDFHNQFA AELEVLAELE GASTPSPSGV PLFTAGRPPR TFEEALARGD AASSPAPAAS VGSSQGGARK RQVDADLQP AGSLPHAPRI KRPRLQVVKR LNFRSEEMEE PPPPDSSPTD ITPPPSPEDL AELWGHGVSE AAADVGLTRA S PAARNPVL ...文字列: MEDYEQELCG VEDDFHNQFA AELEVLAELE GASTPSPSGV PLFTAGRPPR TFEEALARGD AASSPAPAAS VGSSQGGARK RQVDADLQP AGSLPHAPRI KRPRLQVVKR LNFRSEEMEE PPPPDSSPTD ITPPPSPEDL AELWGHGVSE AAADVGLTRA S PAARNPVL RRPPILEDYV HVTSTEGVRA YLVLRADPMA PGVQGSLLHV PWRGGGQLDL LGVSLASLKK QVDGERRERL LQ EAQKLSD TLHSLRSGEE EAAQPLGAPE EEPTDGQDAS SHCLWVDEFA PRHYTELLSD DFTNRCLLKW LKLWDLVVFG HER PSRKPR PSVEPARVSK EATAPGKWKS HEQVLEEMLE AGLDPSQRPK QKVALLCGPP GLGKTTLAHV IARHAGYSVV EMNA SDDRS PEVFRTRIEA ATQMESVLGA GGKPNCLVID EIDGAPVAAI NVLLSILNRK GPQEVGPQGP AVPSGGGRRR RAEGG LLMR PIICICNDQF APSLRQLKQQ AFLLHFPPTL PSRLVQRLQE VSLRQGMRAD PGVLAALCEK TDNDIRACIN TLQFLY SRG QRELSVRDVQ ATRVGLKDQR RGLFSVWQEV FQLPRAQRRR VGQDPALPAD TLLLGDGDAG SLTSASQRFY RVLHAAA SA GEHEKVVQGL FDNFLRLRLR DSSLGAVCVA LDWLAFDDLL AGAAHHSQSF QLLRYPPFLP VAFHVLFASS HTPRITFP S SQQEAQNRMS QMRNLIQTLV SGIAPATRSR ATPQALLLDA LCLLLDILAP KLRPVSTQLY STREKQQLAS LVGTMLAYS LTYRQERTPD GQYIYRLEPN VEELCRFPEL PARKPLTYQT KQLIAREIEV EKMRRAEASA RVENSPQVDG SPPGLEGLLG GIGEKGVHR PAPRNHEQRL EHIMRRAARE EQPEKDFFGR VVVRSTAVPS AGDTAPEQDS VERRMGTAVG RSEVWFRFNE G VSNAVRRS LYIRDLL UniProtKB: Chromosome transmission fidelity protein 18 homolog |
-分子 #2: Replication factor C subunit 2
分子 | 名称: Replication factor C subunit 2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 39.203207 KDa |
組換発現 | 生物種: Insect cell expression vector pTIE1 (その他) |
配列 | 文字列: MEVEAVCGGA GEVEAQDSDP APAFSKAPGS AGHYELPWVE KYRPVKLNEI VGNEDTVSRL EVFAREGNVP NIIIAGPPGT GKTTSILCL ARALLGPALK DAMLELNASN DRGIDVVRNK IKMFAQQKVT LPKGRHKIII LDEADSMTDG AQQALRRTME I YSKTTRFA ...文字列: MEVEAVCGGA GEVEAQDSDP APAFSKAPGS AGHYELPWVE KYRPVKLNEI VGNEDTVSRL EVFAREGNVP NIIIAGPPGT GKTTSILCL ARALLGPALK DAMLELNASN DRGIDVVRNK IKMFAQQKVT LPKGRHKIII LDEADSMTDG AQQALRRTME I YSKTTRFA LACNASDKII EPIQSRCAVL RYTKLTDAQI LTRLMNVIEK ERVPYTDDGL EAIIFTAQGD MRQALNNLQS TF SGFGFIN SENVFKVCDE PHPLLVKEMI QHCVNANIDE AYKILAHLWH LGYSPEDIIG NIFRVCKTFQ MAEYLKLEFI KEI GYTHMK IAEGVNSLLQ MAGLLARLCQ KTMAPVAS UniProtKB: Replication factor C subunit 2 |
-分子 #3: Replication factor C subunit 5
分子 | 名称: Replication factor C subunit 5 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 38.545512 KDa |
組換発現 | 生物種: Insect cell expression vector pTIE1 (その他) |
配列 | 文字列: METSALKQQE QPAATKIRNL PWVEKYRPQT LNDLISHQDI LSTIQKFINE DRLPHLLLYG PPGTGKTSTI LACAKQLYKD KEFGSMVLE LNASDDRGID IIRGPILSFA STRTIFKKGF KLVILDEADA MTQDAQNALR RVIEKFTENT RFCLICNYLS K IIPALQSR ...文字列: METSALKQQE QPAATKIRNL PWVEKYRPQT LNDLISHQDI LSTIQKFINE DRLPHLLLYG PPGTGKTSTI LACAKQLYKD KEFGSMVLE LNASDDRGID IIRGPILSFA STRTIFKKGF KLVILDEADA MTQDAQNALR RVIEKFTENT RFCLICNYLS K IIPALQSR CTRFRFGPLT PELMVPRLEH VVEEEKVDIS EDGMKALVTL SSGDMRRALN ILQSTNMAFG KVTEETVYTC TG HPLKSDI ANILDWMLNQ DFTTAYRNIT ELKTLKGLAL HDILTEIHLF VHRVDFPSSV RIHLLTKMAD IEYRLSVGTN EKI QLSSLI AAFQVTRDLI VAEA UniProtKB: Replication factor C subunit 5 |
-分子 #4: Replication factor C subunit 4
分子 | 名称: Replication factor C subunit 4 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 4 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 39.735711 KDa |
組換発現 | 生物種: Insect cell expression vector pTIE1 (その他) |
配列 | 文字列: MQAFLKGTSI STKPPLTKDR GVAASAGSSG ENKKAKPVPW VEKYRPKCVD EVAFQEEVVA VLKKSLEGAD LPNLLFYGPP GTGKTSTIL AAARELFGPE LFRLRVLELN ASDERGIQVV REKVKNFAQL TVSGSRSDGK PCPPFKIVIL DEADSMTSAA Q AALRRTME ...文字列: MQAFLKGTSI STKPPLTKDR GVAASAGSSG ENKKAKPVPW VEKYRPKCVD EVAFQEEVVA VLKKSLEGAD LPNLLFYGPP GTGKTSTIL AAARELFGPE LFRLRVLELN ASDERGIQVV REKVKNFAQL TVSGSRSDGK PCPPFKIVIL DEADSMTSAA Q AALRRTME KESKTTRFCL ICNYVSRIIE PLTSRCSKFR FKPLSDKIQQ QRLLDIAKKE NVKISDEGIA YLVKVSEGDL RK AITFLQS ATRLTGGKEI TEKVITDIAG VIPAEKIDGV FAACQSGSFD KLEAVVKDLI DEGHAATQLV NQLHDVVVEN NLS DKQKSI ITEKLAEVDK CLADGADEHL QLISLCATVM QQLSQNC UniProtKB: Replication factor C subunit 4 |
-分子 #5: Replication factor C subunit 3
分子 | 名称: Replication factor C subunit 3 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 5 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 40.614332 KDa |
組換発現 | 生物種: Insect cell expression vector pTIE1 (その他) |
配列 | 文字列: MSLWVDKYRP CSLGRLDYHK EQAAQLRNLV QCGDFPHLLV YGPSGAGKKT RIMCILRELY GVGVEKLRIE HQTITTPSKK KIEISTIAS NYHLEVNPSD AGNSDRVVIQ EMLKTVAQSQ QLETNSQRDF KVVLLTEVDK LTKDAQHALR RTMEKYMSTC R LILCCNST ...文字列: MSLWVDKYRP CSLGRLDYHK EQAAQLRNLV QCGDFPHLLV YGPSGAGKKT RIMCILRELY GVGVEKLRIE HQTITTPSKK KIEISTIAS NYHLEVNPSD AGNSDRVVIQ EMLKTVAQSQ QLETNSQRDF KVVLLTEVDK LTKDAQHALR RTMEKYMSTC R LILCCNST SKVIPPIRSR CLAVRVPAPS IEDICHVLST VCKKEGLNLP SQLAHRLAEK SCRNLRKALL MCEACRVQQY PF TADQEIP ETDWEVYLRE TANAIVSQQT PQRLLEVRGR LYELLTHCIP PEIIMKGLLS ELLHNCDGQL KGEVAQMAAY YEH RLQLGS KAIYHLEAFV AKFMALYKKF MEDGLEGMMF UniProtKB: Replication factor C subunit 3 |
-分子 #6: MAGNESIUM ION
分子 | 名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 3 / 式: MG |
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分子量 | 理論値: 24.305 Da |
-分子 #7: PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER
分子 | 名称: PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER / タイプ: ligand / ID: 7 / コピー数: 3 / 式: AGS |
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分子量 | 理論値: 523.247 Da |
Chemical component information | ![]() ChemComp-AGS: |
-分子 #8: ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE
分子 | 名称: ADENOSINE-5'-DIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 8 / コピー数: 1 / 式: ADP |
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分子量 | 理論値: 427.201 Da |
Chemical component information | ![]() ChemComp-ADP: |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
濃度 | 0.3 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.5 |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 280 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
-
電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 60.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD 最大 デフォーカス(公称値): 1.9000000000000001 µm 最小 デフォーカス(公称値): 1.2 µm |
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
-原子モデル構築 1
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT / 温度因子: 123 |
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得られたモデル | ![]() PDB-8unj: |